冠心病患者ADMA、eNOS和NO水平變化及與Gensini評分的相關性

沈云峰 張洪波 郭浩浩 劉 波

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)是危害人類健康的常見疾病，主要危險因素有年齡、性別、吸煙、高血壓、高血脂、糖尿病等。冠心病發(fā)生的最基本的病理過程是冠狀動脈粥樣硬化，病變的始動環(huán)節(jié)是血管內皮功能障礙。已有的研究[1-4]表明：不對稱性二甲基精氨酸(Asymmetric Dimethylarginine，ADMA)作為一種內源性競爭性一氧化氮合酶(Nitric Oxide Syntheses，NOS)抑制劑，可以通過減少內皮型NOS(eNOS)的合成，明顯抑制一氧化氮(Nitric Oxide，NO)的合成，誘發(fā)氧自由基生成，促進炎癥反應，從而引發(fā)血管內皮功能障礙，導致心血管疾病的發(fā)生發(fā)展。ADMA是心血管疾病的重要標志物之一，可能成為心血管疾病風險因素與血管內皮功能障礙之間的橋梁。本文檢測不同程度冠脈病變冠心病患者血清ADMA、eNOS及NO水平變化及其與冠狀動脈Gensini評分的相關性，進一步豐富冠心病輔助診斷和防治監(jiān)測的實驗室資料。

1 資料與方法

1.1病例和分組

2015-07—2017-12在本院心血管科住院治療患者共206例。依據冠狀動脈造影結果分為對照組(未見冠脈狹窄或狹窄≤50%，n=84)和冠心病組，包括單支病變組(只有一支冠脈狹窄>50%，n=44)、雙支病變組(有兩支冠脈狹窄>50%，n=43)和多支病變組(多于兩支冠脈狹窄>50%，n=35)。排除肝腎功能不全、瓣膜性心臟病、既往有冠狀動脈介入治療或冠狀動脈旁路移植術病史、心肌梗死病史、左室功能不全、感染性疾病者。各組性別、年齡、體重指數(BMI)、吸煙史、高血壓史和糖尿病史等的分布差異均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 各組一般資料比較

1.2血液指標檢測方法

1.2.1標本收集：患者冠脈造影前，用真空采血管采集病人空腹12h靜脈血，混勻靜置15min后，3 400g 離心分離取血清，分存在EP管中，-25℃凍存待測。

1.2.2檢測方法：ADMA和eNOS均采用ELISA測定，ADMA試劑盒由武漢新啟迪生物科技有限公司提供(批號：20170925)，eNOS檢測試劑盒由上海超研生物科技有限公司提供(批號：20171009)，檢測儀器為上?？迫A公司的ST360酶標儀。NO采用硝酸還原酶法，試劑盒由南京聚力生物醫(yī)學工程研究所提供(批號：20170910)，儀器為日本奧林巴斯公司的AU400自動生化分析儀。嚴格按照儀器和試劑說明書操作。

1.3冠脈造影及Gensini積分：應用荷蘭飛利浦公司生產的飛利浦數字平板心血管造影系統(tǒng),以標準Judkins法行冠脈造影術診斷冠心病。冠脈造影及病變程度判斷按ACC/AHA造影指南[5]，選取左前斜、右前斜、頭腳軸狀位，對左右冠脈造影，用直徑法分別對右冠脈、左主干、左前降支和回旋支血管進行測量，至少1支血管狹窄>50%診斷為冠心??；并用Gensini積分對每支冠脈血管狹窄程度進行定量評定，狹窄≤25%為1分，26%-49%為2分，50%-75%為4分，76%-90%為8分，91%-99%為16分，100%為32分；若1支血管多處狹窄，則以最狹窄處計分，每例患者冠脈病變積分為各支血管積分之和。

1.4統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1各組患者血清ADMA、eNOS、NO水平和Gensini積分比較

各組間ADMA、eNOS、NO水平及Gensini積分差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與對照組比較，單支、雙支、多支病變組ADMA水平均顯著升高(t值分別為5.65、11.62、21.52，均P<0.01)，且多支病變組>雙支病變組>單支病變組，eNOS水平顯著降低(t值分別為4.56、-14.58、-31.59，均P<0.01，NO水平亦明顯降低(t值分別為4.21、-10.32、-17.65，均P<0.01)，且均呈多支病變組<雙支病變組<單支病變組；Gensini積分顯著升高(t值分別為20.34、32.65、43.51，均P<0.01)，且多支病變組>雙支病變組>單支病變組。具體結果見表2。

表2 各組血液指標水平和Gensini積分比較

注：與對照組比較，1)P< 0.01；與單支病變組比較,2)P< 0.01；與雙支病變組比較,3)P<0.01

2.2血清ADMA、eNOS和NO水平與冠狀動脈Gensini積分的相關性

Pearson分析表明，隨著冠心病患者病變冠脈支數的增加，其血清ADMA水平與Gensini積分同時增加，兩者呈顯著正相關(r=0.526,P<0.05)，而eNOS、NO水平則明顯降低，與Gensini積分呈顯著負相關(r分別為 -0.435和-0.356, 均P<0.05)。

3 討論

NO 是一種自由基，由NOS催化精氨酸生成，是血管內皮細胞合成的一種重要內源性舒張因子，有減少氧自由基產生和低密度脂蛋白氧化等作用，能拮抗動脈硬化，修復病變血管，是內源性抗動脈粥樣硬化的重要因子，其生成或生物利用度降低會導致內皮功能障礙并促進動脈粥樣硬化[6]。作為NO合成的唯一限速酶[7]，其水平變化直接關乎NO濃度。ADMA是一種胍類物質，人體內大多數由含精氨酸殘基的蛋白質經甲基化修飾和水解生成，由二甲基精氨酸二甲氨水解酶分解代謝。炎癥、氧化應激等病理狀態(tài)時，可以抑制該酶活性，致ADMA在人體內蓄積。由于ADMA是eNOS的內源性抑制劑，可與精氨酸競爭性結合NOS活性部位，對NOS產生競爭性抑制作用，使NO/NOS通路障礙，NO合成減少[8，9]。

隨著ADMA的蓄積增多，eNOS競爭性減少，造成內皮細胞合成NO減少和血管順應性降低，阻力增加，血流速度受限，從而有利于單核細胞和粒細胞向血管內皮黏附、平滑肌增殖、血管超氧自由基生成增多，進而引發(fā)血小板聚集、炎癥反應，以及更多超敏C反應蛋白產生[10]；大量的終末攻擊性因子導致血管內膜功能受損，血管損傷、痙攣、脂質異常，最終導致動脈粥樣硬化的發(fā)生[11,12]。

本文結果表明冠心病患者血清ADMA水平高于對照人群，而且冠脈狹窄支數多者ADMA水平更高，并與冠脈狹窄程度(Gensini積分)呈正相關；但冠心病患者血清eNOS及NO水平低于對照人群，而且冠脈狹窄支數多者eNOS和NO水平更低，并與冠脈狹窄程度(Gensini積分)呈負相關。與上述理論分析完全一致，進一步驗證了ADMA通過抑制eNOS，降低NO的合成，引起血管內皮功能障礙，導致冠狀動脈發(fā)生及加重。所以，臨床檢測血清ADMA，eNOS和NO水平對冠心病的輔助診斷和防治監(jiān)測有重要應用價值。

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