2011～2016年廣西羅非魚源無乳鏈球菌的耐藥譜型分析

黃艷華 馬沙 韓書煜 黃偉德 韋慕蘭 蒙蘭麗 呂小麗 覃惠明 李德壯 梁靜真 黃鈞

摘要：【目的】了解廣西羅非魚源無乳鏈球菌耐藥譜的變遷規(guī)律，為羅非魚無乳鏈球菌病的有效防控和科學(xué)用藥提供參考?！痉椒ā坎捎肒-B紙片擴(kuò)散法對(duì)分離自廣西南寧、玉林、柳州、河池、北海和百色等市養(yǎng)殖患病羅非魚的48株無乳鏈球菌株進(jìn)行抗生素耐藥性分析；并以抗生素的抑菌圈直徑為變量，采用SPSS 18.0對(duì)無乳鏈球菌株進(jìn)行聚類分析，以平方Euclidean距離表示菌株間的耐藥性同類關(guān)系?！窘Y(jié)果】48株廣西羅非魚源無乳鏈球菌的耐藥譜型共有19種，譜型豐富度為39.6%。所有耐藥譜型均為多重耐藥譜型，耐藥種數(shù)至少有3種。從采樣地點(diǎn)來看，南寧市、玉林市、柳州市、河池市、北海市和百色市的分離株分別包含5、9、8、2、1和2種耐藥譜型。2011～2016年各年份的菌株耐藥譜型為：2011年10種（A、B、F、J、K、N、O、P、Q和S耐藥譜型），2012年4種（B、H、N和S耐藥譜型），2013年2種（L和M耐藥譜型），2014年3種（B、D和S耐藥譜型），2015年9種（B、C、D、E、G、H、J、R和S耐藥譜型），2016年3種（B、I和J耐藥譜型）。聚類分析將48株廣西羅非魚源無乳鏈球菌分成2個(gè)組群（Group I和Group II）和6個(gè)亞群（i～vi），其中Group I和Group II組群均含有11種耐藥譜型，耐藥譜型豐富度分別為37.9%和57.9%；Group I和Group II兩組群無乳鏈球菌株的抗生素敏感性差異主要取決于其對(duì)恩諾沙星、氟苯尼考和環(huán)丙沙星的敏感率或耐藥率?！窘Y(jié)論】2011～2016年廣西羅非魚源無乳鏈球菌的耐藥譜型呈多樣性，譜型豐富度較高，且因來源地不同和年際變化存在一定差異性。此外，通過聚類分析可根據(jù)無乳鏈球菌的耐藥情況對(duì)其進(jìn)行有效分型，建議作為無乳鏈球菌流行病學(xué)分型方法給予推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞： 羅非魚；無乳鏈球菌；耐藥譜；聚類分析；廣西

中圖分類號(hào)： S965.125 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2018）05-1023-09

Abstract：【Objective】The study investigated the laws of change of antibiogram types of tilapia Streptococcus agalactiae strains in Guangxi so as to offer reference for effective control and scientific medication of S. agalactiae disease in tilapia. 【Method】The antibiotic resistances of 48 strains of S. agalactiae isolated from diseased tilapia cultured in Nanning， Yulin， Liuzhou， Hechi， Beihai and Baise of Guangxi were tested by K-B disc diffusion method. Clustering of S. agalac-tiae was analysed by SPSS 18.0， using the inhibition zone diameter of antibiotics as a variable. Homogeneous relationship of antibiotics resistance among the strains was indicated by squared Euclidean distance. 【Result】Results showed that 48 strains of tilapia S. agalactiae formed 19 antibiogram types with an antibiogram abundance of 39.6%. All the antibiogram types were multi-resistant patterns and contained at least three kinds of antibiotics to which the strains were resistant. According to the sampling places， isolates from Nanning， Yulin， Liuzhou， Hechi， Beihai and Baise possessed five， nine， eight， two， one and two antibiogram types respectively. The antibiogram types in 2011-2016 were as follows：there were ten kinds of antibiogram types（A， B， F， J， K， N， O， P， Q and S） in 2011， four kinds（B， H， N and S） in 2012， two kinds（L and M） in 2013， three kinds（B， D and S） in 2014， nine kinds（B， C， D， E， G， H， J， R and S） in 2015， and three kinds（B， I and J） in 2016. Cluster analysis showed that 48 strains of tilapia S. agalactiae were clustered into two groups（Group I and Group II） and six subgroups（i-vi）. Groups I and II each contained 11 kinds of antibiogram types with possessed antibiogram abundances of 37.9% and 57.9% respectively. The difference of antibiotics sensitivity of S. agalac-tiae between Group I and Group II mainly depended on the rates of sensitivity or resistance of the strains against enrofloxacin， florfenicol and ciprofloxacin. 【Conclusion】The S. agalactiae isolates from tilapia in Guangxi during 2011-2016 display polymorphic antibiogram types with moderately high abundance. The antibiogram types of strains are diverse because of different source places and interannual variation. Besides， the clustering analysis can effectively cluster the S. agalac-tiae strains according to the antibiotics resistances of the isolates. It is recommended that this clustering analysis can be extended and applied as a typing method for epidemiology of S. agalactiae.

Key words： Oreochromis spp.； Streptococcus agalactiae； antibiogram； cluster analysis； Guangxi

0 引言

【研究意義】羅非魚（Oreochromis spp.）原產(chǎn)于非洲，生活在熱帶、亞熱帶的暖水性水域（葉韜，2014），具有食性廣、生長(zhǎng)快、耐低氧、繁殖和抗病力強(qiáng)、適應(yīng)能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)（李新，2016），是聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）向全球推廣養(yǎng)殖的優(yōu)秀水產(chǎn)品種（彭民毅，2014）。但近年來隨著養(yǎng)殖密度的不斷提高和養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，羅非魚養(yǎng)殖環(huán)境隨之惡化，病害逐漸增多，尤其是細(xì)菌性疾病給羅非魚養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失（張宗鋒，2012；彭民毅，2014；高桂生等，2016）。因此，加強(qiáng)羅非魚病害的相關(guān)研究對(duì)保障其養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）是羅非魚養(yǎng)殖過程中的主要病原菌之一，廣泛分布于自然界，也是人類和豬、牛等多種脊椎動(dòng)物的重要致病菌（葉韜，2014）。無乳鏈球菌感染后可引起羅非魚的腦膜炎和敗血癥（Chu et al.，2016），臨床征狀表現(xiàn)為眼球突出、渾濁發(fā)白，病魚在水中不規(guī)則轉(zhuǎn)游、游姿異常，身體扭曲等（張新艷等，2008）。我國僅2012年因無乳鏈球菌病給羅非魚養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)虧損就高達(dá)10億美元（柒壯林，2012）。在生產(chǎn)實(shí)踐中，抗生素治療仍是當(dāng)前防控羅非魚鏈球菌病的主要手段（胡大勝等，2012），但生活環(huán)境與宿主的不同會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性不斷發(fā)生變化，因此，在不同時(shí)期或不同環(huán)境中分離得到的病原菌株其耐藥譜型會(huì)存在一定差異（張曉兵等，2008；曾德乾等，2015）。目前，國外針對(duì)無乳鏈球菌耐藥性的研究主要集中在人源分離株（Hayes et al.，2017；Teatero et al.，2017），有關(guān)魚源分離株僅見東南亞羅非魚源（Dangwetngam et al.，2016）及其他魚源（Aisyhah et al.，2015）無乳鏈球菌的耐藥性調(diào)查；國內(nèi)針對(duì)羅非魚源無乳鏈球菌耐藥情況的研究近年來在廣西（胡大勝等，2012；柒壯林，2012；黃艷華等，2014）、廣東（盧邁新等，2010；郭玉娟等，2012；魏順等，2016）、海南（譚晶晶等，2010；祝璟琳等，2010；霍歡歡等，2013）等地陸續(xù)有報(bào)道，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些菌株大多數(shù)為多重耐藥菌株，且各菌株的耐藥種類也不完全一致?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】由于各地區(qū)間魚種魚苗交流頻繁，許多無乳鏈球菌株在環(huán)境和人為干擾的雙重脅迫下，為了適應(yīng)不同生存條件而有可能發(fā)生基因或結(jié)構(gòu)變化，隨之產(chǎn)生新的耐藥譜型。目前針對(duì)羅非魚無乳鏈球菌耐藥性的研究雖有較多報(bào)道，但鮮見對(duì)其耐藥譜進(jìn)行多樣性或分型分析?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以2011～2016年從廣西南寧、玉林、柳州、河池、北海和百色等市養(yǎng)殖患病羅非魚魚體分離獲得的48株無乳鏈球菌為研究對(duì)象，檢測(cè)其對(duì)16種常見抗生素的藥物敏感性，根據(jù)采樣時(shí)間及地點(diǎn)的不同分析其耐藥譜差異；并以抑菌圈直徑為變量，對(duì)各菌株的耐藥性進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，了解廣西羅非魚源無乳鏈球菌耐藥譜的變遷規(guī)律，為羅非魚鏈球菌病的有效防控和科學(xué)用藥提供參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

48株無乳鏈球菌株為廣西水生動(dòng)物病害診斷實(shí)驗(yàn)室及廣西各市/縣實(shí)驗(yàn)室于2011～2016年分離自廣西養(yǎng)殖的患病羅非魚。其中，12株分離自南寧市、15株分離自玉林市、14株分離自柳州市、2株分離自河池市、2株分離自北海市、3株分離自百色市（表1）。藥敏紙片購自杭州天和微生物試劑有限公司，共16種，分別是青霉素G（PG，10 μg/片）、氨芐青霉素（AMP，10 μg/片）、復(fù)達(dá)欣（CAZ，30 μg/片）、先鋒霉素VI（CRD，30 μg/片）、諾氟沙星（NOR，10 μg/片）、多粘菌素B（PB，10 μg/片）、先鋒必（CFP，75 μg/片）、多西環(huán)素（DOX，30 μg/片）、紅霉素（ERY，15 μg/片）、氟苯尼考（FFC，30 μg/片）、復(fù)方新諾明[S/T，（23.75/1.25）μg/片]、磺胺間甲氧嘧啶（SMM，25 μg/片）、復(fù)方磺胺嘧啶（SD，25 μg/片）、新霉素（NEO，30 μg/片）、恩諾沙星（ENR，30 μg/片）和環(huán)丙沙星（CLX，5 μg/片）。所有試驗(yàn)用藥敏紙片均保存于4 ℃冰箱。

1. 2 藥敏試驗(yàn)及耐藥譜分析

采用K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，并參照杭州天和微生物試劑有限公司提供的藥敏紙片抑菌范圍解釋標(biāo)準(zhǔn)（表2）對(duì)耐藥譜進(jìn)行分析。測(cè)量各種抗生素對(duì)菌株形成的抑菌圈直徑，將各種抗生素的耐藥情況用S（敏感）、I（中介）和R（耐藥）進(jìn)行記錄，每株無乳鏈球菌株對(duì)16種抗生素形成唯一的耐藥譜。對(duì)耐藥譜進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分類，計(jì)算耐藥率，并根據(jù)采樣時(shí)間及地點(diǎn)的不同統(tǒng)計(jì)分析具有耐3種及3種以上抗生素的耐藥譜型差異。其中，①耐藥率：對(duì)某抗生素耐藥菌株數(shù)占受試菌株總數(shù)的比例；②耐藥譜型豐富度：菌株具有耐藥譜型數(shù)量與菌株數(shù)量的比值；③耐藥譜型率：部分菌株耐藥譜型數(shù)量占全部菌株耐藥譜型數(shù)量的比例。

1. 3 基于耐藥譜的聚類分析分型

以抗生素的抑菌圈直徑為變量，采用SPSS 18.0對(duì)無乳鏈球菌株進(jìn)行聚類分析，以平方Euclidean距離表示菌株間的耐藥性同類關(guān)系（蔣魁等，2016）；參照張燕等（2000）的分型辨別力公式進(jìn)行聚類分析分型。

2 結(jié)果與分析

2. 1 廣西羅非魚源無乳鏈球菌的耐藥譜

48株廣西羅非魚源無乳鏈球菌的耐藥譜型分為A～S，共19種，耐藥譜型豐富度39.6%，各耐藥譜型對(duì)應(yīng)的耐藥譜見表3。由表3可知，S耐藥譜型抗4種抗生素（S/T、NEO、SMM和SD），共6株菌株，占菌株總數(shù)的12.5%；R耐藥譜型也抗4種抗生素（NEO、CLX、SMM和SD），僅有1株菌株，占2.1%；D、J、L、M、N和P耐藥譜型均抗5種抗生素，共11株菌株，占22.9%；B、C、E、G、H、K、O和Q耐藥譜型抗6種抗生素，共25株菌株，占52.1%；A和I耐藥譜型抗7種抗生素，共4株菌株，占8.3%；F耐藥譜型抗8種抗生素（CAZ、ENR、NEO、NOR、CLX、S/T、SMM和SD），僅1株菌株，占2.1%。從采樣地點(diǎn)來看，南寧市、玉林市、柳州市、河池市、北海市和百色市的分離株分別包含5、9、8、2、1和2種耐藥譜型，且均為耐藥種數(shù)在3種及3種以上的多重耐藥譜（表4）。

48株廣西羅非魚源無乳鏈球菌對(duì)16種抗生素的耐藥程度各不相同。其中，以對(duì)磺胺間甲氧嘧啶和復(fù)方磺胺嘧啶的耐藥率最高，均為100.0%；對(duì)復(fù)方新諾明、新霉素、環(huán)丙沙星和諾氟沙星的耐藥率分別為93.8%、83.3%、72.9%和60.4%；對(duì)氟苯尼考的耐藥率為20.8%；對(duì)恩諾沙星的耐藥率為16.7%；對(duì)多西環(huán)素和紅霉素的耐藥率均低于5.0%；所有菌株對(duì)青霉素G、氨芐青霉素、先鋒霉素VI、多粘菌素B和先鋒必表現(xiàn)為敏感或中介（圖1）。

2. 2 基于耐藥譜的廣西羅非魚源無乳鏈球菌聚類分析結(jié)果

以16種抗生素的抑菌圈直徑為變量，對(duì)48株廣西羅非魚源無乳鏈球菌進(jìn)行聚類分析，結(jié)果（圖2）發(fā)現(xiàn)2011～2016年各年份的菌株耐藥譜型為：2011年10種（A、B、F、J、K、N、O、P、Q和S耐藥譜型），2012年4種（B、H、N和S耐藥譜型），2013年2種（L和M耐藥譜型），2014年3種（B、D和S耐藥譜型），2015年9種（B、C、D、E、G、H、J、R和S耐藥譜型），2016年3種（B、I和J耐藥譜型）。

由圖2可看出，平方Euclidean距離為3～5時(shí)，所有菌株先聚類為i～vi共6個(gè)亞群。當(dāng)平方Euclidean距離為11時(shí)，亞群i、ii、iii合并為Group I；當(dāng)平方Euclidean距離達(dá)19時(shí)，亞群iv、v、vi合并為Group II。聚類分析分型的辨別力為0.809，即從樣本中隨意抽出2株菌株，其被分成不同型的概率為80.9%。Group I和Group II分別含有29和19株菌株，均具11種耐藥譜型，耐藥譜型豐富度分別為37.9%和57.9%。亞群i～vi分別具有7、2、4、2、5和4種耐藥譜型，耐藥譜型率依次為36.8%、10.5%、21.1%、10.5%、26.3%和21.1%，對(duì)應(yīng)的耐藥譜型豐富度分別為87.5%、33.3%、26.7%、100.0%、71.4%和40.0%。其中，亞群i含有的耐藥譜型最多，為7種，耐藥抗生素種類最高有8種；亞群v有5種耐藥譜型；亞群iii和vi均含有4種耐藥譜型；亞群ii和iv各含有2種耐藥譜型（表5）。

由表6可看出，Group I組群無乳鏈球菌對(duì)恩諾沙星、氟苯尼考和環(huán)丙沙星的敏感率和耐藥率分別為6.9%和27.6%、58.7%和10.3%、0和86.2%，Group II組群無乳鏈球菌對(duì)應(yīng)的敏感率和耐藥率分別為47.4%和0、36.9%和36.8%、26.3%和52.6%，表明Group I和Group II兩組群無乳鏈球菌的抗生素敏感差異主要取決于對(duì)恩諾沙星、氟苯尼考和環(huán)丙沙星的敏感率或耐藥率。此外，Group I和Group II兩組群菌株對(duì)青霉素G、先鋒必、多粘菌素B的敏感率和中介率也存在明顯差異，其中Group II組群菌株對(duì)青霉素G、先鋒必、多粘菌素B的敏感率明顯高于Group I組群。

3 討論

3. 1 廣西羅非魚源無乳鏈球菌的耐藥特點(diǎn)

目前，我國羅非魚主產(chǎn)區(qū)廣西、廣東和海南的無乳鏈球菌大多數(shù)為多重耐藥菌株（盧邁新等，2010；祝璟琳等，2010；郭玉娟等，2012；霍歡歡等，2013；魏順等，2016）。本研究發(fā)現(xiàn)48株廣西羅非魚源無乳鏈球菌株對(duì)各抗生素的耐藥性存在明顯差異，耐藥譜型豐富度達(dá)39.6%，且均為多重耐藥譜型，表明廣西羅非魚源無乳鏈球菌的耐藥情況復(fù)雜多樣，主要有3種情況：（1）從不同地區(qū)分離獲得的無乳鏈球菌具有相同的耐藥譜型或藥物敏感性。如亞群ii中的GXNN05菌株和GXLZ09菌株，對(duì)16種抗生素藥物的敏感性完全相同，但這2株菌株分別來自南寧市（2015年）和柳州市（2012年），也進(jìn)一步說明無乳鏈球菌株的耐藥性與分離時(shí)間、分離地點(diǎn)無明顯相關(guān)性。廣西不同地區(qū)無乳鏈球菌分離株的藥物敏感性相同可能與各地羅非魚養(yǎng)殖技術(shù)交流較頻繁，導(dǎo)致宿主所在地的養(yǎng)殖和用藥模式相似有關(guān)。（2）同種抗生素對(duì)不同地區(qū)羅非魚源無乳鏈球菌的抑制效果不同。如氟苯尼考對(duì)分離自南寧市、百色市、河池市和北海市的大部分羅非魚源無乳鏈球菌株均能獲得敏感或中介的抑菌效果，但部分分離自柳州市和玉林市的菌株對(duì)氟苯尼考已產(chǎn)生耐藥性。這可能是由于不同菌株對(duì)氟苯尼考的敏感性存在差異或具有不同的耐藥基因（曾德乾等，2015），也可能與養(yǎng)殖戶用藥習(xí)慣導(dǎo)致菌株藥物敏感性存在差異有關(guān)（彭民毅，2014）。（3）從同一羅非魚不同組織分離獲得的部分菌株其藥物敏感性也有所不同。如GXNN11菌株和GXNN12菌株分離自同一羅非魚的肝臟和腦組織，GXNN11菌株對(duì)恩諾沙星表現(xiàn)為中介，而GXNN12菌株已產(chǎn)生耐藥性，其原因可能與不同抗生素與不同組織的親和力、代謝速率及抗生素對(duì)不同屏障（血腦屏障）的透過作用等不同有關(guān)，但尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

3. 2 廣西羅非魚源無乳鏈球菌耐藥譜的時(shí)空分布情況

從分離時(shí)間上來看，廣西羅非魚源無乳鏈球菌隨著年份的更迭，其耐藥譜型也不斷發(fā)生變化。2011年分離株檢測(cè)出10種耐藥譜型；2012年分離株檢測(cè)出4種耐藥譜型，新增H耐藥譜型；2013年新增L和M耐藥譜型；2014年新增D耐藥譜型；2015年新增C、E、G和R耐藥譜型；2016年分離株的耐藥譜型有3種，新增I耐藥譜型。其主要原因可能是無乳鏈球菌對(duì)多種抗生素的敏感性一直在發(fā)生變化而不斷有新型耐藥譜型出現(xiàn)。在本研究選取的7種國標(biāo)漁藥（多西環(huán)素、磺胺間甲氧嘧啶、復(fù)方磺胺嘧啶、恩諾沙星、新霉素、復(fù)方新諾明和氟苯尼考）中，僅多西環(huán)素對(duì)無乳鏈球菌有較穩(wěn)定的抑菌作用，除在2013年出現(xiàn)1株耐藥菌株外，其余年份的敏感率一直維持較高水平（83.3%～100.0%），同時(shí)意味著廣西羅非魚源無乳鏈球菌病的防控形勢(shì)仍較嚴(yán)峻。從采樣地點(diǎn)來看，南寧市、玉林市、柳州市、河池市、北海市和百色市的分離株分別包含5、9、8、2、1和2種耐藥譜型，其耐藥譜型存在一定的差異性。南寧市分離株特有的耐藥譜型為F和I型，玉林市分離株特有的耐藥譜型為A、C、D、E、G和R型，柳州市分離株特有的耐藥譜型為N、O、P和Q型，河池市分離株特有的耐藥譜型為L(zhǎng)和M型。此外，6個(gè)市分離株的耐藥譜型也存在共性，所有分離株對(duì)多西環(huán)素的敏感性較高，而對(duì)磺胺間甲氧嘧啶、復(fù)方磺胺嘧啶和復(fù)方新諾明的耐藥性較高。盧邁新等（2010）從廣東和海南發(fā)病羅非魚分離獲得的7株無乳鏈球菌強(qiáng)毒株對(duì)紅霉素、諾氟沙星、青霉素G和先鋒必等13種抗生素敏感，對(duì)新霉素等7種抗生素不敏感，對(duì)恩諾沙星和氨芐青霉素等9種抗生素存在菌株間差異。郭玉娟等（2012）從廣東、福建和海南羅非魚中分離獲得的22株無乳鏈球菌對(duì)恩諾沙星、新霉素和磺胺異惡唑等均已產(chǎn)生耐藥性，對(duì)多西環(huán)素敏感，對(duì)諾氟沙星、環(huán)丙沙星和紅霉素的敏感性不完全相同。胡大勝等（2012）檢測(cè)了分離自廣西11個(gè)縣（市，區(qū)）羅非魚源無乳鏈球菌的藥物敏感性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些菌株對(duì)青霉素G和氨芐青霉素的敏感率較高，對(duì)磺胺類抗生素的耐藥率較高?；魵g歡等（2013）研究表明，于2010～2011年從海南各地分離獲得的羅非魚無乳鏈球菌株對(duì)多西環(huán)素高度敏感，對(duì)青霉素G和氨芐青霉素的耐藥率呈逐年增加趨勢(shì)，對(duì)諾氟沙星和恩諾沙星的敏感率低于20.0%～44.0%。綜合上述研究及本研究結(jié)果可知，不同地區(qū)的無乳鏈球菌對(duì)多西環(huán)素的敏感率普遍最高，對(duì)氨芐青霉素和青霉素G等β-內(nèi)酰胺類抗生素也具有一定的敏感性，對(duì)新霉素的耐藥性稍高，對(duì)其他抗生素如諾氟沙星和恩諾沙星等的耐藥性存在區(qū)域差異。

3. 3 廣西羅非魚源無乳鏈球菌耐藥譜的聚類情況

聚類分析是一種通過計(jì)算樣品相似性系數(shù)或距離對(duì)樣品進(jìn)行分型的數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法，將屬性相似的樣品歸為一個(gè)組群或子集（曾德乾等，2015）。目前，已有較多關(guān)于水生動(dòng)物病原聚類分析的研究報(bào)道。如以生理生化特征和抗生素敏感性為指標(biāo)可將引起魚結(jié)節(jié)病的15株鰤?mèng)~諾卡氏菌（Nocardia seriolae）分成2個(gè)組群和4個(gè)亞群（滿其蒙等，2013），通過系統(tǒng)聚類分析可對(duì)南海地區(qū)的魚源哈維弧菌（Vibrio harveyi）進(jìn)行耐藥譜分型（曾德乾等，2015；蔣魁等，2016）等。本研究以16種抗生素的抑菌圈直徑為變量對(duì)廣西羅非魚源無乳鏈球菌耐藥性進(jìn)行聚類分析，結(jié)果將48株無乳鏈球菌分成2個(gè)組群和6個(gè)亞群。6個(gè)亞群在平方Euclidean距離為3～5時(shí)各自聚為1個(gè)亞群；當(dāng)平方Euclidean距離為25時(shí)，2個(gè)組群聚在一起，說明同一亞群中的菌株耐藥性相似度較高，而不同亞群間的菌株耐藥性差異明顯。本研究對(duì)48株廣西羅非魚源無乳鏈球菌進(jìn)行聚類分析的辨別力為0.809，與Sloos等（1998）對(duì)53株多重耐藥表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）、曾德乾等（2015）對(duì)84株哈維弧菌的聚類分析辨別力（0.716和0.774）接近，說明所采用的聚類分析分型具有較強(qiáng)辨別力。細(xì)菌的分型方法較多，包括耐藥譜分型、核糖體分型、MLST分型、PFGE分型及分子生物學(xué)分型等（張燕等，2000；張雨薇等，2017）。本研究根據(jù)抑菌圈直徑進(jìn)行相似性分析的定量耐藥譜聚類分析辨別力較強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單，無需使用特殊試劑和設(shè)備，因此建議作為無乳鏈球菌流行病學(xué)分型的有效方法給予推廣應(yīng)用。

4 結(jié)論

2011～2016年廣西羅非魚源無乳鏈球菌的耐藥譜型呈多樣性，譜型豐富度較高，且因來源地不同和年際變化存在一定差異性。此外，通過聚類分析可根據(jù)無乳鏈球菌的耐藥情況對(duì)其進(jìn)行有效分型，建議作為無乳鏈球菌流行病學(xué)分型方法給予推廣應(yīng)用。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）