海洋來源放線菌HN-E31次生代謝產(chǎn)物的分離與鑒定

張 崗，莊玲萍，許 莉，趙 晶，葉子堅(jiān)，羅聯(lián)忠*

(1.廈門醫(yī)學(xué)院廈門市海洋醫(yī)用天然產(chǎn)物與細(xì)胞工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 福建廈門361023；2.廈門醫(yī)學(xué)院海洋生物醫(yī)藥資源福建省高等學(xué)校應(yīng)用技術(shù)工程中心，福建廈門361023；3.廈門大學(xué)福建省海陸界面生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/海洋與地球?qū)W院，福建廈門361102；4.廈門醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)系，福建廈門361023)

海洋微生物一直是生物活性化合物的重要來源[1]。其中，海洋放線菌次生代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)新穎，具有抗菌、抗腫瘤、殺蟲和酶抑制等多種活性,在海洋藥物研究中占據(jù)重要地位[2]。從海洋放線菌中挖掘和開發(fā)結(jié)構(gòu)新穎的活性產(chǎn)物，對(duì)于人類健康產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

鳥氨酸微菌屬在地球上分布較為廣泛，海洋[3]、土壤[4]等區(qū)域以及動(dòng)、植物體內(nèi)[5-6]均有發(fā)現(xiàn)，但該屬菌種代謝物質(zhì)的化學(xué)成分研究還鮮有報(bào)道。我們從南海深海海泥中分離獲得一株鳥氨酸微菌屬放線菌Ornithinimicrobiumsp.，命名為HN-E31，前期活性篩選發(fā)現(xiàn)其發(fā)酵產(chǎn)物具有抑制枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌生長(zhǎng)的活性(未發(fā)表)。為進(jìn)一步了解該菌株的活性代謝產(chǎn)物類型和應(yīng)用價(jià)值，本課題組對(duì)其發(fā)酵液乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行了較系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。從中發(fā)現(xiàn)了12個(gè)化合物，分別為：環(huán)(脯-纈)二肽(1)、環(huán)(脯-亮)二肽(2)、環(huán)(脯-異亮)二肽(3)、環(huán)(脯-苯丙)二肽(4)、環(huán)(亮-丙)二肽(5)、環(huán)(異亮-丙)二肽(6)、苯丙氨酸(7)、3-hydroxyacetyl-indole(8)、3-吲哚甲醛(9)、水楊酸(10)、尿嘧啶(11)和對(duì)羥基苯甲醛(12)，它們均為首次從鳥氨酸微菌屬中分離獲得。本文對(duì)化合物的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定工作進(jìn)行報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AV-600型超導(dǎo)核磁共振譜儀，Bruker公司；Nexera X2 LC-30AD/8050型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津公司；QuickSep-50半制備液相色譜儀，北京慧德易科技有限責(zé)任公司；1260分析型液相色譜儀核磁共振儀，美國Agilent公司；反相YMC Pack ODS-A半制備色譜柱、YMC Pack ODS反相填料(5 μm，250 mm×10 mm)，YMC公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(R-210)，瑞士Buchi公司；大容量旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，Hei-VAP industrial，德國Heidolph公司。柱層析硅膠，青島海洋化工廠；Sephadex LH-20，Amersham pharmacia biotech,AB公司。色譜用甲醇、乙腈，美國TEDIA試劑公司。其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 生物材料

實(shí)驗(yàn)菌株分離自2015年5月在中國海南儋州洋浦灣磷槍石島采集的深海泥。16s rDNA序列測(cè)定確定為放線菌Ornithinimicrobiumsp.，命名為HN-E31，菌種現(xiàn)保存于中國海洋微生物菌種保藏管理中心，保藏編號(hào)為MCCC 1K03328。

1.3 液體發(fā)酵

從超低溫冰箱(-80 ℃)中取出凍存于30%甘油的放線菌菌株HN-E31，采用平板劃線法連續(xù)活化3代。挑選單菌落接種于100 mL的2216E液體培養(yǎng)基(蛋白胨5 g，酵母膏1 g，磷酸高鐵0.01 g，海水1 000 mL，pH7.6～7.8，121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min)，恒溫?fù)u床(28 ℃，180 r/min)培養(yǎng)72 h，制備種子液。將該種子液按體積分?jǐn)?shù)1%的接種量接種于含2 000 mL 2216E液體培養(yǎng)基的三角瓶中，共接種100 L，在28 ℃、180 r/min的條件下?lián)u床培養(yǎng)7 d，發(fā)酵液于10 ℃，8 000 r/min離心15 min，收集上清液。

1.4 提取分離

發(fā)酵液上清液用等體積的乙酸乙酯萃取3次，合并3次萃取物，40 ℃下減壓濃縮至干后，加入1 L甲醇復(fù)溶，過濾，濾液于40 ℃減壓濃縮至干，得總萃取物28.6 g。取20 g乙酸乙酯萃取物用100mL甲醇-乙酸乙酯混合溶劑溶解并上樣于Sephadex LH-20凝膠柱色譜柱(150 cm×5 cm)中，以甲醇作為洗脫劑，流速為36 mL/h，洗脫組分用薄層色譜展開并顯色(10%硫酸乙醇)，合并斑點(diǎn)相同餾分，共分為5個(gè)粗組分(A-E)。

粗組分C(11.1 g)上ODS反相柱色譜(20 cm×5 cm)分離，用10%到100%濃度的甲醇水溶液梯度洗脫，共分為8個(gè)部分(C1-C8)，C5(0.14 g)組分經(jīng)semi-HPLC純化(甲醇∶水，15∶85，1.5 mL/min)得到化合物1(12.2 mg)、5(2.4 mg)、6(2.1 mg)和12(4.1 mg)；C7(0.50 g)組分經(jīng)semi-HPLC純化(甲醇∶水，20∶80，1.5 mL/min)得到化合物2(4.2 mg)、3(3.7 mg)、4(3.5 mg)和9(2.8 mg)；C6(0.064 g)組分經(jīng)semi-HPLC純化(甲醇∶水，17∶83，1.5 mL/min)得到化合物8(3.2 mg)、10(4.1 mg)；C2組分經(jīng)semi-HPLC純化(甲醇∶水，5∶95，1.5 mL/min)得到化合物7(3.0 mg)。C1(0.20 g)組分經(jīng)semi-HPLC純化(Hilic Silica柱，98%乙腈，1.5 mL/min)得到化合物11(1.4 mg)。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色無定形粉末；ESI-MS 給出了m/z為197.0[M+H]+的準(zhǔn)分子離子峰；NMR碳譜和DEPT譜給出了10個(gè)碳信號(hào)，包括2個(gè)甲基信號(hào)δ17.3、15.5；3個(gè)亞甲基信號(hào)δ44.8、21.7、28.7；3個(gè)次甲基信號(hào)δ60.5、58.5、28.4，其中前兩個(gè)碳上可能連結(jié)雜原子；2個(gè)羰基信號(hào)δ171.4、166.6。根據(jù)核磁和質(zhì)譜數(shù)據(jù)，推斷分子式為C10H16N2O2，確定分子中含有4個(gè)不飽合度，并含有雙環(huán)結(jié)構(gòu)。結(jié)合1H NMR中顯示的δ4.21(1H，t，J= 7.8 Hz)、4.04(1H，m) 兩個(gè)氨基酸位氫特征信號(hào)，推測(cè)化合物1為環(huán)二肽類物質(zhì)。13C NMR圖譜中171.4(s)，44.8(t)，21.7(t)，28.7(t)和60.5(d)為脯氨酸片段特征信號(hào)，而166.6(s)，58.5(d)，28.4(d)，17.3(q)，15.5(q)為纈氨酸片段特征信號(hào)。最后將1的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)比[7]，鑒定化合物1為環(huán)(脯-纈)二肽?；衔?的波譜數(shù)據(jù)如下：ESI-MSm/z197.0[M+H]+；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：3.57(1H，m，H-3a)，3.50(1H，m，H-3b)，1.92(2H，m，H2-4)，2.49(1H，m，H-5a)，2.32(1H，m，H-5b)，4.21(1H，t，J=7.8 Hz，H-6)，4.04(1H，m，H-9)，2.03(1H，m，H-10)，1.09(3H，d，J=6.6 Hz，H3-11)，0.94(3H，d，J=6.6 Hz，H3-12)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：171.4(s，C-1)，44.8(t，C-3)，21.7(t，C-4)，28.7(t，C-5)，60.5(d，C-6)，166.6(s，C-7)，58.5(d，C-9)，28.4(d，C-10)，17.3(q，C-11)，15.5(q，C-12)。

化合物2 白色無定形粉末；ESI-MS 給出了m/z為211.2[M+H]+的準(zhǔn)分子離子峰；結(jié)合1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)，推斷分子式為C11H18N2O2，比化合物1多了一個(gè)-CH2-?；衔?的波譜數(shù)據(jù)與1非常相似，比如1H NMR中顯示的δ4.26(1H，t，J=7.8 Hz)、4.14(1H，m) 氨基酸位氫特征信號(hào)，13C NMR譜中顯示的δ171.4(s)，45.1(t)，22.2(t)，27.6(t)，58.7(d)為脯氨酸片段特征信號(hào)，此外，1H NMR數(shù)據(jù)顯示了兩個(gè)雙峰甲基信號(hào)δ0.96(3H，d，J=6.6 Hz)，0.95(3H，d，J=6.6 Hz)，參照文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[8]，鑒定化合物為環(huán)(脯-亮)二肽?；衔?的波譜數(shù)據(jù)如下：ESI-MSm/z211.2[M+H]+；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：3.51(2H，m，H2-3)，2.00(1H，m，H-4a)，1.93(1H，m，H-4b)，2.30(1H，m，H-5a)，2.03(1H，m，H-5b)，4.26(1H，t，J=7.8 Hz，H-6)， 4.14(1H，m，H-9)，1.88(1H，m，H-10a)，1.52(1H，m，H-10b)，1.89(1H，m，H-11)，0.96(3H，d，J=6.6 Hz，H3-12)，0.95(3H，d，J=6.6 Hz，H3-13)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：171.4(s，C-1)，45.1(t，C-3)，22.2(t，C-4)，27.6(t，C-5)，58.7(d，C-6)，167.5(s，C-7)，53.2(d，C-9)，38.1(t，C-10)，24.4(d，C-11)，22.0(q，C-12)，20.8(q，C-13)。

化合物3 白色無定形粉末；ESI-MS 給出了m/z為211.2[M+H]+的準(zhǔn)分子離子峰；結(jié)合1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)，推斷分子式為C11H18N2O2，與化合物2互為同分異構(gòu)體。3的1H NMR譜圖中也顯示了δ4.26(1H，t，J=7.8 Hz)、4.14(1H，m) 氨基酸位氫特征信號(hào)，13C NMR譜則顯示的δ172.3(s)，45.0(t)，21.8(t)，28.3(t)，59.7(d)脯氨酸片段特征信號(hào)，與化合物2不同的是，其1H NMR數(shù)據(jù)顯示了1個(gè)雙峰甲基信號(hào)δ1.06(3H，d，J=7.2 Hz)和1個(gè)三峰甲基信號(hào)δ0.93(3H，t，J=7.2 Hz)，與之相吻合的是13C NMR譜上顯示的異亮氨酸片段信號(hào)：δ166.1(s)，58.5(d)，24.1(d)，35.7(d)，14.2(q)，11.1(q)。參照文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[7]，鑒定化合物為環(huán)(脯-異亮)二肽。化合物3的波譜數(shù)據(jù)如下：ESI-MSm/z211.2[M+H]+；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：3.55(1H，m，H-3a)，3.51(1H，m，H-3b)，1.96(1H，m，H-4a)，1.92(1H，m，H-4b)，2.32(1H，m，H-5a)，2.17(1H，m，H-5b)，4.26(1H，t，J=7.8 Hz，H-6)， 4.06(1H，m，H-9)，2.03(1H，m，H-10)，1.45(1H，m，H-11a)，1.32(1H，m，H-11b)，0.93(3H，t，J=7.2 Hz，H3-12)，1.06(3H，d，J=7.2 Hz，H3-13)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：172.3(s，C-1)，45.0(t，C-3)，21.8(t，C-4)，28.3(t，C-5)，59.7(d，C-6)，166.1(s，C-7)，58.5(d，C-9)，24.1(d，C-10)，35.7(d，C-11)，14.2(q，C-12)，11.1(q，C-13)。

化合物4 白色無定形粉末；ESI-MS 給出了m/z為245.2[M+H]+的準(zhǔn)分子離子峰；4的1H NMR譜圖中顯示了單取代苯環(huán)特征信號(hào)：δ7.17(2H，m)，7.30(3H，m)。而δ4.26(1H，t，J=7.8 Hz)、3.50(1H，m)為兩個(gè)氨基酸位氫特征信號(hào)。13C NMR譜顯示了脯氨酸片段特征信號(hào)：δ171.3(s)，46.4(t)，22.7(t)，29.8(t)，60.0(d)；苯丙氨酸片段特征信號(hào)：167.7(s)，59.4(d)，41.2(d)，136.7(s)，129.6(d)，131.3(d)，128.5(d)，參照文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[9]，鑒定化合物4為環(huán)(脯-苯丙)二肽?；衔?的波譜數(shù)據(jù)如下：ESI-MSm/z245.2[M+H]+；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：3.29(1H，m，H-3a)，2.60(1H，m，H-3b)，1.67(2H，m，H2-4)，2.03(1H，m，H-5a)，1.89(1H，m，H-5b)，4.26(1H，t，J=7.8 Hz，H-6)，3.50(1H，m，H-9)，3.20(1H，dd，J=8.4,4.8 Hz，H-10a)，2.98(1H，dd，J=7.7,4.8 Hz，H-10b)，7.17(2H，m，H-2′，6′)，7.30(3H，m，H-3′，4′，5′)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：171.3(s，C-1)，46.4(t，C-3)，22.7(t，C-4)，29.8(t，C-5)，60.0(d，C-6)，167.7(s，C-7)，59.4(d，C-9)，41.2(d，C-10)，136.7(s，C-1′)，129.6(d，C-2′，6′)，131.3(d，C-3′，5′)，128.5(d，C-4′)。

化合物5 白色無定形粉末；化合物5的1H NMR譜圖中顯示了δ3.99(1H，m)、3.95(1H，m) 兩個(gè)氨基酸位氫特征信號(hào)，3個(gè)雙峰甲基信號(hào)：δ0.99(3H，d，J=6.6 Hz)，0.97(3H，d，J=6.6 Hz)，1.45(3H，d，J=7.2 Hz)。13C NMR譜顯示了亮氨酸片段特征信號(hào)：δ171.3(s)，51.9(d)，45.1(t)，25.3(d)，23.5(q)，22.1(q)；丙氨酸片段特征信號(hào)：171.0(s)，54.6(d)，20.9(q)，結(jié)合ESI-MS 給出的m/z為185.2[M+H]+的準(zhǔn)分子離子峰，并參照文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[10]，鑒定化合物5結(jié)構(gòu)為環(huán)(亮-丙)二肽?；衔锊ㄗV數(shù)據(jù)：ESI-MSm/z185.2[M+H]+；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：3.99(1H，m，H-2)，1.74(1H，m，H-3a)，1.64(1H，m，H-3b)，1.85(1H，m，H-4)，4.26(1H，t，J=7.8 Hz，H-6)，0.99(3H，d，J=6.6 Hz，H3-5)，0.97(3H，d，J=6.6 Hz，H3-6)，3.95(1H，m，H-2′)，1.45(3H，d，J=7.2 Hz，H3-3′)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：171.3(s，C-1)，51.9(d，C-2)，45.1(t，C-3)，25.3(d，C-4)，23.5(q，C-5)，22.1(q，C-6)，171.0(s，C-1′)，54.6(d，C-2′)，20.9(q，C-3′)。

化合物6 ESI-MS 給出了m/z為185.2[M+H]+的準(zhǔn)分子離子峰；結(jié)合1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)，推斷分子式為C9H16N2O2，與化合物5互為同分異構(gòu)體。核磁數(shù)據(jù)顯示，化合物6與5結(jié)構(gòu)非常相似，最大區(qū)別為6中含有兩個(gè)雙峰甲基δ1.02(3H，d，J=6.6 Hz)、1.44(3H，d，J=6.6 Hz)和1個(gè)三峰甲基0.95(3H，t，J=7.2 Hz)，而13C NMR譜顯示了異亮氨酸片段特征信號(hào)：δ171.3(s)，51.7(d)，40.3(d)，25.6(t)，12.2(q)，15.6(q)。參照文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[10]，鑒定化合物6為環(huán)(異亮-丙)二肽?；衔?的波譜數(shù)據(jù)如下：ESI-MSm/z185.2[M+H]+；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：4.04(1H，m，H-2)，1.95(1H，m，H-3)，1.54(1H，m，H-4a)，1.26(1H，m，H-4b)，0.95(3H，t，J=7.2 Hz，H3-5)，1.02(3H，d，J=6.6 Hz，H3-6)，3.90(1H，m，H-2′)，1.44(3H，d，J=6.6 Hz，H3-3′)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：171.3(s，C-1)，51.7(d，C-2)，40.3(d，C-3)，25.6(t，C-4)，12.2(q，C-5)，15.6(q，C-6)，169.2(s，C-1′)，60.9(d，C-2′)，20.9(q，C-3′)。

化合物7 茚三酮反應(yīng)顯陽性。ESI-MSm/z164.2[M-H]-；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：7.33(4H，m，H-2′，H-3′，H-5′，H-6′)，7.23(1H，m，H-4′)，3.77(1H，dd，J=9.0，4.2 Hz， H-2)，3.31(1H，m，H-3b)，2.98(1H，dd，J=14.4，9 Hz，H-3b)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：173.7(s，C-1)，137.3(s，C-1′)，130.4(d，C-2′，6′)，130.0(d，C-3′，5′)，128.4(d，C-4′)，57.9(d，C-2)，38.3(t，C-3)。以上波譜數(shù)據(jù)與李雯等人[11]的報(bào)道一致，鑒定化合物7為苯丙氨酸。

化合物8 白色無定形粉末。1H NMR中顯示δ8.20(1H)，8.22(1H，d，J=6.0 Hz)，7.45(1H，d，J=6.0 Hz)，7.22(2H，m) 一組芳香質(zhì)子信號(hào)以及一個(gè)亞甲基信號(hào)δ4.69。13C NMR譜顯示了8個(gè)不飽和碳骨架信號(hào)：138.2(s)，134.0(d)，126.9(s)，124.4(d)，123.3(d)，122.7(d)，114.9(s)和112.9(d)，結(jié)合氫譜數(shù)據(jù)推測(cè)8為吲哚生物堿類衍生物，另外，碳譜上還顯示一個(gè)羰基信號(hào)δ195.9 和一個(gè)亞甲基信號(hào)δ66.3。HMBC譜中顯示δ4.69的亞甲基信號(hào)分別與羰基碳(δ195.9)和吲哚環(huán)3位碳(δ114.9)相關(guān)，吲哚環(huán)2位氫(δ8.20)則分別與羰基碳、吲哚環(huán)3位碳(δ114.9)以及吲哚環(huán)3a位碳(δ126.9)信號(hào)相關(guān)，表明羰基碳連接在吲哚環(huán)3位，且旁邊連有亞甲基，結(jié)合ESI-MS給出的m/z174.2[M-H]-1信號(hào)并與文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)[12-13]對(duì)比，鑒定化合物8為3-hydroxyacetyl-indole。ESI-MSm/z174.2[M-H]-1；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：8.20(1H，s，H-2)，8.22(1H，d，J=6.0 Hz，H-4)，7.45(1H，d，J=6.0 Hz，H-7)，7.22(2H，m，H-5,H-6)，4.69(t，2H，H2-9)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：195.9(s，C-8)，138.2(s，C-7a)，134.0(d，C-2)，126.9(s，C-3a)，124.4(d，C-6)，123.3(d，C-5)，122.7(d，C-4)，114.9(s，C-3)，112.9(d，C-7)，66.3(t，C-9)。

化合物9 白色無定形粉末。ESI-MSm/z144.1[M-H]-1；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：9.89(1H，s，H-8)，8.16(1H，d，J=6.0 Hz，H-7)，8.10(1H，s，H-2)，7.48(1H，d，J=6.0 Hz，H-4)，7.24(2H，m，H-5,H-6)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：186.0(d，C-8)，138.3(d，C-2)，137.5(s，C-7a)，124.3(s，C-3a)，123.6(d，C-6)，122.2(d，C-5)，121.0(d，C-4)，118.7(s，C-3)，111.7(d，C-7)。以上波譜數(shù)據(jù)與袁莉等[14]的報(bào)道一致，鑒定化合物9為3-吲哚甲醛。

化合物10 白色結(jié)晶性粉末，三氯化鐵反應(yīng)顯陽性，提示分子內(nèi)含有酚羥基。ESI-MSm/z137.1[M-H]-；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：7.81(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，7.22(1H，t，J=8.4 Hz，H-4)，6.73(1H，d，J=8.4 Hz，H-3)，6.56(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)；以上波譜數(shù)據(jù)與賈陸等[15]的報(bào)道一致，鑒定化合物10為水楊酸。

化合物11 ESI-MSm/z117.1[M+H]+；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：5.62(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，7.43(1H，d，J=7.8 Hz，H-6)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：151.3(s，C-2)，164.2(s，C-4)，100.4(d，C-5)，142.8(d，C-6)。以上波譜數(shù)據(jù)與鄒崢嶸等[16]的報(bào)道一致，鑒定化合物11為尿嘧啶。

化合物12 白色結(jié)晶性粉末。ESI-MSm/z121.1[M+H]+；1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ：9.76(1H，s，-CHO)，7.77(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.91(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)；13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ：192.9(s，-CHO)，165.2(s，C-4)，133.5(d，C-2，6)，130.2(s，C-1)，116.9(d，C-3，5)。以上波譜數(shù)據(jù)與鄭麗花等[17]的報(bào)道一致，鑒定化合物12為對(duì)羥基苯甲醛。

圖1 化合物1-12的分子結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of compounds 1-12

3 結(jié)論與討論

從采自中國南海的鳥氨酸微菌屬放線菌Ornithinimicrobiumsp.(HN-E31)的發(fā)酵液中首次分離獲得12個(gè)化合物，包括6個(gè)環(huán)二肽類物質(zhì)(1～6)，1個(gè)氨基酸(7)，2個(gè)吲哚生物堿(8，9)，1個(gè)酚酸類化合物(10)，1個(gè)核苷酸類化合物(11)，1個(gè)芳香醛類化合物(12)。諸多報(bào)道證實(shí)，本研究中所得的部分化合物具有抑制病原微生物生長(zhǎng)活性?；衔?-4對(duì)革蘭氏陽性菌如金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌有弱抑菌活性，MIC值分別在7.2～18.8 μg/mL和8.7～18.2 μg/mL[18]。化合物1-4還對(duì)鰻弧菌有強(qiáng)烈的抑菌活性(MIC：0.03～0.14 μg/mL),該活性的表達(dá)要求抗菌環(huán)二肽中應(yīng)至少存在一個(gè)D型氨基酸殘基[19]?；衔?、4和11對(duì)五種海洋污損細(xì)菌具有選擇性的抑菌活性[20]。化合物2對(duì)耐萬古霉素腸球菌有抑菌作用[21]?；衔?對(duì)稻瘟霉有抑制活性，MIC值為4.8 μg/mL[22]。化合物12對(duì)白念珠菌和金黃色葡萄球菌顯示了弱抑菌作用[23]并在體外顯示微弱的選擇性抗瘧活性[24]。化合物9對(duì)大腸桿菌顯示了中等強(qiáng)度的抑制活性[25]。這些研究報(bào)道結(jié)果與HN-E31發(fā)酵液的抑菌活性有一定的關(guān)聯(lián)性，筆者將繼續(xù)關(guān)注所得化合物的抑菌活性。本研究豐富了對(duì)鳥氨酸微菌屬放線菌次生代謝產(chǎn)物數(shù)量和種類的認(rèn)識(shí)，對(duì)該菌株的后續(xù)開發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)。

致謝：廈門大學(xué)藥學(xué)院孫翠玲老師代測(cè)化合物NMR圖譜數(shù)據(jù)，謹(jǐn)致謝意！