赫章縣野生多星韭植物組織培養(yǎng)技術初探

李金月 陳志怡 吳勇

摘 要：為了保護和利用赫章縣野生多星韭資源，試驗以野生多星韭葉片作為外植體，進行了次氯酸鈉不同濃度和不同滅菌時間對多星韭葉片滅菌效果的影響；以及葉片不同部位、不同NAA和6-BA濃度配比對多星韭葉片愈傷組織誘導的研究。結(jié)果表明，以野生多星韭葉片為外植體誘導愈傷組織時，5%次氯酸鈉滅菌10min外植體污染率最低，為20.16%；以野生多星韭葉片基部為外植體時愈傷組織的誘導率最高，為65.34%；在野生多星韭葉片愈傷組織的誘導中，NAA與6-BA的最適配比為1.0mg/LNAA+1.0mg/L6-BA，愈傷組織的誘導率高達67.14%。

關鍵詞：野生多星韭；植物組織培養(yǎng)；愈傷組織；誘導率

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）14-0049-02

多星韭（ALLium waLLichii Kunth）是百合科蔥屬粗根組多年生草本植物，主要分布于四川（西南部）、西藏（東南部）、云南、貴州、廣西北部（貓兒山）和湖南南部（莽山），多生長于海拔2300～4800m的濕潤草坡、林緣、灌叢下或溝邊[1]。在貴州省赫章縣，野生多星韭主要分布在興發(fā)鄉(xiāng)大韭菜坪、雨帽山和珠市鄉(xiāng)小韭菜坪[2]。在民間，多星韭被當做一種藥食同源植物[3]，同時其花序碩大、花色多樣，也是觀賞價值很高的野生植物資源，具有較高的應用前景和開發(fā)利用價值。

目前，國內(nèi)對野生多星韭的研究主要集中在染色體核型[4-5]、群落特征[2]、營養(yǎng)成分分析[6]、種子萌發(fā)[7]等方面，而關于野生多星韭植物組織培養(yǎng)的研究仍未見報道。因此，探索研究野生多星韭的植物組織培養(yǎng)技術對野生多星韭的人工繁殖、工馴化栽培以及野生多星韭的資源保護、開發(fā)利用具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 以采自赫章縣大韭菜坪的野生多星韭葉片為試驗材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)基的配制與滅菌 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加不同的植物生長調(diào)節(jié)劑，蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH調(diào)至5.8。配制好的培養(yǎng)基用高壓滅菌鍋在0.125MPa壓強，121℃下滅菌20min后備用。

1.2.2 外植體的選擇 晴天早上10時左右采取生長健壯、無病蟲害的野生多星韭植株上長約10cm的葉片，保存于冰盒中帶回實驗室。經(jīng)滅菌處理后剪取葉片的基段、中段和尖段分為3組作為外植體。每組處理接50瓶，每瓶接種3個外植體，設3次重復。

1.2.3 外植體的滅菌 葉片先用流水沖洗1h，然后在超凈工作臺上將洗凈的材料置于無菌燒杯中，用70%乙醇漂洗30s；再用不同濃度次氯酸鈉分別浸泡滅菌不同時間，并不斷晃動；最后用無菌水清洗5次。滅菌完成后，剪取葉片基部為外植體接種于培養(yǎng)基內(nèi)。每組處理接50瓶，每瓶接種3個外植體，設3次重復。

1.2.4 葉片愈傷組織的誘導 將滅菌過的葉片分別接入添加不同激素的誘導培養(yǎng)基中。每組處理接50瓶，每瓶接種3個外植體，設3次重復。

1.2.5 培養(yǎng)條件 將接種好的試驗材料置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為（25±2）℃，光照強度3000Lx，光照時間 14h/d。

1.3 數(shù)據(jù)分析 接種后定期觀察記錄各種外植體、各試驗處理的污染率、愈傷組織發(fā)生情況、愈傷組織質(zhì)量，統(tǒng)計污染率、愈傷組織誘導率。計算公式如下：

污染率（%）=污染的外植體數(shù)×100/外植體總數(shù)；

愈傷組織誘導率（%）=形成愈傷組織的外植體數(shù) ×100/外植體總數(shù)。

運用Excel2007對數(shù)據(jù)進行整理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 次氯酸鈉不同濃度和不同滅菌時間對野生多星韭葉片污染率的影響 植物組織培養(yǎng)中，外植體的滅菌效果關乎整個組培試驗的成敗。外植體滅菌的關鍵是消毒劑的濃度和滅菌時間。由表1可知，野生多星韭葉片組織培養(yǎng)中最低的污染率為20.16%，相應的次氯酸鈉濃度為5%，次氯酸鈉滅菌時間10min。同時，在此配（下轉(zhuǎn)55頁）（上接49頁）比下次氯酸鈉對葉片的傷害比次氯酸鈉濃度10%下較小，處理時間也相對15min短，即在保證滅菌效果的前提下，降低對外植體的傷害，提高工作效率。

2.2 葉片不同部位對野生多星韭愈傷組織誘導的影響 由表2可知，野生多星韭葉片基部的愈傷組織誘導率最高，達65.34%，愈傷組織的質(zhì)量也最高；其次是葉片中部，誘導率為27.56%；葉片尖部的愈傷組織誘導率僅為11.12%，而且質(zhì)量最差，幾乎不可用于芽的誘導。

2.3 不同NAA和6-BA濃度配比對野生多星韭葉片愈傷組織誘導的影響 外源植物激素在愈傷組織的誘導中起著至關重要的作用，特別是生長素與細胞分裂素的比例關系。由表3可知，在野生多星韭葉片愈傷組織的誘導中，1.0mg/LNAA+1.0mg/L6-BA是最合適的配比，愈傷組織的誘導率高達67.14%，愈傷組織呈淡黃色，結(jié)構較緊密，團狀，體積大。其次是1.0mg/LNAA+1.5mg/L6-BA的配比，愈傷組織的誘導率為56.17%。0.5mg/LNAA+0.5mg/L6-BA的配比下愈傷組織的誘導率最低，只有23.31%，愈傷組織的質(zhì)量也最差，顏色呈淡白色，結(jié)構疏松，體積小。

3 結(jié)論與討論

綜上所述，在用野生多星韭葉片為外植體誘導愈傷組織時，5%次氯酸鈉進行外植體滅菌10min時外植體污染率最低，為20.16%。以野生多星韭葉片基部為外植體時愈傷組織的誘導率最高，為65.34%。在野生多星韭葉片愈傷組織的誘導中，NAA與6-BA的最適配比為1.0mg/L

NAA+1.0mg/L6-BA，愈傷組織的誘導率高達67.14%，愈傷組織質(zhì)量最高，顏色呈淡黃色，結(jié)構較緊密，團狀，體積大。

在植物組織培養(yǎng)中，外植體的滅菌效果以及外植體的取材部位是試驗能否成功的關鍵技術之一，希望本研究能夠為多星韭植物組織培養(yǎng)快繁體系的建立提供理論依據(jù)。

參考文獻

[1]中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志（第14卷）[M].北京：科學出版社，1994.

[2]姜克，葛敦.赫章縣多星韭植物資源及其群落生態(tài)特征初報[J].寧夏農(nóng)林科技，2014，55（10）：38-39，51.

[3]蘭茂.滇南本草[M].昆明：云南科技出版社，2004：573.

[4]劉盼盼，許云章，王靜霞，等.UPLC法同時測定彝藥多星韭中四種核苷類成分的含量[J].中藥材，2015，38（8）：1618-1621.

[5]鄒曉菊，黃瑞復，翟書華，等.六倍體多星韭的發(fā)現(xiàn)及多星韭種內(nèi)倍性組成及演化的分析[J].西北植物學報，2013，6：1114-1122.

[6]王海平，邱楊，李方威，等.貴州赫章縣野生韭菜資源調(diào)查與營養(yǎng)成分分析[J].植物遺傳資源學報，2017，18（6）：1137-1144.

[7]朱寬香，林長松，唐彬旭，等.野生觀賞植物多星韭種子萌發(fā)實驗研究[J].六盤水師范學院學報，2017，3：32-35.

（責編：張宏民）