背部推拿法對亞急性衰老并免疫功能低下家兔局部皮膚與腦組織IL-33表達的影響

張 欣 ，崔 建，劉明軍 ，王之虹 ，卓 越，陳邵濤，仲崇文，尚 坤

（1.長春中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，長春 130117；2.長春中醫(yī)藥大學附屬傳統(tǒng)診療醫(yī)院，長春 130022；3.長春中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，長春 130117）

背部推拿法是項目組結合多年臨床實踐經驗總結而成的特色推拿療法，對于改善亞健康狀態(tài)、慢性疲勞綜合征等免疫功能低下的一系列癥狀具有良好的作用[1]。白介素-33（IL-33）作為多功能細胞因子，參與調節(jié)Th2型機體免疫和炎癥反應，被認為是Th2型免疫反應的關鍵活化因子[2-3]。因此，項目組以國家自然科學基金項目的前期研究成果為基礎，通過檢測背部推拿法干預后的亞急性衰老并免疫功能低下家兔模型局部皮膚組織和腦組織中IL-33蛋白表達情況，初步探討背部推拿法對機體免疫功能的調節(jié)作用機制。

1 材料

1.1 動物 4月齡純種新西蘭大耳家兔，28只，由長春中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，體質量（1 947±232）g。按隨機數字表法分為4組，空白組、模型組、推拿組和藥物組，每組7只。

1.2 藥品與儀器 D -半乳糖（成都溶海生物技術有限公司）；黃芪精口服液（江蘇南星藥業(yè)有限公司）；IL-33一抗（美國Santa 公司）；RNA提取試劑盒（德國Qiagen公司）；Realtime PCR儀（美國BIO-RAD公司）；恒溫離心機（法國Jouan公司）；光學顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)（德國Leica公司）。

2 方法

2.1 造模 采用腹腔注射D -半乳糖的方法制造亞急性衰老動物模型。使用濃度為0.9 %的生理鹽水配制D -半乳糖溶液，濃度為1.25%。以50 mg/（kg·d）標準換算注射劑量，腹腔注射1次/d，連續(xù)操作6周?？瞻捉M實驗動物采用等量生理鹽水腹腔注射。推拿組和藥物組在造模結束后的第2天即開展相應治療，治療時注意家兔不做固定處理?？瞻捉M動物每天抓取1次，不做其他處理。

2.2 治療方法

2.2.1 推拿治療 1）治療部位：足太陽膀胱經背部第一側線，自肺俞穴至腎俞穴段（穴位選取按《實驗針灸學》[4]定位）。2）操作方法：①按揉法。將食指和中指分別放置于實驗動物背部兩側足太陽膀胱經第一側線上，以指腹部貼緊治療部位，從頭頸部至尾部方向施以按揉法操作，操作力量約為0.5 kg，操作時間3 min；②推脊法。將食指和中指分別放置于實驗動物背部兩側足太陽膀胱經第一側線上，以指腹部貼緊治療部位，從頭頸部至尾部方向施以按揉法操作，操作力量約為0.5 kg，操作時間3 min；③捏脊法：雙手食中指在前，拇指在后，以指端捏拿住操作部位的皮毛及皮下組織施以捏脊法，操作力量適中，操作方向從尾部至頭頸部，反復操作10遍。以上手法操作力量均經由推拿手法測試儀測定。操作1次/d，10 min/次，連續(xù)操作21 d。

2.2.2 藥物治療 黃芪精口服液（江蘇南星藥業(yè)有限公司生產，批號：國藥準字Z32021206）。口飼，30 g/kg。1次/d，連續(xù)口飼21 d。

2.3 觀察指標及方法 觀察指標：施術部位皮膚與腦組織中IL-33蛋白表達情況。檢測方法：治療結束后，處死實驗動物，采集施術部位的局部皮膚和部分腦組織，采用實時熒光定量PCR法等檢測局部組織中IL-33蛋白的表達情況。

2.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包進行t檢驗和單因素方差分析。數據結果以均數±標準差（x± s ）表示。P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 各組家兔局部皮膚IL-33蛋白表達比較 見表1，圖1（插頁二）。

3.2 各組家兔腦組織IL-33蛋白表達比較 見表2，圖2（插頁二）。

表1 各組家兔局部皮膚IL-33蛋白表達比較（± s ，n = 7） 平均光密度值

表1 各組家兔局部皮膚IL-33蛋白表達比較（± s ，n = 7） 平均光密度值

注：與空白組比較，# P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

組 別 IL-33

表2 各組家兔腦組織IL-33蛋白表達比較（x± s ，n = 7） 平均光密度值

4 討論

中醫(yī)認為，“正氣存內，邪不可干”，人體的“正氣”，即相當于現代醫(yī)學所說的免疫功能。人體十二經脈中的足太陽膀胱經，起于頭面部，止于足部，在所有經脈中走行路線最長，分布最廣；且“太陽主人體一身之表”，被認為是人體的藩籬；太陽為諸陽之首，太陽經在三陽經中陽氣最盛。因此，刺激足太陽膀胱經，能夠有效改善人體正氣盛衰的狀況，同時，足太陽膀胱經的背部循行路線上分布著背俞穴，是人體臟腑經氣輸注于體表的特定穴位，能夠有效培補人體正氣，調節(jié)五臟六腑功能。文獻研究[5-8]也表明，推拿療法能夠有效調整機體的免疫功能。

現代醫(yī)學研究[9-11]表明，衰老最明顯的特質之一是免疫功能的減退。隨著人體的衰老，各免疫器官、免疫細胞、免疫分子的功能也日漸衰退[12-15]。因此，項目組通過制造亞急性衰老動物模型的方法來制造免疫功能低下動物模型。

白細胞介素33（IL-33）是SCHMITZ J等[16]2005年在分析小鼠和人類基因組序列時發(fā)現的。隨后的研究[17]表明，IL-33是免疫反應的一種潛在誘導物，能夠在機體發(fā)生感染、炎癥的時候激活淋巴細胞、嗜堿性粒細胞以及肥大細胞，使之產生類細胞因子，從而發(fā)揮著十分重要的免疫促進作用。IL-33通過結合ST-2發(fā)揮生物學效應，通常被稱為IL-33/ST2信號通路或IL-33/ST2軸[18]。大量的實驗研究[19-20]證實，在機體發(fā)現病原微生物以及激發(fā)免疫應答的過程中，IL-33/ST2信號通路起著重要的作用，是機體免疫功能調節(jié)的重要標志物之一。

通過表1和圖1可見，背部推拿法與口服藥物法均能夠有效提高家兔局部皮膚中IL-33含量，且推拿法對于IL-33含量的增加作用略優(yōu)于口服藥物法。通過表2和圖2可見，背部推拿法與口服藥物法均能夠有效提高家兔腦組織中IL-33含量。IL-33做為Th2型免疫反應的關鍵活化因子，同時在背部推拿法干預的家兔模型局部皮膚組織和腦組織中表達增強，說明背部推拿法調節(jié)機體免疫功能可能是通過提高機體IL-33含量來實現的。

本研究結果表明，背部推拿法調節(jié)機體局部免疫功能的可能機制之一是通過提高機體局部組織與腦組織IL-33含量來實現免疫調節(jié)功能的。相信本研究成果將為背部推拿法作用機制的研究提供了實驗室證據和新的研究思路，也為背部推拿法的臨床應用起到推動作用。