基于GC-MS的氣血雙補(bǔ)酒揮發(fā)性化學(xué)成分研究*

陳林偉，王 琴，彭德熹，袁成業(yè)，蔡寶昌，王 翼，王姝梅

（1．南京中醫(yī)藥大學(xué)泰州附屬醫(yī)院，泰州 225300；2．南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京 210023；3．南京理工大學(xué)泰州科技學(xué)院，泰州 225300）

氣血雙補(bǔ)酒是江蘇省中醫(yī)院名老中醫(yī)孟景春教授的臨床經(jīng)驗(yàn)方，是由人參、黃芪、當(dāng)歸、炒白芍、陳皮、玉竹、酒黃精、制何首烏、枸杞子9味中藥組成的復(fù)方制劑，具有補(bǔ)益氣血、通陽(yáng)散結(jié)、復(fù)脈固脫等功效，臨床上常用于治療心力衰竭、心肌缺血、冠心病、心絞痛、免疫力低下以及惡性腫瘤等疾病[1－2]。國(guó)內(nèi)外已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)其提取工藝、化學(xué)成分以及微量元素進(jìn)行了分析研究，該復(fù)方制劑含有大量的揮發(fā)性成分，對(duì)其治療心血管疾病有著重要的作用，但目前文獻(xiàn)中并未見(jiàn)對(duì)本方所含揮發(fā)性化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)報(bào)道，因此本研究采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC－MS）分析研究氣血雙補(bǔ)酒中的揮發(fā)性化學(xué)成分，為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究和質(zhì)量控制提供一定的參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

儀器型號(hào)為Agilent5975CMSDGC－MS，包括7693自動(dòng)進(jìn)樣器；乙酸乙酯（分析純，批號(hào)：20140201，南京維之誠(chéng)化學(xué)試劑有限公司）；無(wú)水硫酸鈉（分析純，批號(hào)：20140501，南京化學(xué)試劑有限公司）；娃哈哈純凈水；氣血雙補(bǔ)酒樣品來(lái)自南京中醫(yī)藥大學(xué)泰州附屬醫(yī)院制劑室；復(fù)方中各單味藥經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)蔡寶昌教授鑒定。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 揮發(fā)油的提取 稱取氣血雙補(bǔ)酒1 000 mL，置于2 000 mL圓底燒瓶中，水蒸氣蒸餾提取10 h，至揮發(fā)油不再增加，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水后得到揮發(fā)油，同法提取人參、黃芪、當(dāng)歸、炒白芍、陳皮、玉竹、酒黃精、制何首烏、枸杞子，得到各藥材的揮發(fā)油，本實(shí)驗(yàn)揮發(fā)油提取率為5．1%。以上揮發(fā)油溶液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水，通過(guò)0．45μm有機(jī)濾膜制備即得。

2.2 色譜條件 BP5－5%苯基二甲基聚硅氧烷柱（30 m×250μm×0．25μm），初始溫度為 60℃，進(jìn)樣口的溫度設(shè)置為270℃；以5℃/min升溫速度慢慢升至200℃，保持6 min；然后再以5℃/min升溫速度緩慢升至240℃，保持5 min。高純氦氣為載氣，分流比例為20∶1，流速設(shè)置為30 mL/min，每次進(jìn)樣2 μL，Gassaver：關(guān)閉。

2.3 質(zhì)譜條件 離子源的溫度為230℃，設(shè)置接口溫度為270℃，電子的能量設(shè)置為70 eV，四級(jí)桿的溫度設(shè)置為50℃，質(zhì)量掃描的方式選擇為全部掃描范圍：50～550 amu，設(shè)置電子倍增器的電壓值為1 553 V。每次進(jìn)樣為2μL，樣品進(jìn)樣2針，使用Nist 11．0標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)進(jìn)行檢索分析。

3 結(jié)果與數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)質(zhì)譜軟件Chem Station和NIST 11.0標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)譜檢索庫(kù)進(jìn)行檢索分析，并比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜譜圖進(jìn)而鑒定化學(xué)成分一共得到39種揮發(fā)性成分，且各揮發(fā)性成分匹配率均在90%以上，成分鑒定的結(jié)果詳情見(jiàn)表1。通過(guò)優(yōu)化的色譜質(zhì)譜條件，對(duì)氣血雙補(bǔ)酒中含有的揮發(fā)性成分進(jìn)行全面的GC-MS分析，采用面積歸一化法來(lái)測(cè)定揮發(fā)性各成分的含量，并分析得到氣血雙補(bǔ)酒揮發(fā)性成分的總離子流圖，見(jiàn)圖1。

表1 GC-MS鑒定氣血雙補(bǔ)酒中的揮發(fā)性成分Tab.1 Componentsidentified of QXSBJ by GC-MS

圖1 氣血雙補(bǔ)酒揮發(fā)油的總離子流圖Fig.1 GC-MSchromatogram of QXSBJ

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)水蒸氣蒸餾的方法提取出氣血雙補(bǔ)酒中的揮發(fā)性化學(xué)成分，同時(shí)采用GC-MS技術(shù)對(duì)揮發(fā)油提取物進(jìn)行揮發(fā)性化學(xué)成分分析研究，利用譜庫(kù)檢索結(jié)合藥材色譜峰歸屬對(duì)氣血雙補(bǔ)酒揮發(fā)油進(jìn)行定性分析，應(yīng)用峰面積百分比法計(jì)算相對(duì)量，另對(duì)各色譜峰進(jìn)行藥材歸屬研究[3-4]。GC-MS分析結(jié)果顯示，Ethyl acetate為溶劑峰，其含量最高，其次氣血雙補(bǔ)酒中富含Isocetic acid（10.24%）、Terpineol（10.01%）、Gamma.-Terpinene（9.95%）、（+）-2-carene（9.74%）、D-Limonene（9.67%）等揮發(fā)性成分。色譜峰歸屬研究表明，來(lái)源于人參的揮發(fā)性成分有9個(gè)、來(lái)源于黃芪的揮發(fā)性成分有11個(gè)、來(lái)源于當(dāng)歸的揮發(fā)性成分有25個(gè)、來(lái)源于炒白芍的揮發(fā)性成分有5個(gè)、來(lái)源于陳皮的揮發(fā)性成分有20個(gè)、來(lái)源于玉竹的揮發(fā)性成分有7個(gè)、來(lái)源于酒黃精的揮發(fā)性成分有6個(gè)、來(lái)源于制何首烏的揮發(fā)性成分有8個(gè)、來(lái)源于枸杞子的揮發(fā)性成分有2個(gè)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)GC-MS法能夠快速有效地分析氣血雙補(bǔ)酒中的揮發(fā)性成分，為氣血雙補(bǔ)酒藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究和質(zhì)量控制提供參考。