• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    兔源巴氏桿菌分離與鑒定

    2018-10-23 03:54:00韓猛立張星星吳桐忠郭強強黃新鐘發(fā)剛
    新疆農(nóng)業(yè)科學 2018年7期
    關(guān)鍵詞:殺性氏桿菌A型

    韓猛立,張星星,吳桐忠,郭強強,黃新,鐘發(fā)剛

    (新疆生產(chǎn)建設兵團動物疾病防控重點實驗室/新疆農(nóng)墾科學院畜牧獸醫(yī)研究所,新疆石河子 832003)

    0 引 言

    【研究意義】 兔巴氏桿菌病(Rabbitpasteurellosis)是由兔多殺性巴氏桿菌(Pasteurelamultocida)引起兔的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病,呈多形性、散發(fā)性或地方流行性傳染病,又稱為兔出血性敗血癥[1-2];該病是家兔的常見疾病之一,主要危害斷奶到成年兔(多發(fā)于9周齡至6月齡),臨床上表現(xiàn)為嚴重的呼吸道病變、中耳炎、結(jié)膜炎、子宮積膿、睪丸炎等[3];一般無季節(jié)性發(fā)病特征,在氣溫驟變及多雨季節(jié)發(fā)病較多;通常呈隱性感染,在感染群中,隨著兔年齡的增大,多殺性巴氏桿菌在兔群中的污染率有增加的趨勢;該病發(fā)病率高,傳播途徑多,傳播速度快,發(fā)病后若治療措施不及時可引起兔大批死亡,若治療措施及時可明顯降低死亡率,但也會引起兔生長遲緩及治療費用增加等,該病已成為困擾我國養(yǎng)兔業(yè)健康發(fā)展的主要細菌性疾病之一[4-6]?!厩叭搜芯窟M展】 多殺性巴氏桿菌能夠引起禽霍亂、牛出血性敗血癥、兔巴氏桿菌病、羊出血性敗血癥、豬肺疫和豬萎縮性鼻炎,而人可以通過被狗、貓等寵物撕咬或抓傷的途徑感染巴氏桿菌,并引起人的局部感染、炎癥或敗血癥,病情嚴重時甚至造成死亡[7]。我國科研人員在牛、豬、禽類、兔巴氏桿菌[3,8-12]的分離鑒定、PCR檢測方法與血清分型、耐藥性、致病性、免疫原型研究方面做了大量的研究工作,豐富了我國不同種動物巴氏桿菌病研究的深度和廣度,對促進畜禽養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展、控制巴氏桿菌對畜牧養(yǎng)殖業(yè)造成的危害、減少養(yǎng)殖場(戶)的經(jīng)濟損失做出了重大貢獻。【本研究切入點】 姜鴻程等[13]2002年對哈密地區(qū)發(fā)生一起兔巴氏桿菌與大腸桿菌混合感染進行報道。有禽源、奶牛源、羊源、牦牛源巴氏桿菌的相關(guān)研究[14-18],新疆地區(qū)關(guān)于兔巴氏桿菌的相關(guān)研究鮮見報道。【擬解決的關(guān)鍵問題】研究對引起石河子地區(qū)不同養(yǎng)兔合作社或?qū)I(yè)養(yǎng)殖戶兔死亡的原因進行探究,確定其主要病原菌為多殺性巴氏桿菌,并伴有大腸桿菌混合感染,對分離菌株的耐藥性進行分析研究。掌握巴氏桿菌感染不同種動物的臨床特點、致病特征、主要血清型、敏感藥物、序列特點等,為制定動物源巴氏桿菌病綜合防控措施提供技術(shù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    1.1.1 病料

    采集和送檢病料主要來自第八師石河子市轄區(qū)的145團、133團、121團、149團養(yǎng)兔合作社或養(yǎng)兔專業(yè)戶,主要飼養(yǎng)法系獺兔、哈白、新西蘭、伊普呂、寵物兔等。發(fā)病主要集中4、5月,病兔多為50~75 d齡,主要臨床癥狀為厭食、打噴嚏、咳嗽、流膿性鼻漏的呼吸道型;部分兔用前爪抓擦鼻孔,臨死前出現(xiàn)體溫下降,全身抽搐,并伴有水樣腹瀉;病程一般為3~5 d,發(fā)病率45%~65%,病死率40%以上,多為急性死亡。對送檢的病死兔剖解可見肺臟充血、肝變較嚴重,呈大理石樣花紋,有纖維素性胸膜炎變化,有化膿灶;肝臟水腫、膽囊腫大、邊緣頓圓、質(zhì)脆,腸系膜淋巴結(jié)明顯水腫出血;腸道廣泛性出血。

    剖解瀕死期或病死兔,無菌采集肺臟、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)等病料,4℃冷藏備用。標準牛多殺性巴氏桿菌(CVCC393)購自中監(jiān)所(簡稱:標準株)。

    1.1.2 培養(yǎng)基及試劑

    5%綿羊血液瓊脂平板培養(yǎng)基、普通瓊脂平板培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、腦心浸液(BHI);TaqDNA聚合酶 、dNTP、DL2000 DNA Marker購自寶生物工程(大連)有限公司;快速革蘭氏染色液、瑞氏-姬姆薩染色液購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。臨床常用新藥敏紙片(30種)購自杭州濱和微生物試劑有限公司。法國生物梅里埃VITEK 2 COMPACT全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)及其配套細菌生化鑒定卡;昆明系小鼠購自石河子大學動物實驗中心。

    1.1.3 引物合成

    參照Townsend等[19]建立了多殺性巴氏桿菌PCR鑒別和莢膜血清分型方法,分別設計引物擴增多殺性巴氏桿菌種特異性基因KMT1,擴增莢膜血清A、B、D、E、F分型特異性基因hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ、fcbD,引物由上海生工生物工程有限公司合成。引物序列及擴增片段大小。表1

    表1 巴氏桿菌鑒定及分型引物序列
    Fig.1 Primer sequences and sizes used in experiments

    血清型Capsular serotype引物Primers序列Sequences(5’-3’)大小Sizes(bp)Pm鑒定Identification of PmKmt-1Pm-FATCCGCTATTTACCCAGTGGPm-RGCTGTAAACGAACTCGCCAC460A型Pm鑒定Identification of A type PmhyaD-hyaCPmA-FTGCCAAAATCGCAGTCAGPmA-RTTGCCATCATTGTCAGTG1 046B型Pm鑒定Identification of B type PmbcbDPmB-FGCCCGAGAGTTTCAATCCPmB-RCATTTATCCAAGCTCCACC760D型Pm鑒定Identification of D type PmdcbFPmD-FTTACAAAAGAAAGACTAGGAGCCCPmD-RCATCTACCCACTCAACCATATCAG657E型Pm鑒定Identification of E type PmecbJPmE-FTCCGCAGAAAATTATTGACTCPmE-RGCTTGCTGCTTGATTTTGTC511F型Pm鑒定Identification of F type PmfcbDPmF-FAATCGGAGAACGCAGAAATCAGPmF-RTTCCGCCGTCAATTACTCTG851

    1.2 方 法

    1.2.1 染色鏡檢

    將病料組織如肺臟、肝臟、脾臟、腸內(nèi)容物涂片或觸片,分別進行瑞氏染色和革蘭氏染色、鏡檢、觀察其形態(tài)特征。

    1.2.2 分離培養(yǎng)

    將無菌采集的病兔肺臟、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)分別接種于腦心浸液置于37℃恒溫培養(yǎng)18~24 h后,接種于血液瓊脂平板、普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板37℃恒溫培養(yǎng)16~18 h,觀察在不同培養(yǎng)基上的生長情況、菌落形態(tài)以及溶血情況。挑取典型菌落,分別進行單菌落涂片革蘭氏染色鏡檢、再次接種于5%綿羊血瓊脂平板進行分離純化、觀察其溶血性。

    1.2.3 生化鑒定

    分離菌株的生化鑒定應用常規(guī)生化鑒定與全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)相結(jié)合進行。常規(guī)細菌生化鑒定管購買自杭州濱河微生物試劑有限公司,革蘭氏陰性細菌鑒定卡購買自法國生物梅里埃公司。

    1.2.4 動物試驗

    10只普通健康小白鼠(體重約在20 g左右),隨即分為試驗組和對照組,每組5只。將經(jīng)生化鑒定的分離菌株挑單個菌落37℃過夜培養(yǎng),用滅菌PBS懸浮菌體;試驗組小白鼠按0.2 mL/只(6×108cfu/mL)劑量腹腔注射,對照組注射等量滅菌PBS。隔離飼養(yǎng),同時觀察并記錄小鼠狀態(tài)、發(fā)病及死亡情況。

    1.2.5 藥敏試驗

    按照常規(guī)方法進行,采用紙片瓊脂擴散法(K-B法)進行藥物敏感性試驗,使用杭州濱河微生物試劑有限公司生產(chǎn)的臨床常用新藥敏紙片(30種),觀察實驗結(jié)果,并測量抑菌圈直徑,按照配套說明書判定結(jié)果,以牛多殺性巴氏桿菌CVCC3933作為質(zhì)控菌株。

    1.2.6 PCR鑒定及分型

    將分離菌株接種于營養(yǎng)肉湯37℃過夜培養(yǎng),用堿裂解法提取細菌基因組DNA作為PCR模板;PCR擴增引物詳見1.1.4;反應體系:25 μL:10 × Buffer 2.5 μL,2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL,上下游引物各1.0 μL(20 μmol/L),TaqDNA聚合酶 0.5 μL(5 U/μL),模板DNA 2.0 μL,ddH2O 16.0 μL;反應條件:95℃ 預變性 5 min;95℃ 變性 30 s、56℃ 退火 30 s、72℃ 延伸35 s,30個循環(huán);72℃ 5 min。PCR產(chǎn)物保存于4℃?zhèn)溆?。? μL PCR產(chǎn)物在10 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 細菌形態(tài)

    病兔肺臟、肝臟、脾臟和腸內(nèi)容物涂片革蘭氏染色鏡檢,視野可見大量呈粉紅色(革蘭氏陰性)的小桿菌;瑞特氏染色觀察到兩極著色的短桿菌,偶見有著色均勻的短小桿菌。

    2.2 細菌分離培養(yǎng)

    將無菌采集的病料接入營養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)72 h后,肉眼可見試管底部出現(xiàn)粘稠,晃動呈拉絲狀;分離菌株在普通瓊脂培養(yǎng)基上貧瘠,在麥康凱上(除其中一份腸系膜淋巴結(jié)病料,生長出粉紅圓形菌落外)均不生長;在5%綿羊血瓊脂平板上培養(yǎng)18 h后,可見表面光滑濕潤、灰白色、圓形微隆起、邊緣整齊的露珠樣菌落,無溶血現(xiàn)象;革蘭氏染色為陰性短小桿菌。

    2.3 生化鑒定

    對分離菌株應用購買自天和微生物試劑有限公司的細菌生化鑒定管和全自動微生物鑒定儀鑒定,疑似為多殺性巴氏桿菌(Pasteurellamultocida,Pm)。研究表明,全自動微生物鑒定系統(tǒng)鑒定結(jié)果提示為巴氏桿菌(可信度介于91%~99%);其中CVCC393為標準菌株,PmXJ12104-x為實驗室保存的牦牛巴氏桿菌分離株,PmXJ08145-xby、PmXJ08132-f、PmXJ08132-x、PmXJ08121-f、PmXJ08149-xby為此次分離的兔源巴氏桿菌。分離株與標準菌株生化鑒定結(jié)果基本一致。腸系膜淋巴上分離菌株鑒定為大腸桿菌。表2

    表2 分離株生化試驗結(jié)果
    Table 2 The result of biochemistry to experiment

    菌株StrainCVCC393PmXJ12104-xPmXJ08145-xbyPmXJ08132-fPmXJ08132-xPmXJ08121-fPmXJ08149-xby葡萄糖 GLU+++++++靛基質(zhì) IMD+++++++甘露醇 MAN+++-+++麥芽糖 MAL---+-+-山梨醇 SOR+++++++乳糖 LAC-------蔗糖 SAC+++++++果糖 FRU+++++++甲基紅 MR-------二乙酰 VP-------檸檬酸CIT-------尿素酶 URE-------硫化氫 H2S-------硝酸鹽 CIT++++--+觸酶 CAT+++++++三糖鐵 TSI+++++++

    注:+(陽性);-(陰性)

    Note: +(positive);-(Negative)

    2.4 動物試驗

    試驗組小白鼠接種注射菌液后4 h,出現(xiàn)精神不振,食欲下降;14 h后,注射Pm的小鼠有1只死亡;36 h以內(nèi)小鼠全部死亡;空白對照組小鼠全部存活。剖解可見心外膜有出血點、心包和胸腔呈現(xiàn)不同程度漿液性纖維素滲出物,肺出血嚴重、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)腫大;腹腔積液、腸粘膜出血。選取心血、肺臟、肝臟、脾臟等組織病料涂片鏡檢,革蘭氏染色可見陰性小桿菌,瑞氏染色可見兩級著色顯著的短桿菌,判定為巴氏桿菌感染。

    2.5 分離菌株耐藥率

    對分離鑒定獲得的14株兔巴氏桿菌(進一步鑒定明確為PmXJ08145-xby、PmXJ08132-f、PmXJ08132-x、PmXJ08121-f、PmXJ08149-xby5株菌),按照CLSI標準測定其對30種臨床常用新藥敏紙片的敏感性,結(jié)果顯示,14株巴氏桿菌均表現(xiàn)出不同程度的多重耐藥,對青霉素、阿莫西林、鏈霉素、四環(huán)素、阿莫西林、慶大霉素、克林霉素、恩諾沙星等臨床常用抗生素嚴重耐藥,較為敏感的抗生素是第三代頭孢菌素類如頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢吡肟,部分喹諾酮類如氧氟沙星、左氧氟沙星以及氟苯尼考。按照“高敏菌株數(shù) + 中敏菌株數(shù) = 敏感菌株數(shù)”和“低敏率=耐藥率”,確定分離菌株的耐藥率。表3

    表3 14株兔源多殺性巴氏桿菌分離菌株的藥敏試驗結(jié)果
    Table 3 Susceptibility of 14 strains of Pasteurella multocida isolates

    藥敏片類別Drug sensitive tablets敏感(S)Sensitive中介(I)Intermediary耐藥(R)Resistance耐藥率(%)Resistant rate苯唑西林 Oxacillin041071.43(10/14)青霉素G Penicillin G011392.86(13/14)阿莫西林 Amoxicillin0014100.00(14/14)阿奇霉素 Azithromycin47321.43(3/14)氟苯尼考 Florfenicol9417.14(1/14)氨芐西林 Ampicillin021285.71(12/14)多西環(huán)素 Doxycyclinum031178.57(11/14)克林霉素 Clindamycin0014100.00(14/14)氯霉素 Chloramphenicol05964.29(9/14)四環(huán)素 Tetracycline011392.86(13/14)左氧氟沙星 Levofloxacin5817.14(1/14)諾氟沙星 Norfloxacin08642.86(6/14)恩諾沙星 Enrofloxacin57214.29(2/14)環(huán)丙沙星 Ciprofloxacin36535.71(5/14)多粘菌素B Polymyxin B56321.43(3/14)復方新諾明 Cotrimoxazole021285.71(12/14)哌拉西林 Piperacillin011392.86(13/14)頭孢唑啉 Cefazolin65321.43(3/14)頭孢噻吩 Cefalotin53642.86(6/14)頭孢呋辛 Cefuroxime66214.29(2/14)頭孢哌酮 Cefoperazone11300.00(0/14)頭孢噻肟 Cefotaxime12200.00(0/14)頭孢曲松 Ceftriaxone10400.00(0/14)頭孢他啶 Ceftazidime13100.00(0/14)頭孢吡肟 Cefepime11300.00(0/14)頭孢西叮 Cefoxitin38321.43(3/14)氧氟沙星 Ofloxacin6717.14(1/14)鏈霉素 Streptomycin011392.86(13/14)卡那霉素 kanamycin14964.29(9/14)慶大霉素 Gentamicin031178.57(11/14)

    圖1 14株兔源多殺性巴氏桿菌分離菌株的藥敏試驗
    Fig.1 Susceptibility of 14 strains of Pasteurella multocida isolates

    2.6 PCR鑒定及分型

    以巴氏桿菌標準菌株CVCC393和實驗室分離保存的牦牛巴氏桿菌PmXJ12104-x分離株為陽性對照,以實驗室分離獲得14株菌的DNA為模板,分別擴增Pm的Kmt-1基因,研究表明,除陰性對照外均擴增出大小約460 bp的目的條帶與預期結(jié)果一致。將分離菌株的Kmt-1基因片段測序后運用BLAST與GenBank數(shù)據(jù)庫中多殺性巴氏桿菌KMT-1基因序列比對同源性達99%以上。

    根據(jù)發(fā)病場區(qū)、養(yǎng)殖品種、臨床癥狀、生化鑒定,結(jié)合莢膜血清分型將分離的14株巴氏桿菌明確為PmXJ08145-xby、PmXJ08132-f、PmXJ08132-x、PmXJ08121-f、PmXJ08149-xby 5株菌,應用莢膜血清分型PCR鑒定為A型多殺性巴氏桿菌。 對擴增獲得的血清特異性基因片段測序,運用BLAST搜索比對結(jié)果顯示與Genbank 數(shù)據(jù)庫中A型基因同源性介于97%~99%。圖1

    M:DNA分子質(zhì)量標準;1.陰性對照;2.標準多殺性巴氏桿菌CVCC393;3.牦牛巴氏桿菌分離株P(guān)mXJ12104-x;4-17:兔源臨床分離菌株

    M:DL2000 Marker; 1.Negative control; 2.StandardPasteurellamultocidaCVCC393; 3.Pasteurellamultocidaisolate PmXJ12104-x of Yak; 4-17.Rabbits source clinical isolates

    圖2 多殺性巴氏桿菌PCR鑒定
    Fig.2 PCR identification of Pasteurella multocida

    M:DNA分子質(zhì)量標準;1-5:兔源臨床分離株

    M:DL2000 Marker; 1-5:.Rabbits source clinical isolates

    圖3 分離菌株莢膜血清型PCR鑒定
    Fig.3 Isolation Strains capsular serotype PCR identification

    3 討 論

    隨著兵團農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化結(jié)構(gòu)調(diào)整步伐的逐步推進,兵團第八師石河子地區(qū)畜牧業(yè)結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出多元化發(fā)展,在傳統(tǒng)的以奶牛、細毛羊養(yǎng)殖為優(yōu)勢的基礎上;為了更好的適應市場需求,拓寬農(nóng)牧民多元化增收途徑,以肉羊、肉牛、生豬、蛋雞和肉兔養(yǎng)殖。家兔多殺性巴氏桿菌病是引起斷奶到成年兔斷奶到死亡最主要的細菌性傳染病,不同國家的主要流行菌株不同,不同血清型巴氏桿菌之間沒有或僅有較少的交叉保護性[20]。

    多殺性巴氏桿菌是一種普遍存在于多種動物體內(nèi)的革蘭氏陰性短桿菌,能在部分健康動物的口腔、鼻腔、扁桃體和上呼吸道中定植,屬于條件致病菌。根據(jù)莢膜抗原的不同分為5種血清型,分別是 A、B、D、E和F型[21],血清型的流行情況在不同宿主間有一定差異[22]。當前在我國豬群中主要流行的是A型、B型(引起豬肺疫)和D型(豬傳染性萎縮性鼻炎)[23];牛群中主要流行A型(牛出血性敗血癥)[24];羊源巴氏桿菌病以病例報道居多,分型鑒定相對較少,新疆地區(qū)有分離到A型的相關(guān)報道[17];禽類以A型(禽霍亂)為主,B 、D和F型也有報道[23];兔源以A型為主,但也存在D型和F型[10,25]。2016年4月~2017年10月間對石河子地區(qū)132團首先出現(xiàn)4月齡左右仔兔突然發(fā)病死亡,隨即周邊團場或與其有來往的養(yǎng)殖合作社和養(yǎng)殖專業(yè)戶發(fā)生了類似的疫情。經(jīng)詢問飼養(yǎng)員和獸醫(yī),結(jié)合發(fā)病情況、臨床癥狀及剖解變化,類似于巴氏桿菌??;此次發(fā)病表現(xiàn)出發(fā)病率和死亡率均較高的特點,且剖解以肺部病變較為嚴重,部分呈現(xiàn)出大腸桿菌性腹瀉混合感染;給處于上升期的石河子地區(qū)養(yǎng)兔業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。研究團隊利用現(xiàn)有的巴氏桿菌研究平臺,對不同時期的發(fā)病樣品經(jīng)實驗室細菌分離鑒定出14株巴氏桿菌,后進一步明確為5株,分離菌株生化鑒定結(jié)果與標準菌株生化特性基本一致,將分離菌株進行小鼠攻毒試驗表現(xiàn)出高致病性,并分離出相同的細菌,初步鑒定為多殺性巴氏桿菌感染;分離菌株對臨床常用的藥物均具有不同程度的耐藥性,對第三代頭孢菌素和部分喹諾酮累藥物表現(xiàn)出敏感性,且敏感趨勢大致相同;在培養(yǎng)特性、生化特點、藥物敏感性及毒力上存在一定的差異;利用PCR技術(shù)最終確認分離的菌株為莢膜血清A型多殺性巴氏桿菌,且具有較強的致病性,對第三代頭孢菌素類、部分喹諾酮類藥物和氟苯尼考敏感。

    多殺性巴氏桿菌廣泛存在于正常動物的上呼吸道、扁桃體等器官和組織中,因而動物群體中多殺性巴氏桿菌的帶菌率與動物群體是否發(fā)生巴氏桿菌病并無直接關(guān)系。一般認為動物在發(fā)病前已經(jīng)帶菌,當各種誘因如氣溫變化、應激等使畜禽機體抵抗力降低時,病原菌得以快速繁殖,隨即侵入體內(nèi),經(jīng)淋巴液而入血液,繼而發(fā)生內(nèi)源性感染,促進動物機體表現(xiàn)出特定的臨床癥狀,嚴重者導致死亡。研究采集病死兔的臟器組織,運用傳統(tǒng)的生物學分析方法將純化后的細菌依據(jù)染色形態(tài)、生化試驗等特征進行分類,由于傳統(tǒng)生物學細菌鑒定方法穩(wěn)定性和可靠性受到培養(yǎng)條件的影響而存在差異;分子生物學方法不受細菌來源地環(huán)境及培養(yǎng)條件的影響[26]。研究采用傳統(tǒng)細菌分離鑒定與分析生物學相結(jié)合的方法,應用全自動微生物鑒定系統(tǒng)與傳統(tǒng)生化試驗相作證;以實驗室購買的標準菌株和分離菌株作為陽性對照,參考目前普遍認可的由Townsend等[19,27]建立的分子生物學方法對多殺性巴氏桿菌進行鑒定和分型,二者的符合率一致;相對于傳統(tǒng)的表型鑒定方法,基因型鑒定提高了檢測和分類的穩(wěn)定性,同時提高了揭示其種間遺傳關(guān)系的檢測速率。

    多殺性巴氏桿菌各血清型菌株的流行性存在較大差異,具有明顯的地方性特征;致病性主要與宿主和細菌毒力相關(guān),毒力基因在細菌致病過程中具有重要意義,很多被證實與病原菌致病密切相關(guān)的結(jié)合、轉(zhuǎn)運、粘附、定殖、合成、入侵等過程均有不同基因編碼的對應蛋白(酶)介導,機體發(fā)病是宿主與致病菌株之間相互作用的結(jié)果。多殺性巴氏桿菌毒力基因較多,與之密切相關(guān)的毒力基因在不同菌株中分布存在一定的差異。研究揭示了莢膜血清A型多殺性巴氏桿菌是引起石河子地區(qū)兔急性死亡的主要病原菌,對其毒力基因進行相關(guān)研究是本實驗即將開展的工作。

    兔多殺性巴氏桿菌對于任何品種兔子均具有相同的易感性,且無性別差異,但不同年齡兔只的易感性存在顯著差異。兔多殺性巴氏桿菌屬條件性致病菌,當外界條件發(fā)生突然改變?nèi)绺鼡Q飼養(yǎng)和飼養(yǎng)員、寄生蟲感染、溫度驟變、圈舍通風不良、兔抵抗力降低時,該病原菌趁機侵入人體內(nèi),引發(fā)內(nèi)源性感染或突然發(fā)病。因此應做好日常管理和預防工作,大量文獻報道發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)分離株藥敏試驗結(jié)果大相徑庭,可能不同地區(qū)及人員與用藥習慣和分離菌株的差異有關(guān),首選藥敏試驗結(jié)果的藥物進行治療,同時選擇不同敏感藥物交替使用、聯(lián)合用藥方能起到較好的效果;兔巴氏桿菌商品疫苗為莢膜血清A型滅活疫苗,因此制定完善的免疫程序、應用市售商品化疫苗防控該病是首選方案;同時必須對本地流行的多殺性巴氏桿菌血清型加以監(jiān)測,根據(jù)當?shù)乇O(jiān)測結(jié)果才能更好地指導該病的防治。

    4 結(jié) 論

    通過常規(guī)細菌分離獲得14株病原菌,鑒定為巴氏桿菌;應用分子生物學方法鑒定為莢膜血清A型多殺性巴氏桿菌,結(jié)合考慮發(fā)病場(戶)、是否分離自同一樣品、生化試驗、序列比對等明確為5株病原菌,分別命名為PmXJ08145-xby、PmXJ08132-f、PmXJ08132-x、PmXJ08121-f、PmXJ08149-xby5;按照CLSI標準測定其對30種臨床常用新藥敏紙片的敏感性,結(jié)果顯示14株臨床分離巴氏桿菌均表現(xiàn)出不同程度的多重耐藥,對青霉素、阿莫西林、鏈霉素、四環(huán)素、阿莫西林、慶大霉素、克林霉素、恩諾沙星等臨床常用抗生素嚴重耐藥的抗生素是類如對頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢吡肟等第三代頭孢菌素,部分喹諾酮類如氧氟沙星、左氧氟沙星以及氟苯尼考等較為敏感。

    猜你喜歡
    殺性氏桿菌A型
    一例鴨疫里默氏桿菌病的診斷
    肉牛多殺性巴氏桿菌病的流行病學、臨床癥狀、診斷與防治措施
    多殺性巴氏桿菌細胞分裂相關(guān)基因的篩選
    麋鹿巴氏桿菌病的診治
    一株豬源A型多殺性巴氏桿菌的分離鑒定和藥敏試驗
    兔巴氏桿菌病的診斷及防制
    山羊巴氏桿菌病的診治
    多殺性巴氏桿菌毒力因子及基因表達的研究進展
    DF100A型發(fā)射機馬達電源板改進
    新聞傳播(2015年6期)2015-07-18 11:13:15
    A型肉毒素在注射面部皺紋中的應用及體會
    天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产亚洲欧美98| 国产成人精品一,二区 | 欧美精品一区二区大全| 亚洲av男天堂| 国产成人影院久久av| 欧美3d第一页| 色5月婷婷丁香| 久久久久久九九精品二区国产| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美激情在线99| 麻豆av噜噜一区二区三区| 99热精品在线国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 日韩欧美三级三区| 精品欧美国产一区二区三| 成年av动漫网址| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 毛片一级片免费看久久久久| 午夜福利成人在线免费观看| h日本视频在线播放| 哪个播放器可以免费观看大片| 中文字幕熟女人妻在线| 麻豆乱淫一区二区| 99热精品在线国产| 久久久久久久久久成人| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 小说图片视频综合网站| 日韩欧美 国产精品| 悠悠久久av| 成人毛片60女人毛片免费| 午夜福利高清视频| 国产高潮美女av| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 伦理电影大哥的女人| h日本视频在线播放| 亚洲成人久久性| 国产 一区精品| 嫩草影院精品99| 最近的中文字幕免费完整| 成人一区二区视频在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 熟女人妻精品中文字幕| 在线免费十八禁| 国产视频内射| 老女人水多毛片| 免费人成在线观看视频色| kizo精华| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产欧美日韩精品一区二区| av专区在线播放| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产成人freesex在线| 少妇高潮的动态图| 亚洲电影在线观看av| 亚洲精品自拍成人| 我的女老师完整版在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产成人精品一,二区 | 精品日产1卡2卡| 亚洲在久久综合| 成人三级黄色视频| 国产成人a∨麻豆精品| 极品教师在线视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 中文字幕制服av| 伦理电影大哥的女人| 久久亚洲精品不卡| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 内地一区二区视频在线| 高清午夜精品一区二区三区 | 欧美变态另类bdsm刘玥| 少妇高潮的动态图| 男的添女的下面高潮视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 99久国产av精品国产电影| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日韩精品青青久久久久久| 淫秽高清视频在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 欧美不卡视频在线免费观看| 精品午夜福利在线看| 欧美色视频一区免费| 联通29元200g的流量卡| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久综合国产亚洲精品| 久久久久久久久久久丰满| 女同久久另类99精品国产91| 国产成人精品婷婷| 亚洲成a人片在线一区二区| 搞女人的毛片| 男女下面进入的视频免费午夜| av卡一久久| 国产乱人偷精品视频| 高清午夜精品一区二区三区 | 伦精品一区二区三区| 国产真实伦视频高清在线观看| 一夜夜www| 欧美高清性xxxxhd video| av福利片在线观看| 变态另类丝袜制服| 99热全是精品| 少妇熟女aⅴ在线视频| 在线观看一区二区三区| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲人成网站在线观看播放| eeuss影院久久| 亚洲高清免费不卡视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 日韩欧美 国产精品| 嫩草影院精品99| 特大巨黑吊av在线直播| 精品熟女少妇av免费看| 激情 狠狠 欧美| 干丝袜人妻中文字幕| 大香蕉久久网| 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 熟女电影av网| 亚洲精品粉嫩美女一区| 色视频www国产| 特级一级黄色大片| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 中文欧美无线码| 日日摸夜夜添夜夜爱| 高清在线视频一区二区三区 | 日本与韩国留学比较| 一夜夜www| 直男gayav资源| 1000部很黄的大片| 欧美zozozo另类| 亚洲第一电影网av| 日日啪夜夜撸| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 青春草视频在线免费观看| 亚洲av中文av极速乱| 免费观看人在逋| 高清毛片免费看| 亚洲成人久久性| 我要搜黄色片| 中文字幕久久专区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲高清免费不卡视频| 国产精品电影一区二区三区| 国产不卡一卡二| 亚洲欧美清纯卡通| 国产午夜精品论理片| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 亚洲av成人精品一区久久| 22中文网久久字幕| videossex国产| 免费一级毛片在线播放高清视频| 在线观看一区二区三区| 乱系列少妇在线播放| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 啦啦啦观看免费观看视频高清| 神马国产精品三级电影在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 综合色av麻豆| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲在线观看片| 网址你懂的国产日韩在线| 国产午夜精品一二区理论片| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲av熟女| 久久久久久久久久久丰满| 男的添女的下面高潮视频| 嫩草影院新地址| 日本一本二区三区精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品.久久久| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产v大片淫在线免费观看| 国产老妇女一区| 色综合站精品国产| 久久人妻av系列| 波多野结衣高清无吗| 久久韩国三级中文字幕| kizo精华| 长腿黑丝高跟| 亚洲图色成人| 国产高清三级在线| 12—13女人毛片做爰片一| 搡老妇女老女人老熟妇| 欧美潮喷喷水| 色综合亚洲欧美另类图片| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲欧美日韩东京热| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 日韩 亚洲 欧美在线| 成人综合一区亚洲| 精品人妻偷拍中文字幕| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 乱系列少妇在线播放| 日本一本二区三区精品| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产男人的电影天堂91| 久久午夜福利片| 久99久视频精品免费| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品人妻久久久久久| 网址你懂的国产日韩在线| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲av男天堂| 最近中文字幕高清免费大全6| 免费在线观看成人毛片| 男女那种视频在线观看| 九九在线视频观看精品| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产精品一二三区在线看| 乱码一卡2卡4卡精品| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美不卡视频在线免费观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲av男天堂| 插阴视频在线观看视频| 在线播放无遮挡| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产成人影院久久av| 又爽又黄a免费视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 性色avwww在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 麻豆国产av国片精品| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美+日韩+精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产亚洲5aaaaa淫片| 成人特级av手机在线观看| 一本久久精品| 精品日产1卡2卡| 在线播放无遮挡| 亚洲自拍偷在线| 欧美精品国产亚洲| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 天美传媒精品一区二区| 精品人妻熟女av久视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 欧美最新免费一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 我要搜黄色片| 亚洲av电影不卡..在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 日韩中字成人| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产精品乱码一区二三区的特点| 深夜a级毛片| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 在线观看美女被高潮喷水网站| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 女人被狂操c到高潮| 特级一级黄色大片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 天堂√8在线中文| 日韩欧美精品免费久久| 又爽又黄无遮挡网站| 日本熟妇午夜| 最近视频中文字幕2019在线8| 十八禁国产超污无遮挡网站| av免费在线看不卡| 午夜精品国产一区二区电影 | 精品熟女少妇av免费看| 日韩一本色道免费dvd| avwww免费| 亚洲高清免费不卡视频| 免费黄网站久久成人精品| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久精品91蜜桃| 长腿黑丝高跟| 亚洲高清免费不卡视频| 国产精品国产高清国产av| 国产真实伦视频高清在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 日韩欧美国产在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 久久精品影院6| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲第一区二区三区不卡| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 精品久久久久久久末码| 又爽又黄a免费视频| 五月伊人婷婷丁香| 老司机福利观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久午夜亚洲精品久久| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产精品国产高清国产av| 黄片wwwwww| 97在线视频观看| 午夜激情欧美在线| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 22中文网久久字幕| 国产不卡一卡二| 在线观看午夜福利视频| 精品久久久噜噜| 日韩人妻高清精品专区| 成人特级av手机在线观看| 日本黄色片子视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 九九热线精品视视频播放| 国产一级毛片在线| 在线观看免费视频日本深夜| 97在线视频观看| 亚洲国产精品国产精品| 一区二区三区高清视频在线| 一夜夜www| 啦啦啦韩国在线观看视频| 不卡一级毛片| 大香蕉久久网| 国产精品久久久久久精品电影| 国产亚洲精品久久久com| 日韩欧美在线乱码| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 成人午夜高清在线视频| 91精品国产九色| 99久久无色码亚洲精品果冻| 秋霞在线观看毛片| 在线国产一区二区在线| 1000部很黄的大片| 床上黄色一级片| 午夜爱爱视频在线播放| 天天一区二区日本电影三级| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久午夜亚洲精品久久| 免费一级毛片在线播放高清视频| 最好的美女福利视频网| 日日摸夜夜添夜夜爱| 免费观看精品视频网站| 国产成人精品婷婷| 国产单亲对白刺激| 色哟哟哟哟哟哟| 久久精品影院6| 久久精品国产亚洲网站| 国产精品电影一区二区三区| 22中文网久久字幕| 一区二区三区四区激情视频 | 国产探花极品一区二区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品永久免费网站| 中文字幕av成人在线电影| 免费大片18禁| 国产亚洲欧美98| 一个人看视频在线观看www免费| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品久久电影中文字幕| .国产精品久久| 久久人人爽人人爽人人片va| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日本熟妇午夜| 国产一区二区在线av高清观看| 99热全是精品| 国产极品精品免费视频能看的| 丰满人妻一区二区三区视频av| 好男人在线观看高清免费视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲综合色惰| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲无线在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产精华一区二区三区| 国产午夜精品一二区理论片| 91av网一区二区| 免费搜索国产男女视频| 成年av动漫网址| 亚洲av中文av极速乱| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美高清性xxxxhd video| 欧美日韩综合久久久久久| 五月玫瑰六月丁香| 日韩欧美精品免费久久| 国产伦一二天堂av在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 99热6这里只有精品| 色综合色国产| 九色成人免费人妻av| 亚洲av不卡在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 国产一区二区在线av高清观看| 成年免费大片在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 黑人高潮一二区| 99久国产av精品| 1000部很黄的大片| 有码 亚洲区| 熟女人妻精品中文字幕| 久久久久久久久久成人| 亚洲精品色激情综合| 久久久久性生活片| 看十八女毛片水多多多| 久久精品影院6| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日本黄大片高清| 国产黄色小视频在线观看| 国内精品久久久久精免费| 哪个播放器可以免费观看大片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 午夜老司机福利剧场| 国内精品久久久久精免费| av在线观看视频网站免费| 综合色丁香网| 精品无人区乱码1区二区| h日本视频在线播放| 在线免费观看的www视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 黄色欧美视频在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 免费观看人在逋| 亚洲丝袜综合中文字幕| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲国产色片| 日韩欧美在线乱码| 波多野结衣高清作品| 国产亚洲欧美98| 亚洲经典国产精华液单| 成人午夜高清在线视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 免费观看a级毛片全部| 日韩高清综合在线| 国产欧美日韩精品一区二区| 在线免费观看的www视频| 亚洲不卡免费看| 中文欧美无线码| 国产精品久久久久久av不卡| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 秋霞在线观看毛片| 人体艺术视频欧美日本| 成人午夜高清在线视频| 在线国产一区二区在线| 深夜精品福利| 久久久久网色| 亚洲在久久综合| 丰满乱子伦码专区| 永久网站在线| 青春草亚洲视频在线观看| 成人综合一区亚洲| 日日撸夜夜添| 性欧美人与动物交配| 99久久精品热视频| 日本免费a在线| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲国产欧美在线一区| 国产在视频线在精品| 国产精品av视频在线免费观看| 成人av在线播放网站| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 婷婷色av中文字幕| 亚洲第一区二区三区不卡| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 免费一级毛片在线播放高清视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 性欧美人与动物交配| 亚洲欧美精品专区久久| 天堂影院成人在线观看| 欧美精品国产亚洲| 丝袜喷水一区| 美女国产视频在线观看| 如何舔出高潮| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 99riav亚洲国产免费| 国产精品99久久久久久久久| 在线免费观看的www视频| 高清毛片免费看| 免费看a级黄色片| 国产亚洲精品久久久com| 婷婷亚洲欧美| 天美传媒精品一区二区| 日韩视频在线欧美| 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美3d第一页| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲成人久久爱视频| 伦理电影大哥的女人| 免费大片18禁| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产三级中文精品| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲成人av在线免费| 欧美在线一区亚洲| 久久亚洲国产成人精品v| 久久久久久伊人网av| 99久久成人亚洲精品观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久精品夜色国产| 国产极品精品免费视频能看的| 欧美成人一区二区免费高清观看| 网址你懂的国产日韩在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 精品国内亚洲2022精品成人| 美女黄网站色视频| 特大巨黑吊av在线直播| 日日啪夜夜撸| 乱系列少妇在线播放| 亚洲成人av在线免费| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 久久亚洲国产成人精品v| 天堂√8在线中文| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品无大码| 国产中年淑女户外野战色| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 一边亲一边摸免费视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩人妻高清精品专区| 久久久国产成人免费| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美在线一区亚洲| 亚洲色图av天堂| 亚洲av一区综合| 日韩成人伦理影院| 亚洲精品国产成人久久av| 中文字幕av在线有码专区| АⅤ资源中文在线天堂| 成人综合一区亚洲| 中国国产av一级| 婷婷精品国产亚洲av| 免费搜索国产男女视频| 人体艺术视频欧美日本| 欧美成人一区二区免费高清观看| 一个人看视频在线观看www免费| 91久久精品国产一区二区三区| a级一级毛片免费在线观看| 久久久久久久午夜电影| 麻豆一二三区av精品| www.色视频.com| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 在线观看一区二区三区| 精品久久久久久成人av| www日本黄色视频网| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 青春草视频在线免费观看| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩欧美国产在线观看| 成年女人永久免费观看视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日本免费a在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产一级毛片七仙女欲春2| 成年女人永久免费观看视频| 国产av麻豆久久久久久久| 九色成人免费人妻av| 国产精品野战在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| kizo精华| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产成人一区二区在线| 日韩欧美精品免费久久| 精品人妻视频免费看| 成人一区二区视频在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 在线a可以看的网站| 久久久久网色| 只有这里有精品99| 久久精品国产亚洲网站| 日韩欧美精品v在线| 国产久久久一区二区三区| 免费av毛片视频| 丝袜喷水一区| 九九热线精品视视频播放| 97超碰精品成人国产| 国产视频首页在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 成人午夜高清在线视频| 日本成人三级电影网站| 成人av在线播放网站| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 可以在线观看的亚洲视频| 久久精品国产清高在天天线| 国产成人freesex在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 少妇丰满av| 免费观看精品视频网站| 青青草视频在线视频观看| 白带黄色成豆腐渣| 日本欧美国产在线视频|