番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)及植株再生試驗研究

周堯

摘 要：以無菌播種下的番茄無菌苗作為研究對象，通過采用正交試驗的方法，對番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)以及植株的再生體系進行詳細分析，對試驗結(jié)果進行科學(xué)探討。在構(gòu)建植株再生體系的基礎(chǔ)上，促進了番茄植株的茁壯生長。

關(guān)鍵詞：番茄；下胚軸；子葉；組織培養(yǎng)；植株；再生體系

文章編號： 1005-2690（2018）02-0100-02 中圖分類號： S641.2 文獻標志碼： B

在轉(zhuǎn)基因技術(shù)迅速發(fā)展的前提下，人們對番茄的研究也越來越多，積極促進了改良番茄新品種更好的發(fā)展。番茄作為一種蔬菜性作物，在基因工程方面得到了很好的發(fā)展。不僅是因為番茄的栽培過程簡單，更重要的是人們對番茄遺傳理論方面的研究較為深入[1]，這都為基因工程的穩(wěn)定發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。構(gòu)建番茄植株再生體系，促進了番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)工作的順利進行，并提供了可靠的參與依據(jù)，通過采取誘導(dǎo)方式來獲得再生植株，為番茄遺傳轉(zhuǎn)化提供了方便。

1 試驗材料與條件

1.1 研究材料

本次研究選取了來自中國蔬菜花卉研究院的番茄品種，主要有美麗櫻桃番茄、中雜9號、中蔬4號、毛粉802[2]、串珠櫻桃番茄及麗春番茄等6個品種的下胚軸、葉片以及莖段作為外植體。

1.2 組織培養(yǎng)分析

將番茄無菌苗在清水中浸泡48 h，消毒3 min，使用無菌水對其進行5次沖洗。在無菌的條件下將番茄苗接種到培養(yǎng)基上，溫度為25～30 ℃[3]，使其在黑暗的環(huán)境中發(fā)芽，并在發(fā)芽后，及時將其放入培養(yǎng)箱內(nèi)。光照16 h，光照強度達1 500～1 900 lx，在光照培養(yǎng)后的第6～8天就可以獲得無菌番茄苗。

1.3 除掉外植體

當(dāng)無菌番茄苗的苗齡達到10 d就可以將其下胚軸以及子葉等外植體除掉，切去葉柄和葉尖，剩余的部分為5～8 mm的切段。當(dāng)不定芽長到2 cm時，及時將不定芽剪掉并用于培養(yǎng)基接種，20 d后統(tǒng)計生根結(jié)果。在此過程中需要明確：生根率=生根芽數(shù)量/幼芽數(shù)量×100%，及時觀察根的形態(tài)，并測量根長度。

1.4 栽培條件及其成活率

將需要移栽的番茄苗移到自然溫度條件下放置4 d，保證植株的自然光照，第4天加入少量水，使其與空氣進行更好的接觸。第6天取出植株，將其根部清洗干凈，然后栽入穴盤中。在移栽中要及時舍棄劣質(zhì)苗，優(yōu)先選用根系發(fā)達的試驗苗，保證其成活率。認真做好保濕遮陰工作，只有這樣，方可確保移栽成活率達到85%以上。20 d后，將小苗移到大田進行栽培，能夠達到99%的成活率。

2 試驗結(jié)果分析

2.1 激素對番茄葉莖的影響

試驗結(jié)果表明，番茄下胚軸和子葉外植體的葉芽分化能力很強，當(dāng)苗齡達到10 d時，外植體邊緣有明顯的膨大以及彎曲現(xiàn)象，逐漸產(chǎn)生了愈傷組織。伴隨著愈傷組織一天天長大，出現(xiàn)了綠色的芽點，隨后芽點分化為單葉，此時每塊愈傷產(chǎn)生了4～5個芽點，其葉芽分化率達100%，僅有一部分的愈傷組織能實現(xiàn)誘導(dǎo)生根。

2.2 無菌培養(yǎng)基對番茄種子的影響

添加過蔗糖+MS的培養(yǎng)基，種子發(fā)芽率僅為20%；僅添加蔗糖的培養(yǎng)基，其發(fā)芽率為62%；而添加瓊脂的培養(yǎng)基，其發(fā)芽率卻達到了100%。從以上數(shù)據(jù)看出，蔗糖和無機鹽對番茄種子的發(fā)芽起到了很重要的促進作用，是番茄種子發(fā)芽的敏感要素。研究表明，種子的萌發(fā)率對培養(yǎng)基產(chǎn)生了決定性的影響，同時在添加蔗糖和無機鹽的前提下，培養(yǎng)基形成了一定滲透壓[4]，從而促進了種子萌發(fā)。

2.3 培養(yǎng)基對植株再生的影響

只有保證了番茄苗生長環(huán)境以及溫度適宜，才能實現(xiàn)番茄苗的正常分化。在培養(yǎng)基中，番茄生根可以有效形成相對粗壯的根部，這種根部植株的成果率較高。同時多次實踐也說明，優(yōu)良的培養(yǎng)基對植株生長起到了很好的誘導(dǎo)效果，經(jīng)過誘導(dǎo)的培養(yǎng)基其生根率達到了82%。同時相關(guān)人員發(fā)現(xiàn)，在本次試驗中，番茄試管苗長勢良好，對其經(jīng)過組織培養(yǎng)后可以保證其生根率達100%，蔗糖、無機鹽、無機酸這種組合對番茄苗的生根更有效。

3 小結(jié)

由于不同品種對激素以及培養(yǎng)基的要求有所不同，因此要想實現(xiàn)番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)的平衡發(fā)展，一定要明確培養(yǎng)條件，同時加大對試驗結(jié)果的研究力度，充分考慮多方面因素，構(gòu)建植株再生體系，并且在誘導(dǎo)分化的情況下，成功建立番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)再生體系，從而有效提高種子成活率。

參考文獻：

[ 1 ] 郟艷紅，王姝，劉仲齊.番茄下胚軸和子葉組織培養(yǎng)及植株再生的研究[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，18（01）：16-18.

[ 2 ] 賴小芳，陳偉強，王健康，等.番茄“7728”組織培養(yǎng)及植株再生研究[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報，2017（04）：35-39.

[ 3 ] 薛萍，肖艷雙，徐巖，等.番茄不同基因型對植株再生能力的影響[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，62（05）：38-39.

[ 4 ] 仇燕，劉紅霄，楊松燁.番茄高效再生體系的建立[J].河北科技大學(xué)學(xué)報，2012，33（01）：83-88.

（收稿日期：2018-01-15）