• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    低頻電磁場模擬腦電節(jié)律儀對SD大鼠腦含水量及外周血IL-6和TNF-α的影響*

    2018-09-13 09:01:46郭紅燕張金濤李乃義王鳳嬌劉勝松
    實用醫(yī)藥雜志 2018年9期
    關(guān)鍵詞:電磁場腦電節(jié)律

    郭紅燕,張金濤,李乃義,王鳳嬌,劉勝松

    低頻電磁場模擬腦電節(jié)律儀,是筆者所在醫(yī)院自主研制并獲得國家專利(國家實用新型專利公開號:CN201320347)的儀器。此儀器采用低頻電磁場輻射方式進行設(shè)計,通過模擬腦電節(jié)律的電磁場對腦進行刺激,是治療神經(jīng)、心理、精神疾病的新手段[1],用于治療軍人心理應(yīng)激反應(yīng)效果顯著[2]。 為進一步驗證其應(yīng)用安全性,該研究采用腦電節(jié)律儀干預(yù)正常SD大鼠后,觀察其對腦水腫和外周血IL-6、TNF-α的表達的影響。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料

    1.1.1 實驗動物及分組 購于北京維通利華實驗動物技術(shù)公司的SD大鼠60只,雌雄各30只,健康清潔級,8 周齡,體重(230±20) g,控制動物房 12 h白黑交替,溫度為(23±2)℃,適應(yīng)性喂養(yǎng)1 W。先將正常SD大鼠隨機分為四組,每組15只,實驗組在每日固定時間進行干預(yù),發(fā)射源固定于清醒態(tài)大鼠顱頂骨外約2 cm處,1次/d,每次0.5 h,分別為正常對照組(A組),每日置于相同的固定裝置內(nèi)不予以治療;1 HZ 組 (B 組);10 HZ 組(C 組);20 HZ 組 (D組),每日均在固定時間干預(yù),30 min/d,連續(xù)7 d。

    1.1.2 實驗試劑及設(shè)備 酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(IL-6購于南京建成生物工程研究所、TNF-α購于依科賽生物科技有限公司)、低頻電磁場模擬腦電節(jié)律儀(解放軍第八十八醫(yī)院)、臺式冷凍高速離心機(德國 Eppendorf 5810R)、電恒溫烤箱(江蘇太倉市實驗廠)、全自動酶標(biāo)儀 (美國Biotek ELX800UV)、全自動洗板機 (美國 Biotek ELX50/6)、超純水系統(tǒng)(英國 Elga Puelab Bioscien)、漩渦混勻儀(美國 SCI Vortex)、超低溫冰箱(-80 ℃,丹麥 Heo-Holten 3410)、單通道精密移液器 (德國Eppendorf Research)。

    1.2 方 法

    1.2.1 標(biāo)本采集 干預(yù)結(jié)束后進行標(biāo)本采集,在室溫25℃條件下,用10%水合氯醛0.4 ml/100 g行腹腔麻醉注射。麻醉成功后,大鼠仰臥固定四肢,在胸骨左側(cè)心臟搏動最強點穿刺,用抗凝采血管抽血約5 ml,混勻后高速離心機3000轉(zhuǎn)/min離心10 min后取上清液,分裝于離心管內(nèi),凍存于-80℃冰箱留待批量指標(biāo)檢測,采血完成后快速從上頸椎處剪斷頸髓,剪除顱骨小心剝離腦膜,從延髓開始分離輕輕取出整腦,稱腦濕重。置于100℃烤箱烤24 h,稱腦干重。

    1.2.2 腦組織含水量測定 大鼠麻醉后迅速斷頭取腦。用濾紙吸除腦組織表面的水分,電子分析天平(精確至0.001 g)稱取濕重(W),再將腦組織置于100℃的恒溫干燥箱烘烤24 h稱取其干重(D)。應(yīng)用Elliot公式計算腦組織的含水量:腦組織含水量(%)(BWC)=(濕重-干重)/濕重×100%。

    1.2.3 血清學(xué)ELISA指標(biāo)檢測 (1)室溫解凍血清標(biāo)本后備用。(2)自試劑盒中取出所需酶標(biāo)板條,室溫復(fù)溫30 min,將剩余板條密封放回4℃冰箱保存。(3)標(biāo)準(zhǔn)品的配置:1、2、3、4、5 號 IL-6 標(biāo)準(zhǔn)品依次為 5 ng/L、10 ng/L、20 ng/L、40 ng/L、80 ng/L。1、2、3、4、5、6、7、8 號 TNF-α 標(biāo)準(zhǔn)品依次為 0 pg/ml、31.25 pg/ml、62.5 pg/ml、125 pg/ml、250 pg/ml、500 pg/ml、1000pg/mL、2000pg/mL。 (4)設(shè)置好樣本孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和空白孔,做復(fù)孔。(5)加樣:①空白孔不加樣品、生物素標(biāo)記的抗 IL-6(TNF-α)抗體、鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑和終止液,其余各部操作相同;②標(biāo)準(zhǔn)品孔加標(biāo)準(zhǔn)品50μl、鏈霉親和素-HRP50μl;③樣本孔先加待測樣本40μl,再加生物素標(biāo)記的抗 IL-6(TNF--α)抗體 10 μl、鏈霉親和素-HRP50μl, 蓋上封板膜,IL-6在 37℃恒溫箱溫育 60 min(TNF-α 室溫 120 min)。 (6)配液:將濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋成20×應(yīng)用液,備用。(7)洗滌:到時間后,棄去孔內(nèi)液體,并用吸水紙吸干,入洗板機重復(fù)洗板5次,拍干。(8)顯色:每孔顯色劑A、B各 50 μl,混勻,37℃避光孵育 10 min。(9)終止:各孔加入終止液50μl,終止反應(yīng) (此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。(10)測定:以空白孔調(diào)零,終止反應(yīng)10 min內(nèi)

    測定,450 nm波長通過酶標(biāo)儀測定各孔的OD值。(11)實驗結(jié)果計算:以酶標(biāo)孔中標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值通過作圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(X軸為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,Y軸為相應(yīng)的吸光度值),并根據(jù)樣品吸光度值在該曲線圖上分別求得相應(yīng)的大鼠血清學(xué)IL-6與TNF-α的濃度。

    1.2.4 統(tǒng)計方法 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計分析軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。組間比較采用單因素方差分析(F檢驗)。均數(shù)兩兩比較采用LSD法 (最小顯著差異法),P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 實驗動物一般情況分析 整個實驗過程,無動物傷亡事件,精神飲食均正常,活動正常,大小便正常,實驗組與正常對照組的大鼠體重均呈持續(xù)增長狀態(tài)。

    2.2 IL-6的ELISA檢測結(jié)果 正常對照組在血清中含量較低;各實驗組中含量表達無明顯變化,與正常對照組比較(P=0.999),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

    表1 大鼠外周血IL-6的表達(濃度)結(jié)果

    2.3 TNF-α的ELISA檢測結(jié)果 正常對照組在血清中含量較低;實驗組中含量表達無明顯變化,與對照組比較(P=0.935),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

    表2 大鼠外周血TNF-α的表達(濃度)結(jié)果

    2.4 干預(yù)后大鼠腦組織的干濕重變化 A組、B組、C組、D組大鼠腦組織含水量分別為77.45±0.009、77.58±0.008、77.54±0.009、77.65±0.009 (P>0.05),組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。

    表3 大鼠腦含水量的表達結(jié)果

    3 討論

    腦電節(jié)律儀在治療精神疾病方面具有一定的應(yīng)用價值,其原理主要是:通過誘導(dǎo)使大腦的兩半球進入一種同步的狀態(tài)(brain sync),即腦波同步狀態(tài),并誘發(fā)人腦產(chǎn)生α、β、θ、δ頻率的腦電波,這幾種腦電波與人的精神狀態(tài)有著至關(guān)重要的聯(lián)系[1]。目前,通常采用的誘導(dǎo)方式主要是通過聲光刺激與低頻電脈沖刺激;與之不同,筆者研制的腦電節(jié)律同步調(diào)節(jié)儀主要采用了低頻電磁場輻射方式,通過人工制造的腦電節(jié)律電磁場對人體腦部進行刺激誘導(dǎo)[2]。近年研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)顱磁刺激可以改善慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠的抑郁行為及海馬神經(jīng)元的凋亡[3],并對可促進腦梗死后空間學(xué)習(xí)記憶功能恢復(fù)[4];筆者之前通過水迷宮數(shù)據(jù)的變化研究也發(fā)現(xiàn),采用模擬腦電節(jié)律儀的低頻電磁場對正常大鼠的認知功能無不良影響,可能有改善作用[5]。

    近年研究表明腦組織的損傷與炎癥反應(yīng)相關(guān)[3,4]。IL-6、TNF-α為促炎癥性細胞因子,主要調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答,參與免疫細胞發(fā)育、刺激造血、介導(dǎo)炎癥反應(yīng)及參與組織修復(fù)等。IL-6是具有促進生長和分化等調(diào)節(jié)功能的炎癥細胞因子,主要生物學(xué)功能是作為細胞分化因子,促進各類免疫細胞和造血細胞的分化、增殖,并介導(dǎo)急性炎癥反應(yīng)。在機體生理或病理條件下都發(fā)揮重要作用,不僅作用于免疫系統(tǒng),還廣泛作用于神經(jīng)[5]、內(nèi)分泌和心血管等系統(tǒng)。脈絡(luò)叢室管膜細胞、血管內(nèi)皮細胞、星形細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞及神經(jīng)元等中樞神經(jīng)細胞在不同損傷或刺激下可產(chǎn)生IL-6。大量的資料表明,在正常情況下腦內(nèi)IL-6僅有低水平表達,腦損傷后表達明顯增加。在腦損傷的早期IL-6水平明顯增高,對中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥與腦水腫的發(fā)生發(fā)展、神經(jīng)元的退變和丟失以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫方面起著重要作用,而晚期IL-6水平再次升高,促進了腦組織的再生和修復(fù),并可誘導(dǎo)腦微血管內(nèi)皮細胞增生和血管的形成[6]。目前研究表明IL-6的作用可能通過以下機制:IL-6 與其受體(IL-6Ra)結(jié)合后,識別信號轉(zhuǎn)導(dǎo)成分gp130,三者共同形成生物活性的三元復(fù)合體,該復(fù)合體激活細胞內(nèi)的多種激酶,導(dǎo)致蛋白磷酸化和基因表達,進而發(fā)揮生物學(xué)作用。腦損傷后,不同實驗動物腦組織、腦脊液和血清中均可以檢測到IL-6 和 IL-6 受體水平升高[7]。 IL-6 水平增高可以出現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷及感染性病患中。在顱腦損傷早期神經(jīng)膠質(zhì)細胞可以產(chǎn)生IL-6等細胞因子,使神經(jīng)系統(tǒng)及外周血中IL-6的含量顯著增高[8]。

    TNF-α是被激活的巨噬細胞分泌的一種前炎癥細胞因子,是炎癥反應(yīng)重要的起始因子之一。TNF-α可在全身發(fā)揮作用,具有廣泛而復(fù)雜的生物學(xué)活性,釋放增加引起多核白細胞激活聚集并釋放炎癥介質(zhì),誘導(dǎo)缺血神經(jīng)元壞死和凋亡。TNF-α細胞來源極為廣泛,各種免疫細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、表皮細胞、角質(zhì)細胞、平滑肌細胞以及急性腦缺血后的小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、神經(jīng)元等均可分泌TNF-α。TNF-α作為致炎因子通過誘發(fā)和促進炎癥、細胞毒性、凝血等多種凋亡途徑加劇缺血損傷[9]。損傷后TNF-α快速升高,具有神經(jīng)毒性作用,加速神經(jīng)死亡。TNF-α還加重腦水腫,損傷血腦屏障,促進趨化因子的生成,誘導(dǎo)白細胞聚集,產(chǎn)生大量的有害物質(zhì)。動物實驗表明[10],腦損傷發(fā)生后,血漿及腦組織 TNF-α、IL-6含量均出現(xiàn)變化。細胞因子 IL-1β,TNF-α,IL-6,IL-8 等通過炎癥細胞的活化,使血腦屏障(blood brain barrier,BBB)的通透性增加[11]。TNF-α早期主要通過對毛細血管的直接毒性作用,使毛細血管的通透性增加,開放BBB,導(dǎo)致腦水腫。

    既往研究表明,經(jīng)顱磁刺激能利用時變磁場產(chǎn)生感應(yīng)電場,引起生物電流在組織中傳導(dǎo),使得神經(jīng)纖維、神經(jīng)元和肌肉去極化,用以改變皮質(zhì)神經(jīng)細胞的動作電位,影響腦內(nèi)代謝和神經(jīng)電活動[12,13]。經(jīng)顱磁刺激治療廣泛性焦慮障礙的療效顯著[14];趙琳等研究經(jīng)顱磁刺激可以改善慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠的抑郁行為及海馬神經(jīng)元的凋亡[15]。張靖慧等研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)顱磁刺激對可促進腦梗死后空間學(xué)習(xí)記憶功能恢復(fù),并可能通過增加患側(cè)海馬區(qū)IL-1βmRNA表達來實現(xiàn)[16]。而經(jīng)顱磁刺激對正常大鼠周圍血TNF-α、IL-6的影響鮮有報道。筆者所在醫(yī)院自主研制的腦電節(jié)律儀其作用機制是:采用低頻電磁場方式制造的腦電節(jié)律對腦部進行刺激,利用反饋原理起安眠、精神松弛等治療效果,為治療精神疾病及心理疾病提供了新手段,而且不存在藥物依賴及不良作用。

    該研究進一步通過干預(yù)正常大鼠,觀察了該節(jié)律儀所采用低頻電磁場對腦含水量及外周血白介素-6、TNF-α的影響。研究發(fā)現(xiàn),與對照組比較,實驗組在每日固定時間,1次/d,30 min/次,連續(xù)7 d進行低頻電磁場輻射后,1 HZ組 (B組);10 HZ組(C組);20 HZ組(D組)大鼠腦組織含水量組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義;正常對照組在血清中IL-6、TNF-α含量均較低;低頻電磁場輻射1周后各實驗組中含量表達無明顯變化,組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,說明腦電節(jié)律儀對正常大鼠周圍血清中的TNF-α、IL-6含量無明顯影響,既沒有破壞血腦屏障導(dǎo)致腦水腫,又未啟動機體的炎癥免疫反應(yīng),對大鼠具有安全性。該研究探討了TNF-α、IL-6因子結(jié)合腦水腫反映其安全性,但是有關(guān)確切機制和臨床還有待進一步驗證。

    猜你喜歡
    電磁場腦電節(jié)律
    外加正交電磁場等離子體中電磁波透射特性
    任意方位電偶源的MCSEM電磁場三維正演
    電磁場與電磁波課程教學(xué)改革探析
    現(xiàn)代實用腦電地形圖學(xué)(續(xù))
    現(xiàn)代實用腦電地形圖學(xué)(續(xù))
    現(xiàn)代實用腦電地形圖學(xué)(續(xù)) 第五章 腦電地形圖的臨床中的應(yīng)用
    蜆木扦插苗人工幼林生長節(jié)律
    現(xiàn)代實用腦電地形圖學(xué)(續(xù)) 第五章 腦電地形圖在臨床中的應(yīng)用
    慢性給予GHRP-6對小鼠跑輪運動日節(jié)律的影響
    模擬微重力對NIH3T3細胞近日節(jié)律基因的影響
    99国产精品免费福利视频| 精品高清国产在线一区| 免费高清在线观看日韩| 在线 av 中文字幕| 亚洲国产av影院在线观看| 成年人免费黄色播放视频| 少妇粗大呻吟视频| 精品国产国语对白av| 欧美成人免费av一区二区三区 | 多毛熟女@视频| 黄片大片在线免费观看| 国产不卡av网站在线观看| 婷婷成人精品国产| 国产精品 欧美亚洲| 久久国产精品大桥未久av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日本av手机在线免费观看| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲 国产 在线| 亚洲国产欧美网| 欧美中文综合在线视频| 免费观看a级毛片全部| 国产有黄有色有爽视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 妹子高潮喷水视频| 一本久久精品| 怎么达到女性高潮| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 18在线观看网站| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产精品久久久av美女十八| 麻豆乱淫一区二区| 国产成人精品久久二区二区免费| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久亚洲精品不卡| 午夜免费成人在线视频| 亚洲专区国产一区二区| 丰满少妇做爰视频| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜老司机福利片| 久久久久久久久久久久大奶| 岛国毛片在线播放| 精品国产一区二区三区四区第35| 成人av一区二区三区在线看| 久久久久网色| 在线观看舔阴道视频| 搡老乐熟女国产| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲国产av影院在线观看| 国产精品av久久久久免费| 国产成人系列免费观看| 女性生殖器流出的白浆| 国产男靠女视频免费网站| 岛国在线观看网站| 高清在线国产一区| 女警被强在线播放| 交换朋友夫妻互换小说| 深夜精品福利| 99国产极品粉嫩在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 久久青草综合色| 国产精品免费大片| 黄色怎么调成土黄色| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产精品久久久久成人av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 免费观看av网站的网址| 国产亚洲欧美在线一区二区| 欧美午夜高清在线| 国产精品久久久av美女十八| 精品国产亚洲在线| 淫妇啪啪啪对白视频| 香蕉国产在线看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 老司机影院毛片| 亚洲av美国av| 精品国产一区二区三区四区第35| 婷婷成人精品国产| 9热在线视频观看99| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 黄频高清免费视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲美女黄片视频| 一级a爱视频在线免费观看| 咕卡用的链子| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲国产欧美在线一区| 后天国语完整版免费观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| www.999成人在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 三上悠亚av全集在线观看| www日本在线高清视频| 色综合婷婷激情| 午夜免费鲁丝| 免费av中文字幕在线| 极品人妻少妇av视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 18禁美女被吸乳视频| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲av美国av| 人妻 亚洲 视频| 丁香六月天网| 成人av一区二区三区在线看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美精品一区二区免费开放| 国产免费福利视频在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 91成人精品电影| 久久精品国产a三级三级三级| 蜜桃国产av成人99| 精品国产亚洲在线| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲成人手机| 中文字幕精品免费在线观看视频| 热re99久久国产66热| 中文字幕av电影在线播放| 淫妇啪啪啪对白视频| 成人影院久久| 正在播放国产对白刺激| 黄色丝袜av网址大全| 大片电影免费在线观看免费| 首页视频小说图片口味搜索| av片东京热男人的天堂| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久9热在线精品视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日韩大码丰满熟妇| 最近最新免费中文字幕在线| 中亚洲国语对白在线视频| 大陆偷拍与自拍| 女性生殖器流出的白浆| 岛国毛片在线播放| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 高清欧美精品videossex| 在线观看舔阴道视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 大片免费播放器 马上看| 亚洲成人手机| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产av精品麻豆| 日韩大码丰满熟妇| 老司机在亚洲福利影院| 中文欧美无线码| 999精品在线视频| 国产男女内射视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 美女主播在线视频| 99精品久久久久人妻精品| 国产黄频视频在线观看| 超色免费av| a在线观看视频网站| 丝袜人妻中文字幕| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 中亚洲国语对白在线视频| 最新的欧美精品一区二区| 99riav亚洲国产免费| 这个男人来自地球电影免费观看| 免费看十八禁软件| 午夜福利在线观看吧| 欧美日韩成人在线一区二区| 欧美成狂野欧美在线观看| 中文欧美无线码| 中文字幕人妻熟女乱码| 精品国产一区二区久久| e午夜精品久久久久久久| 成年女人毛片免费观看观看9 | kizo精华| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 在线天堂中文资源库| 国产精品.久久久| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 黄色视频,在线免费观看| 丝袜美腿诱惑在线| 精品免费久久久久久久清纯 | 亚洲精品一二三| 考比视频在线观看| 深夜精品福利| 国产三级黄色录像| 天天添夜夜摸| 国产成人精品久久二区二区91| 精品福利永久在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲人成电影观看| 91国产中文字幕| tocl精华| 黄片大片在线免费观看| 69精品国产乱码久久久| 久久久国产成人免费| 国产国语露脸激情在线看| 极品人妻少妇av视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 波多野结衣一区麻豆| 男人操女人黄网站| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲成国产人片在线观看| 国产区一区二久久| 最新在线观看一区二区三区| 国产成人欧美在线观看 | av福利片在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 大码成人一级视频| svipshipincom国产片| 成人影院久久| 日本av手机在线免费观看| 真人做人爱边吃奶动态| 9191精品国产免费久久| 无限看片的www在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 在线观看免费视频日本深夜| 激情视频va一区二区三区| 黄色 视频免费看| 男人舔女人的私密视频| 一个人免费看片子| 两个人免费观看高清视频| 深夜精品福利| 精品久久久久久久毛片微露脸| 18禁美女被吸乳视频| 国产av国产精品国产| 久久99热这里只频精品6学生| 国产1区2区3区精品| 欧美性长视频在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 男女午夜视频在线观看| 久久久欧美国产精品| 国产一区二区激情短视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 丝袜人妻中文字幕| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 淫妇啪啪啪对白视频| 精品少妇久久久久久888优播| 在线观看舔阴道视频| 黄色成人免费大全| 国产成人欧美| 丁香六月天网| 久久中文看片网| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲一码二码三码区别大吗| 成人手机av| 亚洲免费av在线视频| 欧美精品av麻豆av| 黄色怎么调成土黄色| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲中文字幕日韩| 悠悠久久av| 精品视频人人做人人爽| 高清视频免费观看一区二区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久久久久久精品吃奶| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 午夜福利影视在线免费观看| 久热爱精品视频在线9| www.自偷自拍.com| 午夜福利一区二区在线看| 午夜福利免费观看在线| 午夜福利在线观看吧| 极品人妻少妇av视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品国产国语对白av| 麻豆成人av在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 国产日韩欧美亚洲二区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产单亲对白刺激| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 在线观看66精品国产| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲av美国av| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产亚洲欧美精品永久| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 动漫黄色视频在线观看| 精品视频人人做人人爽| 黄色视频,在线免费观看| 欧美日韩一级在线毛片| 狂野欧美激情性xxxx| 窝窝影院91人妻| 国产日韩欧美视频二区| 在线观看一区二区三区激情| av有码第一页| 两性夫妻黄色片| 操出白浆在线播放| 黄色丝袜av网址大全| 超碰成人久久| 国产精品影院久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一区二区三区精品91| 黑人猛操日本美女一级片| 午夜福利影视在线免费观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久天堂一区二区三区四区| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产97色在线日韩免费| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日本黄色视频三级网站网址 | 国产在线观看jvid| 国产精品.久久久| 国产av又大| 一级毛片电影观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲中文av在线| 99久久国产精品久久久| 久久久久久久久免费视频了| 97人妻天天添夜夜摸| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产精品九九99| 国产黄频视频在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 99国产精品一区二区三区| 99国产极品粉嫩在线观看| 黄色视频不卡| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲精品国产一区二区精华液| 大片免费播放器 马上看| 怎么达到女性高潮| 麻豆成人av在线观看| 国产不卡一卡二| 久久人妻熟女aⅴ| 午夜老司机福利片| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产日韩欧美视频二区| 精品一区二区三卡| 国产精品av久久久久免费| 视频区图区小说| 久久 成人 亚洲| 欧美 日韩 精品 国产| 精品少妇黑人巨大在线播放| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲专区字幕在线| 久久久精品免费免费高清| 性色av乱码一区二区三区2| 一区二区av电影网| 日日爽夜夜爽网站| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美黑人精品巨大| 久久午夜亚洲精品久久| 久久午夜综合久久蜜桃| 一二三四在线观看免费中文在| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久人妻熟女aⅴ| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产亚洲精品一区二区www | 一二三四在线观看免费中文在| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 搡老熟女国产l中国老女人| 999久久久国产精品视频| 久久久久精品人妻al黑| 成年人黄色毛片网站| 久久国产精品人妻蜜桃| 日本黄色视频三级网站网址 | 亚洲精品在线观看二区| 日本黄色日本黄色录像| a在线观看视频网站| 久久ye,这里只有精品| 亚洲国产成人一精品久久久| 天天操日日干夜夜撸| 国产高清国产精品国产三级| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久中文字幕一级| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲午夜理论影院| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲九九香蕉| 成人国语在线视频| 国产在视频线精品| 丁香欧美五月| 69av精品久久久久久 | 美女视频免费永久观看网站| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲人成电影观看| 黄色a级毛片大全视频| 国产日韩欧美视频二区| 1024香蕉在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 一进一出抽搐动态| 精品国产一区二区久久| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| a级片在线免费高清观看视频| 丝瓜视频免费看黄片| 午夜福利乱码中文字幕| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 精品欧美一区二区三区在线| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美激情 高清一区二区三区| 免费观看a级毛片全部| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲伊人色综图| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产亚洲欧美精品永久| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 99精品久久久久人妻精品| 久久 成人 亚洲| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲黑人精品在线| 久久人妻av系列| 18禁观看日本| 精品久久久久久久毛片微露脸| 老司机午夜福利在线观看视频 | 97在线人人人人妻| 久久亚洲真实| 最新美女视频免费是黄的| 黄色 视频免费看| 黑丝袜美女国产一区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一级a爱视频在线免费观看| 高清视频免费观看一区二区| 99久久国产精品久久久| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产一卡二卡三卡精品| 波多野结衣一区麻豆| 一本久久精品| 欧美变态另类bdsm刘玥| 香蕉国产在线看| 在线观看舔阴道视频| 国产高清激情床上av| 亚洲人成电影免费在线| 五月天丁香电影| 精品少妇黑人巨大在线播放| 99热网站在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 女性生殖器流出的白浆| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲成人免费电影在线观看| 极品教师在线免费播放| 欧美国产精品一级二级三级| 少妇粗大呻吟视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲avbb在线观看| 日韩免费av在线播放| 亚洲av电影在线进入| 免费观看人在逋| 色尼玛亚洲综合影院| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 天堂中文最新版在线下载| 无人区码免费观看不卡 | 露出奶头的视频| 操出白浆在线播放| 女性被躁到高潮视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲国产看品久久| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产精品久久久av美女十八| 这个男人来自地球电影免费观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 麻豆乱淫一区二区| 99re6热这里在线精品视频| 桃花免费在线播放| 一级黄色大片毛片| 91精品三级在线观看| 久久久久视频综合| 亚洲欧美激情在线| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品久久电影中文字幕 | 黑人猛操日本美女一级片| 18禁观看日本| 日韩人妻精品一区2区三区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久久国产欧美日韩av| 午夜福利在线观看吧| netflix在线观看网站| 午夜福利,免费看| 亚洲成a人片在线一区二区| www日本在线高清视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产激情久久老熟女| 自线自在国产av| 免费人妻精品一区二区三区视频| 美国免费a级毛片| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲精品在线观看二区| 一区二区三区精品91| 我要看黄色一级片免费的| 老汉色av国产亚洲站长工具| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美激情高清一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 蜜桃在线观看..| 亚洲综合色网址| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久久久网色| 亚洲性夜色夜夜综合| xxxhd国产人妻xxx| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 69精品国产乱码久久久| 水蜜桃什么品种好| 国产亚洲精品久久久久5区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 18禁国产床啪视频网站| 欧美成人免费av一区二区三区 | 一区二区三区精品91| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲男人天堂网一区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久热爱精品视频在线9| 久久av网站| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 日韩一区二区三区影片| 久久av网站| 黄色丝袜av网址大全| 国产xxxxx性猛交| 亚洲成a人片在线一区二区| 少妇粗大呻吟视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 香蕉久久夜色| videosex国产| 精品少妇久久久久久888优播| 午夜福利,免费看| 免费av中文字幕在线| 美女午夜性视频免费| 国产区一区二久久| 成人国产一区最新在线观看| 国产色视频综合| 久久国产精品影院| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 91麻豆精品激情在线观看国产 | tube8黄色片| 极品人妻少妇av视频| 三上悠亚av全集在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 女同久久另类99精品国产91| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 极品教师在线免费播放| 美女福利国产在线| 91精品三级在线观看| 伦理电影免费视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 日韩大片免费观看网站| 成人国产一区最新在线观看| 日韩有码中文字幕| 欧美 日韩 精品 国产| 成年人黄色毛片网站| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产精品 国内视频| 欧美日韩av久久| 天天操日日干夜夜撸| 国产老妇伦熟女老妇高清| 男女免费视频国产| 欧美国产精品va在线观看不卡| 俄罗斯特黄特色一大片| 搡老熟女国产l中国老女人| 大陆偷拍与自拍| 午夜91福利影院| 亚洲性夜色夜夜综合| 在线观看舔阴道视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品一区二区三区av网在线观看 | 国产伦人伦偷精品视频| 久久精品国产综合久久久| 露出奶头的视频| 丰满少妇做爰视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 色综合婷婷激情| 国产精品av久久久久免费| 黄色怎么调成土黄色| 十八禁网站网址无遮挡| 一级毛片女人18水好多| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 中文字幕av电影在线播放| 国产精品九九99| 99久久99久久久精品蜜桃| 90打野战视频偷拍视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产精品av久久久久免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲七黄色美女视频| 手机成人av网站| 大香蕉久久成人网| 午夜精品国产一区二区电影| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲全国av大片| 桃花免费在线播放| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久狼人影院|