納豆紅曲葡萄籽組合抗氧化功能試驗

王榮昌 朱勤 郁樺 李玲 王玉瑩 甘露 汪普林 匡榮 朱社敏

摘 要 目的：研究納豆紅曲葡萄籽組合抗氧化功能。方法：抗氧化功能試驗設(shè)低、中、高三個劑量組：0.33、0.67 和2.0g/kg·bw（分別相當于人推薦量的5、10、30倍），同時設(shè)空白對照組和模型對照組。選用乙醇氧化損傷模型，連續(xù)31天經(jīng)口給予小鼠不同劑量的受試樣品，空白對照組和模型對照組同時給予滅菌的純化水。實驗結(jié)果：本組合乙醇氧化損傷模型試驗脂質(zhì)氧化產(chǎn)物、蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物、抗氧化酶活力、抗氧化物質(zhì)四項指標測定均為陽性。結(jié)論：納豆紅曲葡萄籽組合具有抗氧化功能。

關(guān)鍵詞 納豆；紅曲；葡萄籽；抗氧化

1 綜述

紅曲是我國的傳統(tǒng)發(fā)酵產(chǎn)品，紅曲中含有很多種的抗氧化物質(zhì)，如Dimerumicacid、酚類、紅曲色素、黃酮、dihydromonacolin-MV、他汀類、類黃酮等，都表現(xiàn)了較強的抗氧化活性，特別是Dimerumicacid在較低的濃度就表現(xiàn)出很強的抗氧化活性[1]，納豆是由大豆經(jīng)納豆菌發(fā)酵而成的一種微生態(tài)健康食品，是東北朝鮮族的傳統(tǒng)食品，也是日本傳統(tǒng)發(fā)酵的大豆制品之一，它不僅有豐富的營養(yǎng)價值，而且具有溶血栓、降血脂、抗氧化、降血壓、保持心血管健康等多種醫(yī)學(xué)保健功能[2-4]，葡萄籽提取物的主要功能成分是原花青素，國內(nèi)外各種體外試驗及動物實驗研究證實， 葡萄籽提取物原花色素具有很強的抗氧化活性，是一種很好的氧自由基清除劑和脂質(zhì)過氧化抑制劑[5]，國內(nèi)對上述三種抗氧化物組合功能的研究還較少， 本研究選取動物進行對比試驗 ，證實納豆紅曲葡萄籽組合抗氧化功能。

2 材料與方法

2.1 樣品與劑量：納豆紅曲葡萄籽膠囊樣品由某生物科技有限公司提供，人用推薦劑量為66.67mg/kg.bw/日（人以60kg計）。按國食藥監(jiān)保化[2012]107號文附件6輔助降血脂功能評價方法，本實驗設(shè)三個劑量組、空白對照組和模型對照組?？瞻讓φ战M給予維持飼料，模型對照組及三個劑量組給予模型飼料，低、中、高三個劑量分別為0.33、0.67和2.0g/kg.bw/日（相當于人推薦量的5、10和30倍），最低劑量組折合成原藥材：相當于納豆0.25 g/ kg.bw/日、紅曲0.033 g/kg.bw/日、葡萄籽1.410.033 g/kg.bw/日（該提取物得率3.5%）。

2.2 實驗動物及設(shè)施：本實驗由浙江省食品藥品檢驗研究院操作，該機構(gòu)為國家食品藥品監(jiān)督管理局遴選確定保健食品注冊檢驗機構(gòu)。實驗用SD大鼠由昭衍（蘇州）新藥研究中心有限公司提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK（蘇）20130003，清潔級，雄性，購入時體重為150-170g，動物質(zhì)量合格證號為No.201710087。維持飼料和模型飼料由江蘇協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)許可證號為蘇飼證（2014）01008，檢測環(huán)境條件：實驗動物使用許可證號為SYX（浙）2016-0009，飼養(yǎng)環(huán)境：溫度范圍20-25℃，相對濕度范圍40-70%。

2.3 實驗試劑與儀器：實驗試劑：無水乙醇（規(guī)格500ml）、乙酸乙酯（規(guī)格500ml）采購于國藥集團化學(xué)試劑有限公司；丙二醛（MDA）測試盒（規(guī)格： 100T/96樣）、蛋白質(zhì)羰基試劑盒（規(guī)格： 50T/25樣）、雙縮尿試劑盒（規(guī)格： 100T/96樣）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）測試盒（規(guī)格： 100T/48樣）、谷胱甘肽（GSH）測試盒（規(guī)格： 100T/96樣）均采購于南京建成生物工程研究所。試驗儀器：美國分子儀器公司生產(chǎn)的紫外可見連續(xù)光譜酶標儀（ MAX190型）；余姚市金諾天平儀器有限公司生產(chǎn)的電子天平（TD12001型）。

2.4 統(tǒng)計方法：實驗數(shù)據(jù)以平均值±標準差（ x±s）表示，方差分析和統(tǒng)計學(xué)檢驗采用孫瑞元等編輯的DAS統(tǒng)計軟件中多組均數(shù)分析。先對數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗，若方差齊，采用單因素方差分析進行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用T檢驗法進行多個劑量組與一個對照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。

3 實驗方法

按國食藥監(jiān)?；痆2012]107號文附件6輔助降血脂功能評價方法進行實驗，具體如下：3.1 對小鼠體重影響試驗：取上述動物100只，按體重隨機分成5個組，設(shè)立1個空白對照組，1個模型對照組和3個受試樣品組，3個劑量組分別給子不同濃度受試樣品液，空白對照組和模型對照組給予同體積的滅菌的純化水，每天一次，連續(xù)灌胃31天。在第1次給樣品前（始重）、給樣品第16天（中重）、給樣品第31天（終重），稱取小鼠體重。3.2 乙醇氧化損傷模型小鼠血清中脂質(zhì)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量測定、蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物蛋白質(zhì)羰基含量測定、抗氧化酶谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力測定、抗氧化物質(zhì)還原性谷胱甘肽（GSH）含量測定：

3.2.1 取上述動物50只，按體重隨機分為5個組，設(shè)立1個空白對照組、1個模型對照組和3個受試樣品組。3個劑量組分別給予不同濃度受試樣品液，空白對照組和模型對照組給予同體積滅菌的純化水，每天一次，連續(xù)灌胃31天，末次灌胃后，模型對照組和3個劑量組禁食16小時（空白對照組不作處理，不禁食取材，然后1次性灌胃給50%乙醇12ml/kg·bw， 6小時后眼靜脈叢取2000rpm離心10min取血清，置于-20C冰箱中備用，根據(jù)試劑盒說明書進行血清中脂質(zhì)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量、抗氧化酶谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力和抗氧化物質(zhì)還原性谷胱甘汰（GSH）含量的測定。

3.2.2 取上述動物50只，按體重隨機分為5個組，設(shè)立1個空白對照組、1個模型對照組和3個受試樣品組。3個劑量組分別給子不同濃度受試樣品液，空白對照組和模型對照組給予同體積滅菌的純化水，每天一次，連續(xù)灌胃31天，末次灌胃后，模型對照組和3個劑量組禁食16小時（空白對照組不作處理，不禁食取材，然后1次性灌胃給子50%乙醇12m/kg·bw， 6小時后眼靜脈從取血2000rpm離心10min取血清，置于20℃冰箱中各用，根據(jù)試劑盒說明書進行蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物蛋白質(zhì)羰基含量的測定。

4 實驗結(jié)果

4.1 對小鼠體重影響試驗結(jié)果，結(jié)果見表1.原始數(shù)據(jù)均符合方差齊性要求。與空白對照組比較，模型對照組和三個劑量組小鼠體重在試驗初期、中期和終期差異均無顯著性意義（P>0.05）。

4.2 血清中脂質(zhì)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量、抗氧化酶谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力和抗氧化物質(zhì)還原性谷胱甘肽（GSH）含量的測定結(jié)果見表2。與空白對照組比較，模型對照組血清MDA含量升高、GSH-PX活力降低、還原性谷胱甘肽（GSH）含量降低，差異具有顯著性意義（P<0.01），與模型對照組比較，3個劑量組MDA含量均降低、3個劑量組GSH-PX活力值均升高、 3個劑量組還原性谷胱甘肽（GSH）含量均升高，差異均具有顯著性意義（P<0.01）。血清中脂質(zhì)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量、抗氧化酶谷胱甘肽過氧化物形（GSH-PX）活力和抗氧化物質(zhì)還原性谷胱甘肽（GSH）結(jié)果皆為陽性。

4.3 血清中蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物蛋白質(zhì)羰基含量測定結(jié)果與空白對照組比較，模型對照組血請蛋白質(zhì)羰基含量升高，差異具有顯著性意義（P0.0），與模型對照組比較，3個劑量組蛋白質(zhì)羰基含量均降低，差異均具有顯著性意義（P<0.01或P<0.05）。血清中蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物蛋白質(zhì)羰基含量測定結(jié)果陽性。

5 小結(jié)與結(jié)論

實驗結(jié)果表明：與陰性對照組比較，模型對照組和三個劑量組小鼠體重在試驗初期、中期和終期差異均無顯著性意義（P>0.05）。與模型對照組比較，三個劑量組MDA含量均降低，差異均具有顯著性意義（P<0.01），說明本組合脂質(zhì)氧化產(chǎn)物測定結(jié)果陽性；與模型對照組比較，三個劑量組蛋白質(zhì)羰基含量均降低，差異均具有顯著性意義（P<0.01或P<0.05），說明本組合蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物蛋白質(zhì)羰基測定結(jié)果陽性；與模型對照組比較，三個劑量組谷胱甘肽過氧化物（GSH-PX）酶活力值均增高，差異均具有顯著性意義（P<0.01），說明本組合抗氧化酶血清中抗氧化酶活力測定結(jié)果陽性；與模型對照組比較，三個劑量組GSH含量均升高，差異均具有顯著性意義，說明本組合抗氧化物質(zhì)測定結(jié)果陽性。結(jié)論：納豆紅曲葡萄籽組合具有抗氧化功能。

參考文獻：

[1]溫學(xué)偉，馬 新，周立平，嘉曉勤.紅曲抗氧化的研究進展.食品工業(yè)科技.2011.02（32）：376-378

[2]段智變，江漢湖，張書霞，等.納豆激酶粗制液對家兔溶血栓作用及其機制研究[J].營養(yǎng)學(xué)報，2003（1）：46-50.

[3]段智變，江曉，江漢湖，等.納豆粗提物抗兔高脂血癥及抗氧化作用的研究[J].營養(yǎng)學(xué)報，2004（4）：296-299.

[4]ESAKIH，NOHARAY，ONOZAKIH，etal.Antioxidative ac-tivity of natto Ⅲ [J]. Journal of Japanese Society of Food Sci-ence and Technology，1990，37（6）：474-477.

[5]豐佃娟，徐貴發(fā).葡萄籽提取物對人體抗氧化能力的影響.山東大學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）.2007（10）：985-987.

[6]傅裕. 體外抗氧化功能評價方法研究進展[J]. 肉類研究，2010（11）：41-46.

[7]陳雪. 不同類型茶葉抗氧化功能的比較研究[D].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[8]胡濱，陳一資，王雪銘，蘇趙.紅花籽油的抗氧化功能研究[J]. 中國糧油學(xué)2016.31（06）：86-92.

[9]陳燕. 蝦青素人參當歸茶葉軟膠囊抗氧化功能與安全性評價[D].武漢輕工大學(xué)，2016