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    蒙醫(yī)蒜變劑瀉藥對阿霉素致大鼠腎病綜合征模型局灶性病變的影響△

    2018-11-20 08:13:18薩如拉王青春
    中國民族醫(yī)藥雜志 2018年8期
    關(guān)鍵詞:瀉藥局灶蒙醫(yī)

    張 全 薩如拉 王青春

    (內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010056)

    原發(fā)性腎病綜合征(NS)由多種疾病組成,主要包括:微小病變腎病(MCD)、局灶節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)、膜性腎病、IgA腎病、膜增生性腎小球腎炎等[1]。在臨床實踐中,慢性腎小球腎炎腎病綜合征是一種常見疾病,也是導(dǎo)致終未期腎病(ESRD)最常見的病因,兒童多見。診斷標(biāo)準(zhǔn)為大量尿蛋白、低蛋白血癥、水腫、高血脂等特點。

    局灶階段性腎小球硬化 (FSGS) 在兒童腎病綜合征中約占5%,臨床常表現(xiàn)為激素耐藥或激素依賴,很快進展為終末期腎病 (ESRD) 并需行腎臟替代治療。兒童ESRD中20%由FSGS引起,一般認(rèn)為10~15 年內(nèi)2/3的病例已進展至ESRD[2]。目前尚缺乏治療FSGS的有效藥物。臨床研究表明,蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”治療腎病綜合征局灶性病變臨床療效確切,但其作用機制尚未明確。為了進一步開發(fā)和利用蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”,筆者觀察了蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”對阿霉素致腎病大鼠局灶性病變的治療作用,探討了相關(guān)機制。

    1 材料

    1.1 實驗動物 清潔級SD大鼠60只,體重(200 20g),雄性,由北京維通利華實驗技術(shù)有限公司提供[動物合格證號:SCXK(京)2014—0003]大鼠飼養(yǎng)和實驗均在內(nèi)蒙古自治區(qū)國際蒙醫(yī)醫(yī)院創(chuàng)新蒙醫(yī)藥工程研究中心進行。

    1.2 藥物及試劑 蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”是以大蒜、金柯子、肉蔻、紅花、巴豆、冰片、牛奶等組成。制作方法,水煎、過濾、濃縮至2.5g/ mL,裝入瓶中待用。注射用鹽酸多柔比克(ADR 阿霉素批號031106);戊巴比妥鈉由佛山市化工實驗廠提供。IL-8、IL-13試劑盒由美國R&D公司生產(chǎn)(96T,貨號201308)。

    1.3 主要儀器 全自動血液生化分析儀(美國實驗儀器公司生產(chǎn)),721 紫外分光光度儀(美國PACKA.Rn 公司生產(chǎn)),透射電鏡(JEM-1200EX),ST16R臺式高速冷凍離心機(由美國Thermo公司生產(chǎn))。

    2 方法

    2.1 分組及造模 參照Bertani[3]氏方法,將60只小鼠隨機分為6組,每組10只,對照組,模型組,陽性對照組,蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”高劑量、中劑量、低劑量組,除對照組之外,其余各組大鼠尾靜脈注射ADR 4mg/kg,1W 后,第二次注射3.5mg/kg,對照組用相同的方法注射相同體積的生理鹽水,復(fù)制多柔比星微小病變型腎病大鼠模型。

    2.2 給藥 自第二次注射ADR 后次日起給藥,蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”高、中、低劑量組(5.5gkg-1d-1、2.25gkg-1d-1、0.63gkg-1d-1)、陽性對照藥(腎炎四味片,1.296gkg-1d-1),對照組、模型組給予等體積生理鹽水作為對照,灌胃量3mL(kgd-1)。各組均連續(xù)給藥21d。

    2.3 指標(biāo)檢測

    2.3.1 一般情況 一般情況觀察大鼠的精神狀態(tài)、體重、體毛、進食量、飲水量、二便及活動情況等。

    2.3.2 24h尿蛋白檢查 將大鼠單獨喂養(yǎng)在代謝籠中,收集24h尿液,記錄尿量,分別于第7 d和第14 d、第21 d用比色法測定大鼠24h 尿蛋白定量。尿蛋白定量(mg/dL)=比色結(jié)果×100×6.43。

    2.3.3 IL-8、IL-13的檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附測定法測定血清IL-8、IL-13,具體步驟按照試劑說明書。

    2.3.4 腎組織形態(tài)學(xué)觀察 腎臟形態(tài)學(xué)檢查實驗第6周末殺檢。取少量腎皮質(zhì)組織,用2%戊二醛固定30min,再用1%鋨酸固定1h,脫水,常規(guī)包埋,制作超薄切片,鈾-鉛雙染色,用電鏡觀察。

    3 結(jié)果

    3.1 一般情況 一般情況除對照組外,尾靜脈注射ADR的各組大鼠均有不同程度的腹瀉,攝食減少,精神萎靡,活動減少,體毛干枯不齊,尾部蒼白粗糙,甚至爛尾等現(xiàn)象,治療組大鼠一般情況較好。

    3.2 各組24h 尿蛋白的比較 給藥后7、14、21 d,模型組大鼠尿蛋白量進行性升高,明顯高于對照組(P<0.01);給藥后第7d,蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”各組尿蛋白定量均較同期模型組降低,但無顯著性差異:給藥后14 d,蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”各組明顯低于模型組,有顯著性差異(P<0.05),21d 后蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”各組治療作用最為顯著(P<0.01),表1。

    表1 各組24h 尿蛋白的比較

    注:與同期對照組比較 ,#P<0.05,##P<0.01,與同期模型組比較 *P<0.05,**P<0.01。

    3.3 各組血清IL-8、IL-13的比較 造模后,模型組大鼠血清IL-8升高,IL-13降低,與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);給藥后,與模型組比較,蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”各組IL-8降低,IL-13 升高(P<0.05),其中蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”高劑量組尤為顯著,但各組間無量效關(guān)系。提示,蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”能顯著改炎癥因子的失調(diào),表2。

    表2 各組血清IL-8、IL-13的比較

    注:與同期對照組比較#P<0.05,##P<0.01,與同期模型對照組比較*P<0.05,**P<0.01。

    3.4 腎組織形態(tài)學(xué)觀察 電鏡顯示,對照組鼠腎小球上皮的足突清楚可見,內(nèi)皮窗孔清晰,基底膜均勻完整。模型組鼠腎小球上皮的足突廣泛融合。蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”高劑量組鼠腎小球上皮的足突融合較模型組明顯減輕,僅局部融合,圖1。

    4 討論

    腎病綜合征發(fā)病主要與免疫機制有關(guān),體液免疫在腎小球腎炎中的作用已被證實,抗體與腎小球的結(jié)構(gòu)成分結(jié)合或循環(huán)免疫復(fù)合物沉積于腎小球內(nèi),通過補體活化和炎癥細胞反應(yīng)導(dǎo)致組織損傷。細胞免疫在介導(dǎo)腎小球損傷中也起重要作用,T細胞在增值和非增值性腎小球病變中起作用。同時,原發(fā)性腎小球腎炎多種病灶伴間質(zhì)大量T細胞及巨噬細胞浸潤,與腎小球功能失常,腎小球硬化等有關(guān)[4]。

    腎小球損傷起動后,通過浸潤細胞和腎小球固有細胞產(chǎn)生多種細胞因子和其他炎癥介質(zhì),這些炎癥介質(zhì)又作用于腎臟固有細胞及局部浸潤炎癥細胞,造成炎癥反應(yīng)的瀑布效應(yīng)。致炎性細胞因子(proinflammatory factors)與抗炎性細胞因子(anti-inflammatory factors)的相互作用可能決定腎小球炎癥的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。腎小球腎炎發(fā)病機制還與血流動力學(xué)改變和遺傳因素等有關(guān)。

    IL-8是一種重要的趨化因子,對炎癥部位炎性細胞的浸潤積聚和組織損傷起重要作用。IL-13主要作用為抑制炎癥反應(yīng)。兩者均參與細胞因子網(wǎng)絡(luò),調(diào)節(jié)體內(nèi)免疫平衡[5]。

    蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”是著名老蒙醫(yī)阿日木扎用來治療腎病綜合征的良方,是以大蒜、金柯子、肉蔻、紅花、巴豆、冰片、牛奶等組成的制劑,主治3種水腫病,虛、寒型浮腫,對從下肢開始浮腫到胸腔的疾病具有很好的作用。它以蒙醫(yī)基礎(chǔ)理論為指導(dǎo),通過腸道、尿道將病變組織的毒物、代謝物排出人體,調(diào)節(jié)體素,從而治療該疾病,多年的臨床實踐表明,蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”治療局灶階段性腎小球硬化具有獨特效果[6]。

    本研究結(jié)果表明,蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”能顯著改善24h尿蛋白排泄量,減輕腎臟損害,緩解腎組織局灶性病變,而其可能與調(diào)節(jié)趨化因子IL-8和抗炎性因子IL-13網(wǎng)絡(luò)機制,減少體液免疫反應(yīng)有關(guān)。

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