慢性阻塞性肺病患者β2-AR基因多態(tài)性與復(fù)方薤白膠囊療效的相關(guān)性研究

徐維國(guó) 崔蓉 岳崇梅 吳君華 李丹 謝佳俊

〔摘要〕 目的 研究慢性阻塞性肺?。–OPD）患者β2-腎上腺素受體（β2-AR）編碼區(qū)16、27位點(diǎn)基因多態(tài)性與復(fù)方薤白膠囊療效的相關(guān)性。方法 選擇2015年1月至2018年1月本院收治的COPD患者210例，均進(jìn)行基因突變類型測(cè)序和復(fù)方薤白膠囊治療，分別于治療前、治療第3天和第7天進(jìn)行第1秒用力呼氣量（FEV1）檢測(cè)，并于治療前、治療第7天和第14天進(jìn)行圣喬治呼吸問(wèn)卷（SGRQ）調(diào)查及慢性阻塞性肺疾病評(píng)估測(cè)試（CAT）。結(jié)果 210例患者根據(jù)基因型分為野生型純合子組97例、野生型與突變型基因雜合子組83例、突變型基因純合子或雜合子組30例。治療第3天和第7天，3組FEV1水平均顯著升高且組間有差異（P<0.05），其中野生型純合子組>野生型與突變型基因雜合子組>突變型基因純合子或雜合子組（P<0.05）。治療第7天和第14天，3組SGRQ評(píng)分及CAT評(píng)分均顯著降低且組間有差異（P<0.05），其中野生型純合子組低于野生型與突變型基因雜合子組及突變型基因純合子或雜合子組（P<0.05）。結(jié)論 β2-AR基因多態(tài)性會(huì)影響復(fù)方薤白膠囊療效。

〔關(guān)鍵詞〕 慢性阻塞性肺病;β2-腎上腺素受體;基因多態(tài)性;復(fù)方薤白膠囊

〔中圖分類號(hào)〕R256.1;R563.1? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕B? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2018.12.020

慢性阻塞性肺?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是慢性加重性呼吸系統(tǒng)性疾病，隨著生活環(huán)境的改變，其患病人數(shù)逐年上升，相關(guān)調(diào)查顯示，COPD在中老年人群中發(fā)病率可達(dá)到8%以上[1-2]。COPD重要特征是不完全可逆性氣流受限，慢性咳嗽、咳痰、氣短、喘息、呼吸困難等是其主要臨床表現(xiàn)[3]。目前臨床對(duì)COPD以藥物治療為主，復(fù)方薤白膠囊具有止咳平喘、祛痰抗炎之效[4]，是COPD治療較為常用藥物，但是其療效并不相近。β2-腎上腺素受體（β2-AR）是介導(dǎo)兒茶酚胺作用的一類組織受體，研究表明，其與COPD發(fā)生及發(fā)展相關(guān)[5]。為探討β2-AR基因多態(tài)性與復(fù)方薤白膠囊療效的相關(guān)性，本研究對(duì)210例COPD患者進(jìn)行β2-AR基因多態(tài)性分析，具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1? 一般資料

將2015年1月至2018年1月本院收治的210例COPD患者作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組制定的COPD診治指南[6];（2）患者出現(xiàn)咳嗽、咳痰、胸悶、喘息、呼吸困難等癥狀;（3）肺功能測(cè)定結(jié)果顯示混合性通氣功能障礙;（4）患者及家屬均簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并嚴(yán)重心、肝、腎功能不全;（2）對(duì)相關(guān)藥物過(guò)敏者;（3）哮喘;（4）合并彌漫性支氣管炎癥;（5）合并放射性或過(guò)敏性肺炎;（6）拒絕參與本次研究。210例患者中男116例，女94例，年齡35～70（52.24±5.62）歲，病程0.7～7（3.77±1.42）年。

1.2? 方法

1.2.1? PCR檢測(cè)? （1）提取DNA：抽取患者外周靜脈血2 mL，以水飽和酚/氯仿法提取染色體DNA，DNA濃度為0.2～0.3 g/μL。（2）PCR反應(yīng)：引物根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[7]設(shè)計(jì)，以等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)β2-AR編碼區(qū)16、27位點(diǎn)基因（分別為Arg16Gly、Gln27Glu），Arg16Gly多態(tài)性擴(kuò)增引物序列為正鏈Arg16：5-CTT CTT GCT GGC ACC CAA TA-3，Gly16：5-CTT CTT GCT GGC ACC CAA TG-3，反鏈：5-CCA ATT TAG GAG GAT GTA AAC TTC-3;Gln27Glu多態(tài)性擴(kuò)增引物序列為正鏈Gln27：5-GGA CCA CGA CGT CAC GCA GC-3，Glu27：5-GGA CCA CGA CGT CAC GCA GG-3，反鏈：5-ACA ATC CAC ACC ATC AGA AT-3。（3）PCR產(chǎn)物測(cè)序：反應(yīng)總體系50 μL （DNA模板1 μL），于94 ℃環(huán)境下預(yù)變性5 min，再于94 ℃環(huán)境下變性2 min，16位點(diǎn)和27位點(diǎn)分別于55 ℃和52 ℃退火1 min，27位點(diǎn)72 ℃延伸1 min，循環(huán)35次，最后1次72 ℃延伸10 min。

1.2.2? β2-AR基因多態(tài)性檢測(cè)? 等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物+1%瓊脂糖凝膠，電泳槽中進(jìn)行電泳，電泳儀為ECP3000三恒電泳儀，以全自動(dòng)紫外與可見(jiàn)分析裝置觀察分析，根據(jù)電泳帶判斷基因型。

1.2.3? 治療方法? 所有患者均給予復(fù)方薤白膠囊（江蘇省中醫(yī)院藥材科制劑部，批號(hào)：370202A，0.35 g/粒）口服，2.1 g/次，3次/d，連續(xù)服用14 d，治療期間不再使用其他止咳平喘藥物。

1.3? 觀察指標(biāo)

（1）分別于治療前、治療第3天和第7天，采用意大利科時(shí)邁PFT1肺功能儀檢測(cè)第1秒用力呼氣量（FEV1）。（2）分別于治療前、治療第7天和第14天，對(duì)患者進(jìn)行圣喬治呼吸問(wèn)卷（SGRQ）[8]調(diào)查，一共包含54個(gè)條目與3個(gè)分問(wèn)卷，分值范圍為0～100分，分?jǐn)?shù)越高表示對(duì)患者生活影響越嚴(yán)重。（3）分別于治療前、治療第7天和第14天，對(duì)患者進(jìn)行慢性阻塞性肺疾病評(píng)估測(cè)試（CAT）[9]，一共包含8個(gè)問(wèn)題，各問(wèn)題評(píng)分0～5分，總分值范圍0～40分，分?jǐn)?shù)越高表示患者健康狀態(tài)越差。

1.4? 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0軟件。計(jì)數(shù)資料以%表示，χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料采用“x±s”表示，兩兩比較行t檢驗(yàn)，多組間比較行F檢驗(yàn);P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? β2-AR基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果

210例患者根據(jù)基因型分為野生型純合子組、野生型與突變型基因雜合子組、突變型基因純合子或雜合子組，例數(shù)分別為97例、83例、30例。3組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

2.2? 3組患者不同時(shí)間點(diǎn)FEV1水平比較

治療前3組FEV1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療第3天和第7天，3組FEV1水平均顯著升高且組間有差異，其中野生型純合子組高于野生型與突變型基因雜合子組和突變型基因純合子或雜合子組，突變型基因雜合子組高于突變型基因純合子或雜合子組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3? 3組患者不同時(shí)間點(diǎn)SGRQ評(píng)分比較

治療前3組SGRQ評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療第7天和第14天，3組SGRQ評(píng)分均顯著降低且組間有差異，其中野生型純合子組低于野生型與突變型基因雜合子組和突變型基因純合子或雜合子組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4? 3組患者不同時(shí)間點(diǎn)CAT評(píng)分比較

治療前3組CAT評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療第7天和第14天，3組CAT評(píng)分均顯著降低且組間有差異，其中野生型純合子組低于野生型與突變型基因雜合子組和突變型基因純合子或雜合子組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表4。

3 討論

COPD在中醫(yī)中并無(wú)對(duì)應(yīng)稱呼，根據(jù)其癥狀表現(xiàn)，一般將之歸為“喘證”“肺脹”“痹證”等范疇[10]?；颊呖人?、哮喘、痰飲不退，遷延積重，導(dǎo)致陽(yáng)氣虧損，臟腑虧虛，氣化失司，痰濁內(nèi)生郁于肺，遏阻胸陽(yáng)。復(fù)方薤白膠囊藥物成分為薤白、瓜蔞、姜半夏、黃連，其中薤白化痰通陽(yáng)，瓜蔞鎮(zhèn)咳祛痰、解熱利尿，姜半夏降逆止嘔、化痰平喘，黃連清熱燥濕、瀉火解毒，合方共奏鎮(zhèn)咳祛痰、清熱解毒之效。曾亮等[11]研究表示復(fù)方薤白膠囊能夠明顯減輕COPD模型大鼠支氣管壁和平滑肌增厚，抑制氣道重塑，延緩COPD發(fā)展。本次結(jié)果中所有患者治療后FEV1水平均顯著升高，SGRQ評(píng)分和CAT評(píng)分均顯著降低，表明復(fù)方薤白膠囊對(duì)COPD患者具有一定治療效果，可以改善患者肺功能，減輕疾病對(duì)生活造成的不良影響，提高機(jī)體健康水平。

研究表明，COPD為環(huán)境與遺傳因素共同作用的多基因疾病，且對(duì)相關(guān)影響基因進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)β2-AR基因改變會(huì)影響支氣管和血管反應(yīng)性[12-13]。β2-AR基因完整序列最早是由Kobika等[14]測(cè)出，該基因無(wú)內(nèi)含子，由7個(gè)疏水殘基組成跨膜結(jié)構(gòu)，總共包含413個(gè)氨基酸。上世紀(jì)九十年代，Reishaus等[15]對(duì)β2-AR基因進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其編碼區(qū)存在多種堿基突變點(diǎn)，其中突變頻率最高的兩個(gè)位點(diǎn)是16和27位點(diǎn)。史有奎等[16]研究表示，β2-AR編碼區(qū)16、27位點(diǎn)基因多態(tài)性可影響COPD患者肺功能。本次研究對(duì)210例患者進(jìn)行外周靜脈血β2-AR編碼區(qū)16、27位點(diǎn)基因多態(tài)性檢測(cè)，并根據(jù)基因型將其分為野生型純合子組、野生型與突變型基因雜合子組、突變型基因純合子或雜合子組。3組FEV1水平檢測(cè)結(jié)果顯示，治療第3天和第7天時(shí)，野生型純合子組>野生型與突變型基因雜合子組>突變型基因純合子或雜合子組，表示不同β2-AR編碼區(qū)16、27位點(diǎn)基因型復(fù)方薤白膠囊治療效果不一，肺功能改善程度不同。并且治療第7天和第14天時(shí)，野生型純合子組SGRQ評(píng)分和CAT評(píng)分均低于野生型與突變型基因雜合子組與突變型基因純合子或雜合子組，說(shuō)明帶有突變型基因組復(fù)方薤白膠囊治療效果會(huì)受到影響。

綜上，本次研究從基因?qū)哟谓沂玖薈OPD患者外周靜脈血β2-AR基因多態(tài)性，多角度評(píng)價(jià)了復(fù)方薤白膠囊對(duì)COPD患者治療效果，并得出了β2-AR基因多態(tài)性會(huì)影響復(fù)方薤白膠囊療效的結(jié)論，臨床可通過(guò)分析COPD患者β2-AR基因多態(tài)性來(lái)評(píng)估復(fù)方薤白膠囊療效。但本次研究亦存在不足，未探討患者體內(nèi)復(fù)方薤白膠囊濃度和其在體內(nèi)產(chǎn)生的活性代謝產(chǎn)物對(duì)效果的影響，且僅研究16和27位點(diǎn)基因多態(tài)性，未分析β2-AR其它位點(diǎn)基因多態(tài)性對(duì)復(fù)方薤白膠囊療效的影響，因此還需擴(kuò)大樣本量再進(jìn)行更加深入的研究。

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