六種不同劑型的噻蟲嗪對(duì)斑馬魚急性毒性研究

楊玲莉

摘 要：噻蟲嗪（Thiamethoxam）通常為白色結(jié)晶粉末，是一種全新結(jié)構(gòu)的第二代煙堿類高效低毒殺蟲劑，對(duì)害蟲具有胃毒、觸殺及內(nèi)吸活性，用于葉面噴霧及土壤灌根處理。因噻蟲嗪的毒性一度受爭(zhēng)議。本文通過六種劑型噻蟲嗪對(duì)斑馬魚急性毒性研究，探究不同噻蟲嗪制成不同劑型是否對(duì)斑馬魚毒性有所差異，為噻蟲嗪登記做參考。研究發(fā)現(xiàn)，噻蟲嗪原藥配成水劑為低毒、噻蟲嗪懸浮劑和噻蟲嗪懸浮種衣劑均為微毒。噻蟲嗪原藥配成水劑和懸浮劑可以有效減小噻蟲嗪毒性。從魚類保護(hù)的眼光來看，較之于噻蟲嗪顆粒劑，更建議使用噻蟲嗪水劑和懸浮劑。

關(guān)鍵詞：斑馬魚 劑型 噻蟲嗪 殺蟲劑 急性毒性實(shí)驗(yàn)

中圖分類號(hào)：X.826 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2018）06（a）-0228-04

農(nóng)藥在現(xiàn)代社會(huì)被廣泛使用，這不僅僅給陸地生態(tài)環(huán)境造成了一定破壞，許多農(nóng)藥通過地表滲流和地下徑流從農(nóng)田流入地下，更給生活在水下或者水面的水生動(dòng)物造成了影響。農(nóng)藥危害最大的就是水中的魚類。有一些農(nóng)藥魚類對(duì)其富集能力很強(qiáng)，容易給魚類帶來污染與危害，比如使魚類脊椎畸形、出現(xiàn)血斑、側(cè)游甚至引起魚類大量死亡。更可怕的是，如今隨著植物蟲害病害的日益嚴(yán)重，作為方便快捷經(jīng)濟(jì)的除害方式農(nóng)藥正在被越來越廣泛使用并且肆意追加。因此農(nóng)藥對(duì)水生物毒性的研究及農(nóng)藥毒性科學(xué)控制刻不容緩。現(xiàn)今，農(nóng)藥的投產(chǎn)過程主要是通過幾種原藥配制不同制劑制成成品，再測(cè)過毒性能夠投入使用就登記投入使用推廣。因此同種原藥制成不同制劑對(duì)同種生物的毒性是不相同的，因此，在不可避免使用某種原藥的前提下，可以通過此原藥制成不同劑型來減少毒性，達(dá)到間接減少環(huán)境污染的效果。

1 緒論

1.1 噻蟲嗪在國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀

噻蟲嗪作為第二代煙堿類殺蟲劑是瑞士先正達(dá)公司的專利產(chǎn)品，但他飽受爭(zhēng)議，尤其對(duì)蜜蜂健康影響很大。在中國(guó)專利于2013年7月到期。已然推廣使用，但此藥在歐盟OECD已經(jīng)禁用了。所以他在中國(guó)使用的毒性問題是非常嚴(yán)峻的。

1.2 研究的目的和意義

本選題通過用同種原藥，噻蟲嗪配制不同劑型制成農(nóng)藥進(jìn)行對(duì)斑馬魚的急性毒性效應(yīng)研究，來初步判定這種原藥不同制劑對(duì)魚類的毒性大小。以此加強(qiáng)對(duì)這種原藥的毒性管理和控制，更科學(xué)的使用農(nóng)藥。

2 預(yù)試驗(yàn)和正試驗(yàn)

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)

2.1.1 參比試驗(yàn)

對(duì)每一批魚用重鉻酸鉀（分析純以上）進(jìn)行一次參比物質(zhì)試驗(yàn)，觀察試驗(yàn)結(jié)果，如果試驗(yàn)結(jié)果落在200～400 a.i.mg/L內(nèi)，則可以表明本實(shí)驗(yàn)室具備這項(xiàng)試驗(yàn)的條件。

2.1.2 體重體長(zhǎng)稱重

對(duì)試驗(yàn)用魚進(jìn)行一次體重體長(zhǎng)稱重，稱量出他們的體重體長(zhǎng)，并且算出每組魚總體重。以此評(píng)判供試生物是否符合標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)OECD的Guaidline 動(dòng)物福利規(guī)定，每1g斑馬魚需要有1L水的生活環(huán)境。因此，我們根據(jù)3條魚/組，體重不超過1g，選擇1L的魚缸/組。體長(zhǎng)根據(jù)OECD規(guī)定不超過（3±1）cm，符合標(biāo)準(zhǔn)即可。

2.1.3 試驗(yàn)供試品和試驗(yàn)儀器

本實(shí)驗(yàn)依據(jù)OECD法規(guī)嚴(yán)格按照GLP規(guī)定，固定使用通過驗(yàn)證的儀器，以及通過穩(wěn)定性驗(yàn)證的供試品。供試品狀態(tài)和儀器來源見表1和表2。

2.1.4 供試生物

斑馬魚（Brachydanio reri）屬鯉科。體長(zhǎng)為（2.0±1.0）cm，體重為（0.3±0.1）g。統(tǒng)一生理指標(biāo)。供試用水標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)過24h曝氣的曝氣自來水，水溫21℃～25℃，水質(zhì)硬度在（以CaCO3計(jì)）10～250mg/L之間，pH在6.0～8.5之間，溶解氧保持在5.8mg/L以上。光照為12～16h。

保持每天投喂1～2次專用魚食，投入的足夠量。保持每2～3d換一次水，換水的時(shí)候刷好魚缸，清洗過濾棉。為了保證魚能更好的適應(yīng)， 每次換水只換2/3的水。

2.1.5 試驗(yàn)方法的選擇

按農(nóng)藥的特性選擇靜態(tài)實(shí)驗(yàn)法、半靜態(tài)實(shí)驗(yàn)法或流水式實(shí)驗(yàn)法。如使用靜態(tài)或半靜態(tài)實(shí)驗(yàn)法。應(yīng)確保試驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)藥液中供試物不低于初始濃度的80%。如果在實(shí)驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)藥液中供試物濃度超過20%的偏離，則應(yīng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)藥液中供試物的實(shí)際濃度并以此計(jì)算實(shí)驗(yàn)結(jié)果，或使用流水式實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)藥液中供試物濃度。

2.1.6 預(yù)實(shí)驗(yàn)濃度設(shè)計(jì)依據(jù)

在中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)上查詢到，數(shù)據(jù)見表3。

根據(jù)以上可查到數(shù)據(jù)，和毒性等級(jí)參照表，噻蟲嗪通常配方稱懸濁液、水劑、顆粒劑使用。因此設(shè)計(jì)預(yù)試驗(yàn)濃度梯度均為0.1、1.0、10.0、50.0、100.0五個(gè)濃度梯度和一個(gè)空白對(duì)照。根據(jù)OECD規(guī)定統(tǒng)一用3條魚/組無平行衛(wèi)星組。并設(shè)計(jì)1%噻蟲嗪·殺蟲雙顆粒劑、0.2%噻蟲嗪·殺蟲雙顆粒劑、6.5%噻蟲嗪·戊唑醇懸浮種衣劑、25%噻蟲嗪水分散粒劑、30%噻蟲嗪懸浮劑、35%噻蟲嗪懸浮種衣劑幾種劑型的噻蟲嗪試驗(yàn)，以確定從減少對(duì)斑馬魚毒性的眼光看噻蟲嗪復(fù)配成何種劑型最佳。

2.1.7 第一次預(yù)實(shí)驗(yàn)96h結(jié)果

為了正試驗(yàn)的范圍確定，進(jìn)行了三次重復(fù)預(yù)實(shí)驗(yàn)得到最大非致死量和最絕對(duì)致死劑量，其中第二次和第三次預(yù)實(shí)驗(yàn)與第一次預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，得到LC50范圍見表4。

2.2 正試驗(yàn)

2.2.1 正試驗(yàn)濃度設(shè)計(jì)依據(jù)

根據(jù)OECD規(guī)定和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的濃度范圍內(nèi)按一定比例間距（級(jí)差控制在2.2倍以內(nèi)）設(shè)置6個(gè)濃度組，并設(shè)一個(gè)空白對(duì)照組，根據(jù)OECD規(guī)定統(tǒng)一用7條魚/組 無平行衛(wèi)星組。實(shí)驗(yàn)開始后6h內(nèi)隨時(shí)觀察并記錄實(shí)驗(yàn)用魚的中毒癥狀及死亡率，其后于24h、48h、72h和96h觀察并記錄魚的中毒癥狀及死亡率，當(dāng)用玻璃棒輕觸魚尾部，無可見運(yùn)動(dòng)即為死亡，并及時(shí)清除死魚。每天測(cè)定并記錄實(shí)驗(yàn)藥液溫度、pH及溶解氧。

2.2.2 正式試驗(yàn)結(jié)果

用SPASS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，算出LC50見表5～表6。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，噻蟲嗪原藥制成不同制劑對(duì)于斑馬魚的毒性差異非常大：其中水劑比固態(tài)顆粒劑的毒性小，基本為低毒或者微毒，并且在顆粒劑中，噻蟲嗪濃度越大，對(duì)斑馬魚毒性越大。因此，噻蟲嗪制成懸濁液或者水劑可以有效減少原藥對(duì)斑馬魚毒性。從保護(hù)環(huán)境的眼光來看，為了減少對(duì)水生物，特別是魚類種群的毒害，在藥效相同條件下，建議使用噻蟲嗪懸濁液或水劑類殺蟲劑代替噻蟲嗪顆粒劑。

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