色譜分析法在對復方紅藤合劑進行質(zhì)量控制中的應(yīng)用價值

于良生，紀恒勝，梅 涵，趙 磊，孟凡剛，楊國帥

（青島大學附屬醫(yī)院，山東 青島 266003）

慢性盆腔炎是一種多發(fā)性的婦科疾病。此病可嚴重影響患者的身心健康。臨床實踐證實，單用抗生素治療慢性盆腔炎的效果較不理想。近年來，我院應(yīng)用自行研制的復方紅藤合劑治療慢性盆腔炎，取得了很好的效果[1]。本文主要介紹復方紅藤合劑的處方、制備方法及色譜分析法在對此藥進行質(zhì)量控制[2]中的應(yīng)用價值。

1 試驗材料

高效液相色譜儀（美國Waters公司生產(chǎn)），綠原酸（中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110735-200501），丹參酮ⅡA（中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110766-2005181），當歸對照藥材（中國藥品生物制品檢定所提供，批號為120927-200512）。本次試驗所用的復方紅藤合劑由青島大學附屬醫(yī)院制劑室提供。

2 復方紅藤合劑的處方與制備

2.1 處方

紅藤 20 g，丹參 20 g，金銀花 20 g，黨參 15 g，當歸 12 g，木香10 g，赤芍10 g，茯苓10 g，陳皮6 g，甘草5 g。

2.2 制法

取紅藤、丹參、金銀花各2㎏,黨參1.5 ㎏,當歸1.2㎏，木香、赤芍、茯苓各1㎏，陳皮0.6㎏，甘草0.5㎏，置于中藥提取器內(nèi)，加入潔凈水100L后浸漬2h,加熱煎煮90min，濾出藥液，在藥渣中再加50L的潔凈水加熱煎煮1h,合并兩次所得的藥液，靜置沉淀12h，取上清液濃縮至25L，灌裝（250ml/瓶），封口，在116℃的環(huán)境下進行40min的滅菌處理，即得。

3 復方紅藤合劑的質(zhì)量控制[3]

3.1 性狀

復方紅藤合劑應(yīng)為深棕色的湯劑，其味苦、微甘。

3.2 成分鑒別

3.2.1 綠原酸的鑒別[4]取本品10 ml，蒸干,加甲醇5 ml使其溶解，作為供試樣品溶液備用。另取綠原酸對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg綠原酸的溶液，作為對照樣品溶液。采用薄層色譜法進行試驗，吸取供試樣品溶液10～20μL、對照品溶液10μL，分別點于以同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上,以醋酸丁酯－甲酸－水（7:2.5:2.5）的上層溶液為展開劑進行展開，取出晾干，置于紫外光燈（波長為365 nm）下檢視。在供試樣品（復方紅藤合劑）的色譜中，在與對照樣品的色譜相應(yīng)位置上，顯示出相同顏色的熒光斑點[5]。

3.2.2 當歸的鑒別[6]取本品30 ml，將其蒸干，在殘渣中加入無水乙醇1 ml使其溶解，作為供試樣品溶液備用。另取當歸對照品1 g，加入石油醚（溫度為60～90℃）20 ml，進行超聲波處理15 min，進行濾過并蒸干，在其殘渣中加入無水乙醇1 ml使其溶解，作為對照樣品溶液。采用薄層色譜法進行試驗，分別吸取上述兩種溶液各5μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正己烷－醋酸乙酯（比例為9：1）為展開劑將其展開，取出晾干，置于紫外光燈（波長為365 nm）下進行檢視。經(jīng)檢視，在供試樣品的色譜中，在與對照樣品色譜相對應(yīng)的位置上，顯示出相同顏色的熒光斑點[7]。

3.3 丹參酮ⅡA（C19H18O3）含量的測定[8]

3.3.1 色譜條件 色譜柱：Thersil-Keystone150.0 mm×4.6 mm,ODS;流動相：甲醇－水（80:20）;柱溫：室溫；流量：1 mL-1;檢測波長：270 nm；理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計算，應(yīng)大于20000。

3.3.2 對照樣品溶液的制備 取丹參酮ⅡA對照樣品10 mg，置于棕色量瓶內(nèi)，加入甲醇，制成每1 ml含20μL丹參酮ⅡA的溶液,即得。

3.3.3 供試樣品溶液的制備 取本品10 ml置于具塞錐形瓶中，加入叔丁基甲醚30 ml，進行超聲波處理30 min，放冷，吸取有機層并將其放入試管內(nèi)，于40℃的水浴中用氮氣吹干,在殘渣中加入200μL的甲醇使其溶解，即得。

3.3.4 丹參酮ⅡA的含量測定 取10個批號的復方紅藤合劑，分別制成供試樣品溶液。分別精密吸取對照樣品溶液與供試樣品溶液各10μL,注入高效液相色譜儀中進行測定。測定結(jié)果顯示，各批次樣品中丹參酮ⅡA的含量均＞0.41mg/ml。詳情見表1。

表1 對各批次樣品中丹參酮ⅡA含量進行測定的結(jié)果Tab 1 Results of content determinations （n=10，mg/mL）

4 討論

復方紅藤合劑具有清熱解毒、活血化瘀、行氣止痛的功效，主要用于治療慢性盆腔炎、附件炎等婦科疾病。此藥的規(guī)格為每瓶250 ml，其用法是：在飯前30 min服用，0.5瓶/次，2次/日。經(jīng)檢測，我院研制的復方紅藤合劑符合中國藥典2010年版一部[9]（附錄ⅥD）中“中藥合劑”項下相關(guān)的規(guī)定。本次試驗采用薄層色譜法對“復方紅藤合劑”處方中幾個具有代表性的成分進行鑒別，結(jié)果證實，該方法的專屬性強，可對復方紅藤合劑中的有效成分進行準確的定性鑒別。本次試驗采用高效液相色譜法對復方紅藤合劑中丹參酮ⅡA的含量進行測定，也取得理想的效果。

總之，色譜分析法可用于對復方紅藤合劑中的有效成分進行定性鑒別及定量分析，在對復方紅藤合劑進行質(zhì)量控制中的應(yīng)用價值較高。