氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法測定水產(chǎn)制品、干制水產(chǎn)品中的N—二甲基亞硝胺

摘 要：結(jié)合日常檢測的需要，建立了一種適用于水產(chǎn)制品、干制水產(chǎn)品中N-二甲基亞硝胺含量測定的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用選擇離子方式掃描的檢測方法。在0.02-0.5μg/mL范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)為0.9997，加標(biāo)回收率為87.7%，重現(xiàn)性良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，檢出限為1.0μg/kg。

關(guān)鍵詞：氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 N-二甲基亞硝胺 選擇性離子監(jiān)測

N-二甲基亞硝胺分子式為C2H6N2O或（CH3）2NNO，屬于高毒化合物，于環(huán)境中廣泛存在，2017年10月27日世界衛(wèi)生組織將其列為2A類致癌物，《GB2762-2017食品中污染物限量》也對(duì)食品中N-二甲基亞硝胺的最大允許含量做出新的修定，其中水產(chǎn)制品、干制水產(chǎn)品的限量為4.0μg/kg，本文方法采用二氯甲烷做溶劑提取，通過固相萃取小柱對(duì)提取液進(jìn)行凈化，經(jīng)氣相色譜分離，用電子轟擊電離模式對(duì)N-二甲基亞硝胺進(jìn)行定性、定量檢測。

1.材料與方法

1.1儀器與試劑

1.1.1主要儀器。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC/MS），Agilent GC7890A/MS5975C，美國安捷倫科技有限公司固相萃取裝置，Win-SPE 12，北京萊伯泰科儀器有限公司電子天平，F(xiàn)A2004，感量0.1mg，上海上平儀器有限公司高速冷凍離心機(jī)，CT14RDⅡ，天美（中國）科學(xué)儀器有限公司超聲波清洗機(jī)，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司勻漿機(jī)，D-500，DVB

1.1.2試劑。標(biāo)準(zhǔn)品：N-二甲基亞硝胺（100μg/mL），Accustandard.Inc.；二氯甲烷：色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；氯化鈉、無水硫酸鈉：優(yōu)級(jí)純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；硫酸：分析純，天津市科密歐化學(xué)有限公司；固相萃取柱：參考美國EPPA Method 521，選用活性炭小柱（CNW，2g/6mL，ANPEL）

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1樣品制備。將樣品粉碎均勻，準(zhǔn)確稱取20g（精確至0.0001g），置于50mL離心管中，加入30mL二氯甲烷和5g氯化鈉，勻漿1min，超聲提取20min，低溫條件下5000r/min離心10min，吸取有機(jī)相溶劑層；以20mL二氯甲烷重復(fù)提取2次，合并3次萃取液；加入2mL硫酸（1+3體積比），振搖3min，低溫條件下5000r/min離心10min，移取有機(jī)相澄清液，加入適量無水硫酸鈉脫水后，轉(zhuǎn)移至150mL雞心瓶中，于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約2mL，待凈化。

1.2.2樣品凈化。用6mL二氯甲烷活化固相萃取柱，棄去流出液；將待凈化液加入SPE小柱，收集流出液，并用6mL二氯甲烷洗脫，收集流出液，合并兩次流出液，于35℃下氮吹至近干，用1.0mL二氯甲烷復(fù)溶，過0.22μm有機(jī)膜，備用。

1.2.3色譜條件。色譜柱：參考GB 5009.26-2016[3]，色譜柱選取DB-INNOV WAX，30m×0.25mm×0.25μm進(jìn)樣口溫度：250℃；載氣：He（純度>99.999%）流速1.0mL/min；隔墊吹掃流量：3mL/min；不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣：自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量1μL；

升溫程序：起始溫度40℃，以10℃/min升溫至80℃，再以1℃/min升溫至100℃，再以20℃/min升溫至240℃，保持3min。

1.2.4質(zhì)譜條件。電離方式：電子轟擊（EI）離子源；電子能量：70eV；離子源溫度：230℃； 四極桿溫度：150℃；接口溫度：240℃；溶劑延遲：4min；SIM采集模式，定性離子15、42、43、74，定量離子74。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備 ：將濃度為1.0mg/mL的N-二甲基亞硝胺標(biāo)準(zhǔn)溶液用二氯甲烷稀釋為10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，然后將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL，進(jìn)樣量1μL。

2 結(jié)果與分析

2.1定性定量

在1.2的色譜和質(zhì)譜條件下，N-二甲基亞硝胺的保留時(shí)間為5.817min（圖-1），sim掃描質(zhì)譜圖（圖-2）與NIST譜庫中檢索的N-二甲基亞硝胺質(zhì)譜圖（圖-3）相似度較高。選取特征離子74為定量離子，外標(biāo)法定量。

2.2 線性關(guān)系及檢出限

以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。曲線方程Y=122081X-769.01，R2=0.9997。最低檢出濃度為1.0μg/kg。

2.3回收率及精密度

于20.0g凍蝦空白樣品中添加0.2μg N-二甲基亞硝胺做加標(biāo)回收，重復(fù)6次（87.7%、90.4%、86.1%、89.3%、87.1%、85.6%），平均回收率為87.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%，能夠滿足檢測要求。

3 結(jié)論

本文方法直接采用有機(jī)相提取被測物，通過固相萃取凈化，使樣品前處理快捷簡便，易于操作，定性定量方法和檢出限能夠滿足GB2762對(duì)水產(chǎn)制品、干制水產(chǎn)品中N-二甲基亞硝胺的限量的要求。

參考文獻(xiàn)：

[1] 世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)致癌物質(zhì)清單

[2] US Environmental Protection Agency （2004） Method 521 .Determination of nitrosamines in drinking water by solid phase extraction and capillary column gas chromatography with large volume injection and chemical ionization tandem mass spectrometry（MS/MS），EPA/600/R-05/054，Cincinnati，USA

[3] GB 5009.26-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中N-亞硝胺類化合物的測定

作者簡介：王柏興，男，1980年，漢，天津，本科，助理工程師，食品檢測、輕化工程。