鄰苯二甲酸二辛脂與氯仿聯(lián)合染毒對小鼠肝臟的氧化損傷研究

金嘉民 王明霞 馮團(tuán)

摘 要：本研究通過用鄰苯二甲酸二辛酯（DOP）和氯仿（CF）對小鼠進(jìn)行聯(lián)合染毒，來觀察染毒小鼠脂質(zhì)過氧化等指標(biāo)的變化。本實(shí)驗(yàn)按照聯(lián)合作用的分析方法——2×2析因分析進(jìn)行分組。選擇40只昆明小鼠，體重（25±2）g。將小鼠隨機(jī)分為4組，雌雄分開，每組5只，即對照組（玉米油）、DOP單獨(dú)染毒組（1/10 LD50，540mg/kg）、CF單獨(dú)染毒組（1/10 LD50，112mg/kg）、聯(lián)合染毒組DOP（1/10 LD50）+CF（1/10LD50）。通過灌胃方式進(jìn)行染毒，每天固定時間進(jìn)行染毒1次，15d后處死，稱重并且稱量小鼠肝臟重量。計(jì)算肝臟器系數(shù)，測定肝臟組織中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的活力。與對照組比較，染毒后CF組體重升高；CF組和DOP組的肝臟器系數(shù)升高；MDA含量、SOD及GSH-PX活力均降低（P<0.05），CF與DOP聯(lián)合染毒對SOD及GSH-PX表現(xiàn)協(xié)同作用（P<0.05）。CF與DOP聯(lián)合染毒對小鼠肝臟存在氧化損傷作用。

關(guān)鍵詞：鄰苯二甲酸二辛脂 氯仿 肝臟毒性

中圖分類號：R11 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-3791（2018）06（a）-0231-02

氯仿（CF）是工業(yè)上廣泛使用的有機(jī)溶劑及日常生活飲用水中主要的消毒副產(chǎn)物之一。鄰苯二甲酸二乙基己酯，又稱鄰苯二甲酸二辛酯（DOP），常作為塑料制品的增塑劑使用。人們在日常生活中通過多種途徑接觸二者，對人體造成不同程度的危害[1-3]。以往多數(shù)研究是探討某一化學(xué)物質(zhì)不同劑量的毒性影響，對二者的聯(lián)合毒副作用研究較少。前期有關(guān)二者聯(lián)合染毒后對小鼠腦組織及肝臟酶等的影響[4-6]，本研究繼續(xù)探討二者聯(lián)合染毒副對小鼠肝臟脂質(zhì)過氧化指標(biāo)的影響，以推測二者聯(lián)合染毒后對肝臟是否存在氧化損傷作用。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

低速自動平衡離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）、-80℃低溫冰箱（SANYO，Japan）、紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）、電子分析天平（上海上平儀器廠）、數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市杰瑞爾電器有限公司）、KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、渦旋混勻器 VORTEX SHAKER）、氯仿（北京北化精細(xì)化學(xué)品有限公司）、鄰苯二甲酸二辛酯（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物分組及染毒

成年昆明普通小鼠40只，體重（25±2）g，購自齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心。實(shí)驗(yàn)小鼠常規(guī)飼養(yǎng)，自由進(jìn)食及飲水。

將昆明普通小鼠按體重隨機(jī)分為四組：即CF組（1/10LD50，112mg/kg）、DOP組（1/10 LD50，540mg/kg）、DOP（1/10LD50）+CF（1/10LD50）聯(lián)合染毒組、對照組（玉米油），雌雄分開，每組5只。連續(xù)灌胃染毒15d，每天固定時間染毒一次，稱量記錄體重，染毒容積10mL/kg，對整個實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行動態(tài)觀察。

1.3 檢測指標(biāo)

灌胃染毒15d后稱量記錄體重并處死全部小鼠，迅速摘取肝組織，稱重以計(jì)算肝組織系數(shù)。其余組織液氮速凍后置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。每只小鼠稱取0.4g肝臟，加入3.6mL生理鹽水，制備成10%的勻漿液，以4000轉(zhuǎn)/分離心10min，取上清?？捡R斯亮藍(lán)法測定勻漿中蛋白含量；用SOD、MDA、GSH-PX試劑盒采用分光光度法測定肝臟組織勻漿中丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX），超氧化物歧化酶（SOD）的活力。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以（）表示。采用 SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，聯(lián)合作用評價(jià)采用2×2析因方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

⑴小鼠體重及臟器系數(shù)的測定結(jié)果DOP和CF聯(lián)合染毒對小鼠體重及臟器系數(shù)的影響見表1。

與對照組比較，DOP組體重?zé)o明顯差異（P>0.05）；CF組染毒后體重下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；CF組與DOP組的小鼠肝臟系數(shù)高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；DOP與CF聯(lián)合染毒對小鼠體重、肝臟系數(shù)的影響尚未表現(xiàn)出聯(lián)合作用（P>0.05）。

⑵小鼠肝組織中脂質(zhì)過氧化指標(biāo)的測定結(jié)果DOP與CF聯(lián)合染毒對小鼠肝臟脂質(zhì)過氧化指標(biāo)的測定結(jié)果見表2。

同對照組比較，CF染毒組、DOP染毒組小鼠肝組織中MDA含量、SOD及GSH-PX活力均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；DOP與CF聯(lián)合染毒對小鼠SOD及GSH-PX活力表現(xiàn)出協(xié)同作用（P<0.05）。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，CF染毒組與DOP染毒組小鼠肝臟組織中MDA含量、SOD及GSH-PX活力均低于對照組，DOP與CF聯(lián)合染毒對小鼠肝臟組織中MDA含量尚未表現(xiàn)出膜脂過氧化物的損傷，SOD及GSH-PX活力表現(xiàn)協(xié)同作用。表明在該實(shí)驗(yàn)條件下CF與DOP單獨(dú)染毒可對肝臟清除過氧化物和羥自由基產(chǎn)生抑制作用，可對肝臟產(chǎn)生過氧化損害作用，CF與DOP聯(lián)合染毒時對肝臟SOD及GSH-PX活性產(chǎn)生了明顯抑制作用。推測二者可能通過以下兩條途徑對肝臟產(chǎn)生氧化損傷：一方面抑制了機(jī)體正常的自由基生成過程，導(dǎo)致MDA含量下降；另一方面使機(jī)體對抗脂質(zhì)過氧化的酶促系統(tǒng)受損，導(dǎo)致SOD和GSH-PX的合成減少或是活性降低。

參考文獻(xiàn)

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[6] 王明霞.鄰苯二甲酸二辛酯和氯仿聯(lián)合染毒對小鼠腦組織的影響[D].吉林大學(xué)， 2013.