CA—9在早期乳腺癌前哨淋巴結(jié)中的表達及其生物學意義

楊懷才　余文潔　駱國英　賴兆泳

【摘要】 目的：研究前哨淋巴結(jié)中缺氧相關蛋白碳酸酐酶-9（carbonic anhydrase-9，CA-9）的表達與早期乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關系。方法：選取2013年1月-2017年12月在本院全程治療的乳腺癌患者46例，運用免疫組化的方法檢測患者前哨淋巴結(jié)石蠟標本中的CA-9的表達，分析CA-9與早期乳腺癌臨床病理因素的關系。結(jié)果：46例乳腺癌中，前哨淋巴CA-9陽性率為19.57%（9/46）；其中淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的CA-9陽性率為88.89%（8/9），明顯高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的2.7%（1/37），比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；臨床分期Ⅱb、Ⅱa、Ⅰ、0期的CA-9陽性率分別為100%（6/6）、13.64%（3/22）、0、0，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；但CA-9陽性與患者月經(jīng)狀況、原發(fā)腫瘤大小、病理類型、ER、PR、CerbB-2、Ki-67無關（P>0.05）。結(jié)論：前哨淋巴結(jié)中CA-9的表達與早期乳腺癌的腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關，其表達隨臨床分期的升高而明顯增加，但與患者月經(jīng)情況、腫瘤大小、病理類型、ER、PR、CerbB-2、Ki-67無關。

【關鍵詞】 早期乳腺； CA-9； 前哨淋巴結(jié)； 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between carbonic anhydrase-9（CA-9） expression in sentinel lymph nodes and early breast cancer lymph node metastasis.Method：A total of 46 patients with breast cancer who were treated in our hospital from January 2013 to December 2017 were selected，the expression of CA-9 in the paraffin samples of sentinel lymph nodes was detected by immunohistochemistry，the relationship between CA-9 and the clinicopathological factors of early breast cancer were analyzed.Result：In 46 cases of breast cancer，the positive rate of sentinel lymphatic CA-9 was 19.57%（9/46）.Among them，the positive rate of CA-9 with lymph node metastasis was 88.89%（8/9），which was significantly higher than 2.7%（1/37） of lymph nodes without metastasis，the difference was statistically significant（P<0.05）.The positive rate of CA-9 in clinical stage Ⅱb，Ⅱa，Ⅰ and 0 was respectively 100%（6/6），13.64%（3/22），0 and 0，the difference was statistically significant（P<0.05）.But positive CA-9 was not associated with the patients menstrual status，primary tumor size，pathological type，ER，PR，CerbB-2 and Ki-67（P>0.05）.Conclusion：The expression of CA-9 in sentinel lymph nodes was correlated with axillary lymph node metastasis of early stage breast cancer，and its expression was significantly increased with the increase of clinical stage，but it was not related to the patients menstrual situation，tumor size，pathological type，ER，PR，CerbB-2 and Ki-67.

【Key words】 Early breast cancer； CA-9； Sentinel lymph node； Lymph node metastasis

First-authors address：Maternal and Child Health Hospital of Qingyuan City，Qingyuan 511500，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.22.012

乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已成為女性發(fā)病率最高的一種惡性腫瘤（占23.0%），同時也是導致女性惡性腫瘤死亡的主要原因（占14.0%）[1]。乳腺癌淋巴結(jié)狀況是影響患者生存的非常重要的預后因素，有研究報道，早期乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率在20%～30%[2-3]。有很多因素會影響淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，其中缺氧是決定腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的關鍵因素。缺氧往往意味著腫瘤預后差，缺氧相關蛋白碳酸酐酶-9（carbonic anhydrase-9，CA-9）與腫瘤缺氧有關，可調(diào)節(jié)細胞內(nèi)pH值，與腫瘤細胞增殖、細胞黏附、腫瘤進展相關[4-5]。有研究指出，CA-9的表達是早期乳腺癌前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨立高危因素之一[6]。但國內(nèi)有關CA-9在前哨淋巴結(jié)中的表達與早期乳腺癌腋窩轉(zhuǎn)移的關系的研究非常少。本研究通過免疫組化的方法研究CA-9在早期乳腺癌前哨淋巴結(jié)中的表達，分析其與乳腺癌臨床病理指標的關系，為乳腺癌前哨淋巴結(jié)活檢的應用提供新的檢測指標，避免假陰性給患者預后帶來的風險?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月-2017年12月在本院乳腺外科全程治療的乳腺癌患者。納入標準：臨床分期為早期乳腺癌（TisN0M0及T1-2N0-1M0，后者包括Ⅰ期、Ⅱa期、Ⅱb期中僅T2N1M0）的患者。排除標準：多中心、多發(fā)病灶；患側(cè)已行乳腺或腋窩手術(shù)或放療；哺乳期乳腺癌；示蹤劑過敏者；炎性乳癌。術(shù)前用美蘭行前哨淋巴結(jié)染色，將以下二種情況的淋巴結(jié)（沿藍染淋巴管解剖至藍染的淋巴結(jié)、術(shù)中捫及到腫大質(zhì)硬的淋巴結(jié)）均作為前哨淋巴結(jié)一并切除送石蠟病檢。共獲得手術(shù)石蠟包埋標本46例，有完整的臨床及病理資料，患者均為女性，年齡30～64歲，平均47歲；絕經(jīng)前患者28例，絕經(jīng)后患者18例；臨床分期0期7例，Ⅰ期11例，Ⅱa期22例，Ⅱb期6例；原位癌7例，浸潤性導管癌37例，黏液癌2例；淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移9例，無轉(zhuǎn)移37例；雌激素受體（ER）陰性12例，陽性34例；孕激素受體（PR）陰性15例，陽性31例；CerbB-2種原癌基因陰性27例，陽性19例；Ki-67增殖指數(shù)≤14% 16例，14%

1.2 方法 將46例早期乳腺癌前哨淋巴結(jié)石蠟切片脫蠟水化后，滅活內(nèi)源性過氧化物酶，微波法修復抗原，采用EnVision法（免疫酶標方法）檢測CA-9表達，分別在低倍鏡及高倍鏡下觀察組織切片，鏡下組織細胞結(jié)構(gòu)清晰，細胞膜和細胞質(zhì)內(nèi)均有黃色顆粒沉著，著色明顯高于背景為陽性表達細胞，分析CA-9與早期乳腺癌臨床病理因素的關系。

1.3 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

46例乳腺癌中，前哨淋巴CA-9陽性率為19.57%（9/46）；其中淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的CA-9陽性率為88.89%（8/9），明顯高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的2.7%（1/37），比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；臨床分期Ⅱb、Ⅱa、Ⅰ、0期的CA-9陽性率分別為100%（6/6）、13.64%、0、0，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。但CA-9陽性與患者月經(jīng)狀況、原發(fā)腫瘤大小、病理類型、ER、PR、CerbB-2、Ki-67無關（P>0.05）。見表1。

3 討論

缺氧是導致腫瘤發(fā)展的最常見的腫瘤微環(huán)境之一[7]。缺氧誘導因子-1（Hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）是一種可被缺氧激活的轉(zhuǎn)錄因子，在許多腫瘤組織中過表達，是腫瘤適應缺氧微環(huán)境的關鍵調(diào)節(jié)因子[8]。在缺氧狀態(tài)下，HIF-1表達穩(wěn)定，可誘導一系列基因的表達，以支持腫瘤的生存，其中就包括CA-9[9]。CA-9是人類發(fā)現(xiàn)的15種碳酸酐酶家族中的一員，包括胞外活性位點結(jié)構(gòu)域和蛋白多糖樣氨基端，是一種可催化二氧化碳快速生成碳酸氫鹽和質(zhì)子的膜金屬酶，是消除糖酵解所產(chǎn)生的酸性負荷所必需的[10]。因此，CA-9在維持細胞與細胞外間隙的pH梯度方面起著重要的作用。癌癥往往表現(xiàn)出腫瘤代謝異常，其典型的特征是依賴糖酵解而不是氧化磷酸化。這種異常代謝所產(chǎn)生的乳酸量增加，迫使腫瘤細胞發(fā)生一系列的適應反應，以避免酸中毒和細胞內(nèi)pH的紊亂[11]。碳酸酐酶家族通過促進質(zhì)子消除和再循環(huán)利用碳酸氫鹽參與到這一過程中。

在一般情況下，CA-9很少在正常組織中表達[12]，并且與細胞缺氧直接相關，在腫瘤中的表達僅限于壞死區(qū)或低氧區(qū)。CA-9可在卵巢癌、乳腺、結(jié)腸和宮頸的缺氧腫瘤中高度表達[13-15]。這可能是由于腫瘤細胞不被控制的過度增殖，而血管供氧不能相應增加導致缺氧微環(huán)境。細胞內(nèi)pH值對腫瘤細胞的生長和存活起著重要的調(diào)節(jié)作用，而CA-9可調(diào)節(jié)細胞內(nèi)pH。同時CA-9還可通過增加腫瘤細胞的運動能力、侵襲性和轉(zhuǎn)移性來促進腫瘤的發(fā)展。

有研究指出，CA-9在乳腺癌中的表達隨轉(zhuǎn)移和臨床分期升高而增強，并是乳腺癌的預后因素之一[16]。多項研究表明，CA-9與乳腺癌的侵襲性密切相關。有學者研究CA-9的表達及其在乳腺癌分子分型中的重要性，通過免疫組織化學方法檢測117位乳腺癌患者ER、PR、HER-2、CK5/6、EGRF和CA-9的表達，結(jié)果顯示，CA-9的表達不僅與乳腺癌分子分型有關，還與腫瘤分級、激素受體、大體標本的直徑相關，提示CA-9是乳腺癌預后不良的一個獨立指標[17]。文獻[18]報道，CA-9是晚期乳腺癌患者生存不良的標志。多項研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞中CA-9的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。Amatsu等[10]發(fā)現(xiàn)乳腺癌穿刺活檢標本中CA-9的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和淋巴血管浸潤顯著相關。Schütze等[19]用TMA檢測CA-9 mRNA信號強度，發(fā)現(xiàn)CA-9高表達意味著存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無病生存期較短。

本研究結(jié)果顯示，46例乳腺癌中，前哨淋巴CA-9陽性率為19.57%（9/46），其中淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的CA-9陽性率為88.89%（8/9），明顯高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的2.7%（1/37），比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），考慮前哨淋巴結(jié)CA-9的表達可提示早期乳腺癌已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；臨床分期Ⅱb、Ⅱa、Ⅰ、0期的CA-9陽性率分別為100%（6/6）、13.64%、0、0，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明CA-9在前哨淋巴結(jié)中的表達隨臨床分期的升高而明顯增加，但CA-9的表達與患者的月經(jīng)狀況、病理分型、腫瘤大小、ER、PR、CerbB-2、Ki-67狀況無明顯關系（P>0.05）。已經(jīng)有研究報道，CA-9的表達是早期乳腺癌前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨立高危因素之一[16]，這與本研究的結(jié)果相似。在前哨淋巴結(jié)中CA-9高表達預示著淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能性非常大，表明即使是早期乳腺癌，前哨淋巴結(jié)中CA-9高表達，也應進行乳腺癌腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)，從而減少復發(fā)；研究發(fā)現(xiàn)，CA-9的表達還與激素受體、大體標本的直徑、Ki-67相關[16]，但在本研究中CA-9的表達與患者的腫瘤大小、ER、PR、CerbB-2、Ki-67無明顯關系，考慮可能與本研究樣本量較小有關，可在今后的臨床工作中繼續(xù)收集相關標本，進行CA-9的檢測。

綜上所述，前哨淋巴結(jié)中CA-9的表達與早期乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關，其表達隨臨床分期的升高而明顯增加，但與患者月經(jīng)情況、腫瘤大小、病理類型、ER、PR、CerbB-2、Ki-67無關。

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（收稿日期：2018-04-20） （本文編輯：董悅）