TP、CAP與TTC對(duì)食品微生物菌落總數(shù)的測(cè)定效果

□ 蔡愛君 懷化市產(chǎn)商品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所

食品衛(wèi)生是全球各國(guó)保障民生的基本公共衛(wèi)生的重要組成和內(nèi)容之一，我國(guó)為保證食品衛(wèi)生還專門頒布了中華人民共和國(guó)食品衛(wèi)生法，為保障人民群眾身體健康、提高人民群眾體質(zhì)而提供相關(guān)法律準(zhǔn)繩和依據(jù)。目前，臨床對(duì)于食品衛(wèi)生的檢測(cè)方法要求安全可靠、快速有效，而通過(guò)對(duì)食品中微生物菌落總數(shù)的測(cè)定能夠了解食品中細(xì)菌等微生物的繁殖生長(zhǎng)，從而對(duì)食品的新鮮程度和污染程度進(jìn)行有效判定，這也能夠真實(shí)地反映食品生產(chǎn)、加工和銷售過(guò)程中是否嚴(yán)格遵循衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，并為行業(yè)制定相關(guān)參考依據(jù)和診斷標(biāo)準(zhǔn)[1-2]。本文對(duì)目前廣泛開展的TP、CAP、TTC進(jìn)行食品微生物菌落總數(shù)的測(cè)定和比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 一般資料

選取2018年4—7月質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局所采集的110份食品樣品作為研究對(duì)象。材料包括：符合美國(guó)AOAC OMA標(biāo) 準(zhǔn) 986.33、989.10、990.12以及中國(guó)SN/T1897-2007標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試紙片；250 g計(jì)數(shù)用瓊脂培養(yǎng)基PCA，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供；將TTC（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供）添加至PCA中，使其終濃度為0.005%，制成TTC培養(yǎng)瓊脂。

1.2 方法

為確保本研究的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確有效，在開始試驗(yàn)前將所有涉及的器材、儀器及試劑等均按照嚴(yán)重的消毒處置，并嚴(yán)格按照儀器、試劑的使用說(shuō)明和步驟進(jìn)行操作。將待檢測(cè)食品樣本取適量加入無(wú)菌磷酸緩沖液中混合均勻，并按梯度稀釋為 10、100、1 000、10 000倍樣本稀釋液備用。

TP測(cè)定：分別取不同倍數(shù)稀釋樣本溶液數(shù)滴，用滴管小心滴至測(cè)試紙片中央部位，放置5 min后再在顯微鏡下進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。

CAP測(cè)定：分別取不同倍數(shù)稀釋樣本溶液適量，接種于無(wú)菌瓊脂培養(yǎng)皿中；同時(shí)將磷酸緩沖液作為對(duì)照組同樣進(jìn)行接種；保持37 ℃恒溫培養(yǎng)48 h，并根據(jù) GB4789.1-2010的要求和規(guī)定進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)和換算。

TCC測(cè)定：操作同CAP方法，唯一不同是在瓊脂培養(yǎng)皿中加入TTC以觀察顯色反應(yīng)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

嚴(yán)格按照不同檢測(cè)方法所規(guī)定的菌落計(jì)數(shù)方法對(duì)110份樣本進(jìn)行計(jì)數(shù)，并按照每種產(chǎn)品對(duì)應(yīng)的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求將金黃色葡萄球菌、艾希大腸桿菌、霉菌及沙門氏菌等視為本次研究的檢測(cè)菌落種類。將每種不同檢測(cè)方法檢測(cè)的微生物菌落總數(shù)與GB4789.1-2010中所規(guī)定的超標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比，即微生物菌落總數(shù)測(cè)定超過(guò)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定視為超標(biāo)[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS19.0版軟件對(duì)本次研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，n或%表示計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示計(jì)量數(shù)據(jù)，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種不同檢測(cè)方法檢出總菌落數(shù)以及檢出超標(biāo)率的比較

3組不同檢測(cè)方法檢出總菌落數(shù)相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中，TCC法檢出總菌落數(shù)顯著高于TP法和CAP法，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3種不同檢測(cè)方法的檢出超標(biāo)率相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中，TCC法的檢出超標(biāo)率顯著高于TP法和CAP法，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 3種不同檢測(cè)方法檢出大腸菌群菌落數(shù)量以及檢出超標(biāo)率比較

3種不同檢測(cè)方法的檢出大腸菌群菌落數(shù)和檢出超比率相比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中TCC法在兩項(xiàng)指標(biāo)中均最高，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 3種不同檢測(cè)方法檢出霉菌以及檢出超標(biāo)率的比較

3種不同檢測(cè)方法的檢出霉菌菌落數(shù)和檢出超比率相比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中TCC法在兩項(xiàng)指標(biāo)中均最高，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

3 討論

食品微生物檢驗(yàn)是指通過(guò)對(duì)樣品中微生物進(jìn)行分離培養(yǎng)、生理生化反應(yīng)、顯微鏡檢查等方法來(lái)檢測(cè)和確定微生物的數(shù)量和種類，以便對(duì)食品的質(zhì)量及加工過(guò)程中的衛(wèi)生情況進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)。故食品微生物的檢測(cè)工作具有極高的應(yīng)用價(jià)值，而且其準(zhǔn)確性和客觀性需要真實(shí)、客觀和直接體現(xiàn)。本研究表1顯示，3種不同檢測(cè)方法之間存在較為明顯的差異，而且TCC檢測(cè)方法無(wú)論是在總菌落和超標(biāo)率的檢出中均超過(guò)其他兩種方法，這與李光澤[4]等的研究結(jié)果相一致。此外，在大腸菌群以及霉菌菌群的菌落數(shù)和陽(yáng)性檢出率上，TTC技術(shù)也較其他兩種方法具有更為顯著的優(yōu)勢(shì)。分析原因是TP檢測(cè)雖然簡(jiǎn)單，但其準(zhǔn)確性辨識(shí)程度較低，不利于觀察[5]，故表1中其菌落數(shù)量和超標(biāo)檢出率均最低。TTC屬于一種氫受體，因而能夠接受由脫氫酶所脫下的氫并使顏色由白色變成紅色，從而可以有效完成對(duì)細(xì)菌的染色，有利于檢驗(yàn)人員能夠準(zhǔn)確、有效地觀察細(xì)菌菌落數(shù)并進(jìn)行計(jì)數(shù)。TTC不僅敏感，而且相對(duì)于CAP檢測(cè)方法、TCC方法僅需要在CAP瓊脂培養(yǎng)皿中加入TCC即可，不僅操作簡(jiǎn)單便捷，而且添加TCC使得原有的培養(yǎng)基成分發(fā)生改變，更利于計(jì)數(shù)[6]。此外，CAP方法中由于菌落體積較小，不利于計(jì)數(shù)，而且新生菌落的顏色也與瓊脂相近，肉眼觀察難度較大；而TCC檢測(cè)除了更利于菌落生長(zhǎng)，還能夠使新生菌落更易著色，使得觀察更加方便；TTC培養(yǎng)基法使菌落著色具有特異性，即食品殘?jiān)粫?huì)被染色，仍能保持原有的色澤，同時(shí)還不會(huì)影響微生物自身的生長(zhǎng)繁殖[7]。

表1 3種不同檢測(cè)方法檢出總菌落數(shù)以及檢出超標(biāo)率比較（±s）

表1 3種不同檢測(cè)方法檢出總菌落數(shù)以及檢出超標(biāo)率比較（±s）

注：a、b表示與TP、CAP組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

測(cè)定方法 例數(shù) 檢出總菌落數(shù)（個(gè)/g） 檢出超標(biāo)率（%）TP 110 325.11±10.25 8（7.27）CAP 110 335.47±10.68 12（10.91）TTC 110 367.78±11.34ab 25（22.73）ab F/χ2 5.745 12.197 P 0.000 0.002

表2 3種不同檢測(cè)方法檢出大腸菌群菌落數(shù)以及檢出超標(biāo)率比較（±s）

表2 3種不同檢測(cè)方法檢出大腸菌群菌落數(shù)以及檢出超標(biāo)率比較（±s）

注：a、b表示與TP、CAP組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

測(cè)定方法 例數(shù) 檢出大腸菌群菌落數(shù)（個(gè)/g） 檢出超標(biāo)率（%）TP 110 135.23±9.66 4（3.64）CAP 110 183.47±14.27 6（5.45）TTC 110 223.52±16.83ab 14（12.73）ab F/χ2 6.223 7.549 P 0.000 0.023

表3 3種不同檢測(cè)方法檢出霉菌菌落數(shù)以及檢出超標(biāo)率比較（±s）

表3 3種不同檢測(cè)方法檢出霉菌菌落數(shù)以及檢出超標(biāo)率比較（±s）

注：a、b表示與TP、CAP組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

測(cè)定方法 例數(shù) 檢出總菌落數(shù)（個(gè)/g） 檢出超標(biāo)率（%）TP 110 85.23±8.34 6（5.45）CAP 110 105.56±10.15 8（7.27）TTC 110 186.87±14.34ab 18（16.36）ab F/χ2 7.306 8.582 P 0.000 0.014

綜上所述，食品微生物菌落總數(shù)的測(cè)定可以通過(guò) TP、CAP、TTC 3種技術(shù)來(lái)完成，其中TTC技術(shù)的檢出率更為明顯，值得廣泛推廣應(yīng)用。