竹筒酒中總黃酮、總酸、總糖含量的測(cè)定

趙媛 陳洪國(guó) 陳濤

摘要：采用可見光光度法測(cè)定竹筒酒中總黃酮的含量，對(duì)樣品進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，確定512nm為最大吸收波長(zhǎng)，穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，反應(yīng)液在30min內(nèi)吸光度較穩(wěn)定。所測(cè)竹筒酒中總黃酮的含量為16.63mg/L，總糖含量為11.003g/L，總酸含量為0.303g/L， 檢測(cè)結(jié)果證實(shí)該白酒復(fù)合高度酒的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，符合低度酒的優(yōu)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：竹筒酒; 總黃酮; 總酸; 總糖

湖北咸寧是聞名的楠竹之鄉(xiāng)，楠竹中含有黃酮類化合物、多糖類，氨基酸類，礦質(zhì)元素，茶多酚等多種營(yíng)養(yǎng)成分，其中黃酮類，多糖類和有機(jī)酸類是主要的多功能成分[1]。竹筒酒通過特殊的方式將高粱酒漿注入楠竹活竹筍內(nèi)，自然生長(zhǎng)，制作機(jī)理圖如圖1所示。

白酒通過吸取天然竹汁、竹葉多糖、竹葉黃酮、竹葉抗氧化物、硒、鋅、鐵、鈣、鎂、多種維生素和氨基酸等活性成份，是一種比普通白酒更香、更純、更環(huán)保的原生態(tài)健康飲用酒。竹筒酒富含大量的黃酮類化合物，具有很高藥用價(jià)值。有抗癌，抗微生物，抗病毒，抑制脂肪酶，保護(hù)心腦血管等功效。竹筒酒吸取了竹葉中多糖類物質(zhì)，有效改善了普通蒸餾白酒的口感和品質(zhì)，深受消費(fèi)者歡迎。酒中酸含量決定其風(fēng)格和品質(zhì)，因此，測(cè)定竹筒酒中總酸含量有助于控制其質(zhì)量，保障飲用者健康。黃酮含量測(cè)定方法主要有可見分光光度法、熒光分光光度法、高效液相色譜法等[23]。本文采用亞硝酸鈉硝酸鋁可見分光光度法檢測(cè)竹筒酒中總黃酮含量。采用指示劑法測(cè)定竹筒酒中總酸的含量 [45]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 竹筒酒中總黃酮的測(cè)定

（1）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的配制。

精密稱取120℃下干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品100mg，加入42%的乙醇溶液溶解，并定容至1000ml得0.1mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

精確的量取0.1mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0ml，0.5ml，1ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml，3ml置于10ml容量瓶中，加入5%的NaNO2溶液300微升，搖勻，靜置6分鐘后加入10%的硝酸鋁溶液300微升，搖勻，靜置6分鐘后加入4%的氫氧化鈉4.0ml，再用42%的乙醇溶液定容至刻度，靜置30min，于分光光度計(jì)上，在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，空白不加人蘆丁對(duì)照品。以510nm處吸光度為縱坐標(biāo)，以配制標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)量濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示：

1.2 竹筒酒中總糖的測(cè)定

（1）葡萄糖溶液的標(biāo)定VNaOH。

斐林試劑參照相關(guān)文獻(xiàn)配制[6]，預(yù)備滴定：準(zhǔn)確吸取斐林溶液甲、乙液各5ml于錐形瓶中，加入20ml蒸餾水，搖勻，電爐加熱至沸，在沸騰的狀態(tài)下用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，當(dāng)溶液的藍(lán)色消失呈紅色時(shí)，加入2滴次甲基藍(lán)指示劑，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，滴定五次，取數(shù)值接近的三次數(shù)據(jù)計(jì)算。正式滴定：加入比預(yù)備實(shí)驗(yàn)少1ml的葡萄糖標(biāo)液，加熱至沸，并保持2min，加2滴次甲基藍(lán)指示劑，在沸騰狀態(tài)下于1min內(nèi)用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液滴定至終點(diǎn)，記錄消耗葡萄糖標(biāo)液的總體積（V），平行滴定五次，取接近的三次數(shù)據(jù)計(jì)算，結(jié)果取平均值。

濃度計(jì)算F=M/1000×V（F—斐林試劑甲、乙液各5ml相當(dāng)于葡萄糖的克數(shù)，g; M—稱取葡萄糖的質(zhì)量，g;V—正式滴定消耗的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，ml）

（2）樣品的制備及測(cè)定。

準(zhǔn)確吸取100ml的竹筒酒加熱濃縮至30ml左右，將其轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，加入6M的鹽酸溶液5ml。用1%的甲基紅的乙醇液為指示劑，滴加200g/L的氫氧化鈉溶液至中性，冷卻至室溫， 定容至100ml。

樣品總糖測(cè)定同標(biāo)定葡萄糖溶液類似，以樣品溶液代替葡萄糖標(biāo)液進(jìn)行滴定即可。

1.3 竹筒酒中總酸的測(cè)定

（1）樣品的制備及測(cè)定。

竹筒酒中總酸的測(cè)定采用指示劑法，按照國(guó)標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定。準(zhǔn)確移取5.00ml酒樣于150ml的錐形瓶中，加入20ml的蒸餾水，用滴管滴加2滴酚酞指示劑，用一定濃度的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色，記錄標(biāo)準(zhǔn)堿用量，計(jì)算酒樣中總酸的含量。

（2）氫氧化鈉濃度的確定。

分別使用1.0，0.1，0.01，0.005及0.001 mol/L的氫氧化鈉對(duì)未知酒樣進(jìn)行滴定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明氫氧化鈉濃度為0.005 mol/L最佳。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 竹筒酒中總黃酮的測(cè)定

（1）穩(wěn)定性和精密度測(cè)試結(jié)果。

測(cè)定竹筒酒中總黃酮在30min內(nèi)的穩(wěn)定性，每間隔5min取樣一次，測(cè)得吸光度分別為0.158，0.162，0.159，0.163，0.162， 0.164計(jì)算得RSD%為1.50%。說明使用該方法測(cè)定竹筒酒中總黃酮含量時(shí)穩(wěn)定性良好。根據(jù)上述方法連6次測(cè)定同一樣品的總黃酮含量，測(cè)定結(jié)果顯示RSD為2.43%，表明該方法測(cè)定竹筒酒中總黃酮含量時(shí)精密度良好。

（2）竹筒酒中總黃酮含量測(cè)定。

準(zhǔn)確量取3ml待測(cè)酒樣于10ml的容量瓶中，加入5%的NaNO2溶液300μL，搖勻，靜置6分鐘后加入10%的硝酸鋁溶液300μL，搖勻，靜置6分鐘后加入4%的氫氧化鈉4.0ml，再用42%的乙醇溶液定容至刻度。按照測(cè)蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)吸光度的方法測(cè)酒樣的吸光度。最后通過蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線確定線性回歸方程，計(jì)算總黃酮的含量為16.63mg/L。

2.2 竹筒酒中總糖的測(cè)定

按照國(guó)標(biāo)法測(cè)定總糖含量。按照公式X=F/[100×V2/250]×1000（X：復(fù)制白酒中總糖含量

（以葡萄糖計(jì)），g/L; F：斐林試劑甲、乙液各5ml相當(dāng)于葡萄糖的克數(shù)，g; V1樣品制備液滴定消耗的總體積。）

其中：F=M/100×V1（F：斐林試劑甲、乙液各5ml相當(dāng)于葡糖糖的克數(shù)，g;m：稱取葡萄糖的質(zhì)量，g;V：正式滴定消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的總體積，ml注：正式滴定35次）取接近的三次總體積數(shù)據(jù)計(jì)算，結(jié)果取平均值作為斐林試劑甲、乙液的濃度標(biāo)定值。計(jì)算得F=0.5×14.7/100=0.0735g。

未知白酒中總糖的含量可按公式計(jì)算得：X=F/[100×V2/250] ×1000;計(jì)算得樣品酒中最終含量=11.003g/L。

2.3 竹筒酒中總酸的測(cè)定

本實(shí)驗(yàn)測(cè)定采用國(guó)標(biāo)指示劑法測(cè)定竹筒酒中總酸的含量。竹筒酒中的總酸（有機(jī)酸），以酚酞為指示劑，采用氫氧化鈉溶液進(jìn)行中和滴定，以消耗的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的量計(jì)算總酸的含量。

1%酚酞指示劑的配制：準(zhǔn)確量取0.1g的酚酞溶于10ml的無水乙醇，使之完全溶解，備用。

樣品檢測(cè)：準(zhǔn)確移取5.00ml酒樣于150ml的錐形瓶中，加入20ml的蒸餾水，用滴管滴加2滴酚酞指示劑，用0.005mol/L的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色，記錄標(biāo)準(zhǔn)堿用量，計(jì)算酒樣中總酸的含量。

使用0.005mol/L的氫氧化鈉滴定酒樣，平行滴定四次取平均值，利用公式：X=[C×（V0.21）×0.0601]/5×1000計(jì)算得總酸含量為0.303g/L。（X：酒中總酸的含量 g/L;C：NaOH濃度，mol/L;V：滴定消耗NaOH溶液的體積，ml;V2：取酒樣體積，mL）

檢測(cè)結(jié)果證實(shí)該白酒復(fù)合高度酒的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，符合低度酒的優(yōu)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)論與展望

隨著社會(huì)的發(fā)展，人們對(duì)生活質(zhì)量的要求越來越高，中國(guó)酒類行業(yè)正在從廣度和深度上健康發(fā)展，保健酒行業(yè)正蘊(yùn)藏著巨大的發(fā)展?jié)摿Α＝】狄庾R(shí)和環(huán)保意識(shí)的提升也促進(jìn)了酒類行業(yè)向天然型、營(yíng)養(yǎng)型、功能型、保健型發(fā)展。竹筒酒作為近幾年發(fā)展起來的新興酒類，逐漸被大家熟悉，竹筒酒中蘊(yùn)含豐富的黃酮類化合物、多糖類化合物，具有很好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健作用，其中黃酮類物質(zhì)對(duì)清除DPPH自由基具有明顯的效果，并且高濃度的黃酮類化合物具有一定的抗氧化作用。

參考文獻(xiàn)：

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基金項(xiàng)目：湖北省自然科學(xué)基金（2016CFB209） ;湖北省教育廳青年基金（Q20172801）;湖北科技學(xué)院校內(nèi)培育科研項(xiàng)目（201618X046）

作者簡(jiǎn)介：趙媛（1988），女，河南信陽(yáng)人，助教，研究方向：分析檢測(cè)。

*通訊作者：陳濤，講師。