‘涌金’叢生芽的增殖優(yōu)化研究

張椿芳，付 濤，何月秋，王建軍，王 豪，鄭國強

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‘涌金’叢生芽的增殖優(yōu)化研究

張椿芳1，付 濤1，何月秋1，王建軍2，王 豪2，鄭國強3

（1. 寧波城市職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 寧波 315100；2. 寧波林業(yè)局林特種苗繁育中心，浙江 寧波 315012；3. 江蘇碧云天農(nóng)林科技有限公司，江蘇 丹陽 212300）

為了提高‘涌金’‘Yongjin’叢生芽的增殖效率及生長狀況，以其尚未萌發(fā)的腋芽新梢作為實驗材料，通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)對不同培養(yǎng)基、不同激素、不同蔗糖濃度、不同pH值、不同繼代方式以及不同繼代周期進行了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明，‘涌金’叢生芽增殖優(yōu)化的最優(yōu)方案為MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）+6-BA（2 mg·L-1）+IBA（0.02 mg·L-1），蔗糖濃度在20 ~ 30 g·L-1之間，pH值5.8 ~ 6.2，繼代方式為①-③-①[①: MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）+6-BA（3 mg·L-1）+IBA（0.02 mg·L-1）；③:MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）+6-BA（1 mg·L-1）+IBA（0.02 mg·L-1）]，繼代周期在25 ~ 30 d之間。本研究有效改善了‘涌金’繼代培養(yǎng)過程中叢生芽長勢衰弱、黃葉、褐化等問題，提高了增殖效率。

‘涌金’；叢生芽；組織培養(yǎng)；增殖

樟廣泛分布于我國亞熱帶地區(qū)，為樟科Lauraceae樟屬的常綠闊葉喬木，不僅是經(jīng)濟植物（芳香油類植物），也是重要的綠化和景觀樹種，公園、學(xué)校以及道路綠化區(qū)域被廣泛種植，具有諸多優(yōu)點，例如其葉形秀麗、枝繁葉茂、四季常綠、生長迅速且散發(fā)出濃郁的香味等[1-2]?！拷稹甕ongjin’為樟實生苗選育出的優(yōu)良品種，與母本相比，具有諸多優(yōu)良特性，如其新葉和花均為金黃色，枝干呈現(xiàn)出鮮紅色，果皮為黃色，并且葉、果和枝干還具有季相變化，可作為一種高大的彩葉喬木予以應(yīng)用，具有較高的園林觀賞及推廣應(yīng)用價值[3]。通過種子的擴大繁殖可滿足實際生產(chǎn)需求，但后代會出現(xiàn)嚴(yán)重分離現(xiàn)象，原有的優(yōu)良性狀很難保持；其次，由于母樹枝條數(shù)量有限，即使通過扦插和嫁接等無性繁殖方式也很難滿足實際需求，因此通過傳統(tǒng)的繁殖方式，很難對‘涌金’品種進行保存和擴大繁殖[4]。

植物組織培養(yǎng)是一種快速的無性繁殖方式，是保存優(yōu)良種質(zhì)資源的重要方法與途徑，它既能保持母本原有的優(yōu)良性狀，又能在較短的時間內(nèi)培育出整齊一致的苗木，而且還能為樹種改良、利用以及遺傳轉(zhuǎn)化等打下基礎(chǔ)，目前已經(jīng)在100多個科、1 000多種植物中獲得廣泛應(yīng)用[5]。目前，有關(guān)樟的植物組織培養(yǎng)也已被廣泛研究[6-9]。然而植株隨著繼代次數(shù)的增加，叢生芽繁殖系數(shù)降低，出現(xiàn)生長勢衰弱、黃葉、褐化等現(xiàn)象，增殖效率大大降低，無法穩(wěn)定高效地獲取叢生芽，進而難以實現(xiàn)快速繁殖的目的。為提高‘涌金’叢生芽的增殖效率及生長狀況，本研究通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)對不同培養(yǎng)基、不同激素、不同蔗糖濃度、不同pH值、不同繼代方式以及不同繼代周期進行了系統(tǒng)研究，旨在為實現(xiàn)‘涌金’試管苗的工廠化生產(chǎn)奠定一定的基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

‘涌金’（帶芽莖段）采集于寧波市林業(yè)局種苗中心邱隘基地，該基地位于寧波鄞州區(qū)，29°51″ N，121°38″24′ E，屬亞熱帶季風(fēng)性濕潤氣候，春秋兩季雨量均衡，夏季高溫高濕。母樹14年生，于2015年3月初剪取腋芽尚未萌發(fā)的新梢?guī)Щ貙嶒炇?，?jīng)過無菌處理后用于后續(xù)試驗。

1.2 試驗設(shè)計

1.2.1 不同培養(yǎng)基、不同植物生長調(diào)節(jié)劑及其不同濃度對叢生芽增殖的影響 為篩選出適合‘涌金’叢生芽不斷增殖的培養(yǎng)基，選擇3種不同的基本培養(yǎng)基，分別為MS，MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）和1/2MS；選擇3種植物生長調(diào)節(jié)劑，分別為6-BA，IBA和GA3（赤霉素），均為3個濃度梯度，其中6-BA為0.5，1.0和3.0 mg·L-1；IBA為0，0.02和0.04 mg·L-1；GA3為0，0.05和0.10 mg·L-1。采用L9（43）正交實驗設(shè)計方案進行優(yōu)化實驗，試驗設(shè)計見表1。此外，其它限制因素均為固定值，如蔗糖濃度為20 g·L-1，瓊脂濃度為7 g·L-1，pH值為5.8。

表1 ‘涌金’叢生芽增殖培養(yǎng)基的設(shè)計

1.2.2 不同蔗糖濃度對‘涌金’叢生芽增殖效果的影響 在上述試驗基礎(chǔ)上，研究不同蔗糖濃度對‘涌金’叢生芽增殖效果的影響。蔗糖濃度設(shè)置6水平（表2）。培養(yǎng)基為MS + NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（2 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1），瓊脂濃度為7 g·L-1，pH值為5.8。

表2 增殖培養(yǎng)基蔗糖濃度單因子的實驗水平

1.2.3 不同pH值對‘涌金’叢生芽增殖效果的影響 pH值影響叢生芽的增殖培養(yǎng)，因此本實驗設(shè)計6個pH值水平（表3）。培養(yǎng)基MS + NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（2 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1），蔗糖濃度為20 g·L-1，瓊脂濃度為7 g·L-1。

表3 增殖培養(yǎng)基中pH值的實驗水平

1.2.4 不同繼代方式對‘涌金’叢生芽增殖效果的影響 將5種培養(yǎng)基進行交替培養(yǎng)①MS + NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（3 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1）；②MS + NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（2 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1）；③MS + NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（1 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1）；④MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）+6-BA（0.5 mg·L-1）+IBA（0.02 mg·L-1）；⑤MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1）。

表4 增殖培養(yǎng)中的不同繼代方式

1.2.5 不同繼代周期對‘涌金’叢生芽增殖效果的影響 實驗中發(fā)現(xiàn)繼代周期對‘涌金’叢生芽增殖影響較大，故而設(shè)計如下實驗方案，以篩選出適宜的繼代時間，培養(yǎng)基MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（2 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1），瓊脂濃度為7 g·L-1，pH值為5.8。

表5 增殖培養(yǎng)中的不同繼代周期

1.3 數(shù)據(jù)處理

增殖倍數(shù)=總芽數(shù)（25 d）/接種芽數(shù)（高度為1 cm以上為有效芽）；數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SE）表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，均值比較采用單因子方差分析，不同處理方式顯著差異性采用Duncan’s新復(fù)極差測驗方法（SSR，＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對‘涌金’叢生芽增殖的影響

由表6和圖1可知，A3，A4和A5的增殖倍數(shù)顯著（＜0.05）高于其它處理，其中A3，A5和A4間也差異顯著，但A3基部有褐化，A4基部有較多愈傷組織，只有A5不僅增殖倍數(shù)高，而且叢生芽生長狀況相對最好。此外，在A6中，叢生芽生長狀況良好，但增殖倍數(shù)卻較低，其余培養(yǎng)基不僅增殖倍數(shù)較低，叢生芽生長狀況也較差。因此，總體而言，培養(yǎng)基A5為正交試驗中效果最好的處理，其培養(yǎng)條件為MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（1.0 mg·L-1）+ IBA（0.04 mg·L-1）+ GA3（0 mg·L-1）。使用統(tǒng)計軟件 Design Expert 8.0對數(shù)據(jù)進行分析，得出最佳優(yōu)化方案為MS + NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（2 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1）。

表6 不同培養(yǎng)基對‘涌金’叢生芽增殖的影響

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示在0.05 水平下差異顯著。下同。

圖1 不同培養(yǎng)基在‘涌金’叢生芽增殖中的情況

Figure 1 Growth of clump buds of‘Yongjin’ proliferative conditions by different media

2.2 不同蔗糖濃度對‘涌金’叢生芽增殖的影響

在植物組織培養(yǎng)時，由于培養(yǎng)物的光合作用能力較弱，所以需要在培養(yǎng)基中添加一些糖類，一方面作為生長發(fā)育所需的碳源和能源，同時也可以維持一定的滲透壓。在‘涌金’叢生芽增殖培養(yǎng)中，不同蔗糖量的加入對增殖和生長狀態(tài)均產(chǎn)生一定的影響。由表7和圖2可知，叢生芽在較低濃度的蔗糖培養(yǎng)基B1上表現(xiàn)為葉淡綠、芽細弱，而靠近基部的葉片也出現(xiàn)枯黃；在B3培養(yǎng)基上，苗生長較為旺盛，葉色嫩綠，基本沒有枯苗出現(xiàn)；而在較高蔗糖濃度的B4，B5培養(yǎng)基上，苗生長緩慢，分化少，葉黃綠，變粗和老化，基部聚集褐色物質(zhì)，有枯苗夾雜于芽叢中間。從表7還可知，隨著蔗糖濃度的加大，增殖系數(shù)呈先升高后降低的趨勢，其中，在B2和B3培養(yǎng)基中的增殖倍數(shù)最大，分別為2.80和3.38，但因B3增殖系數(shù)較高，芽偏細弱，一般生產(chǎn)考慮更多的有效苗，故而培養(yǎng)基中蔗糖濃度選擇在20 ~ 30 g·L-1為宜。

表7 蔗糖濃度對‘涌金’叢生芽增殖的影響

Figure 2 Growth of clump buds of‘Yongjin’ proliferative conditions by different sucrose concentrations

2.3 不同pH值對‘涌金’叢生芽增殖的影響

培養(yǎng)基中pH值也是影響植物組織培養(yǎng)的一個重要因素，pH值的變化影響到一些離子的溶解度進而影響到植物對各元素的吸收，從而發(fā)生缺素癥狀，此外，過高或過低的pH值均會影響到培養(yǎng)基的凝固，過高培養(yǎng)基會發(fā)硬，反之則培養(yǎng)基會太軟。由表8可知，pH值在5.0時（C1），滅菌后培養(yǎng)基較軟，‘涌金’叢生芽葉灰綠，分化的叢生芽有玻璃化趨勢且芽生長緩慢；pH值在5.4 ~ 6.2時（C2，C3和 C4），叢生芽均能比較正常的生長，增殖倍數(shù)高，有效芽較多；而當(dāng)pH值高于7.0時（C5，C6），叢生芽葉表現(xiàn)出黃綠狀況，且芽生長緩慢，增殖倍數(shù)降低?？傮w而言，‘涌金’叢生芽在pH值在5.8 ~ 6.2時，芽苗能夠旺盛生長，且能維持較高的增殖倍數(shù)。

表8 不同pH值對‘涌金’叢生芽增殖的影響

2.4 不同繼代方式對‘涌金’叢生芽增殖的影響

組培苗增殖通常是外植體連續(xù)繼代于含有6-BA增殖培養(yǎng)基中，這種方式常常導(dǎo)致組培苗的玻璃化或生長畸形，因此，比較了不同繼代方式對‘涌金’叢生芽增殖和生長的影響。首先將外植體接種于所篩選出的叢生芽的增殖培養(yǎng)基①中，25 d后分別轉(zhuǎn)移至濃度逐漸降低的②，③，④或去掉6-BA培養(yǎng)基⑤中，25 d后再轉(zhuǎn)移至增殖培養(yǎng)基①中。由表9可知，5種繼代方式中，D1和D5處理叢生芽生長狀況較差，且增殖系數(shù)偏低，其中D1處理還易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象；D2和D3處理叢生芽生長情況最好，其中D3處理最有利于‘涌金’叢生芽的增殖，平均增殖系數(shù)最高，且芽生長快速。

表9 不繼代方式對‘涌金’叢生芽增殖的影響

2.5 不同繼代周期對‘涌金’叢生芽增殖的影響

培養(yǎng)過程中材料長期不轉(zhuǎn)移會導(dǎo)致叢生芽褐變，嚴(yán)重影響叢生芽的存活率，其中，及時更新培養(yǎng)基是有效降低褐化的重要措施之一。針對‘涌金’叢生芽的增殖特點，比較了不同繼代周期對其生長的影響，由表10可知，‘涌金’叢生芽增殖倍數(shù)隨繼代周期的延長出現(xiàn)先增加后降低的趨勢，其中培養(yǎng)10 d（E1）轉(zhuǎn)移的增殖倍數(shù)最低，且葉灰綠、有玻璃化現(xiàn)象；培養(yǎng)25 d（E2）和30 d（E3）轉(zhuǎn)移的增殖倍數(shù)相對最高，與其他處理比較呈顯著性差異（<0.05），且叢生芽生長情況良好，但E4中叢生芽生長情況已開始惡化，出現(xiàn)黃葉和死苗的現(xiàn)象，不利于繼續(xù)培養(yǎng)，因此，建議選擇25 ~ 30 d進行繼代培養(yǎng)，更有利于叢生芽的發(fā)育和增殖。

表10 不同繼續(xù)代周期對‘涌金’叢生芽增殖的影響

3 結(jié)論與討論

植物激素在植物器官、組織和細胞培養(yǎng)中對細胞的脫分化及再分化起著重要的調(diào)節(jié)作用，在細胞、器官或植株水平上調(diào)控著一些特定的過程，因此，在植物組織培養(yǎng)基的各種組成成分中，植物激素所產(chǎn)生的影響最大[10-11]。從理論上說，要知道某一樹種分化出苗規(guī)律性，首先要了解其具體在芽或根分化時對激素種類及數(shù)量的要求，同時還要求測出所接種的外植體當(dāng)時所含內(nèi)源激素，那么分化就會順利進行并按預(yù)期得到再分化的芽，對此，目前植物生理學(xué)、生物化學(xué)等科目的研究尚未有更深入的研究，因此，在分化出芽之前就作出正確的結(jié)論幾乎不可能。植物組織培養(yǎng)是一個非常復(fù)雜的過程，從現(xiàn)有的研究資料看，整個培養(yǎng)脫分化的過程不僅受激素的影響，還受到多種外界因素及培養(yǎng)材料本身的影響。

在實際的組培工作中，根據(jù)培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)物的表現(xiàn)來調(diào)整激素的供給量，是很重要的培養(yǎng)手段。多數(shù)木本植物的組織培養(yǎng)研究都需要開展一系列的調(diào)整工作以獲得分化率高的健壯小芽（每次繼代的增殖系數(shù)≥3，繼代周期≤30 d），以此來滿足工廠化育苗的要求[12]。前期研究中，6-BA和IAA的激素用量分別為3 mg·L-1和0.05 mg·L-1，是第一代叢生芽誘導(dǎo)的最佳配比，幾乎每個外植體可誘導(dǎo)出大量的叢生芽[4]。然而進入增殖誘導(dǎo)階段，仍使用該比例的激素濃度，外植體生長緩慢，出現(xiàn)大量愈傷組織，葉片發(fā)黃，形成的叢生芽難以繼續(xù)生長，顯然該比例的激素已不再適合繼續(xù)使用。本試驗在增殖誘導(dǎo)階段使用2 mg·L-1的6-BA和0.02 mg·L-1IBA，增殖效果及叢生芽的質(zhì)量都較好。

‘涌金’叢生芽增殖研究中目前遇到的困難之一是叢生芽生長緩慢，同時增殖周期不能超過30 d。這不能滿足工廠化育苗的要求。GA3對器官的分化有一定的促進作用，在適宜的濃度下有利于芽的快速生長，楊海文等[13]研究也表明適量的GA3能夠明顯促進云杉和油松高生長。本實驗在增殖培養(yǎng)基中添加了不同濃度的GA3，結(jié)果表明GA3不能縮短‘涌金’叢生芽的增殖周期，同時隨著GA3濃度的增加，誘導(dǎo)形成的叢生芽大量枯死，增殖倍數(shù)大大降低，這與云杉等其它植物有很大差異，具體原因有待進一步研究。

在培養(yǎng)基中添加蔗糖不僅為培養(yǎng)物提供了碳源，可為細胞的呼吸代謝提供底物與能源以及提供合成新化合物的碳骨架，而且在維持培養(yǎng)基中的滲透壓也起著重要作用[14-15]。一般木本植物器官發(fā)生的各個階段對培養(yǎng)基的要求有所不同，適時調(diào)整培養(yǎng)基的組成有益于‘涌金’叢生芽的增殖。由本試驗結(jié)果可知，較低濃度的蔗糖不能滿足‘涌金’叢生芽的生長，形成大量細弱的芽叢，而過高濃度的蔗糖則容易導(dǎo)致叢生芽葉發(fā)枯，基部產(chǎn)生褐化，當(dāng)蔗糖濃度為20 ~ 30 g·L-1時，能形成葉色嫩綠、生長健壯的叢生芽，這與普遍認(rèn)為的誘導(dǎo)初代芽時的蔗糖用量為3.0%基本一致[16]。

培養(yǎng)基中的物理性質(zhì)對培養(yǎng)物的影響一般包括培養(yǎng)基的固相、液相、滲透壓和pH值等，其中，培養(yǎng)基中的pH值的變化影響到鐵離子的溶解度，會使一些溶解度小的鐵鹽沉淀，直接影響到植物對鐵元素的吸收，出現(xiàn)明顯的缺鐵癥狀，鐵促進細胞分裂與伸長，缺鐵時細胞分裂停止，鐵還影響葉綠體的結(jié)構(gòu)組成與葉綠素的形成，故培養(yǎng)物缺鐵時會出現(xiàn)失綠的癥狀[17-18]。小植株因缺鐵而不伸長，節(jié)間縮短，甚至發(fā)黃壞死。因此在培養(yǎng)基中選擇適宜的pH值對植物組織培養(yǎng)甚為重要，對于‘涌金’叢生芽而言，pH值為5.8 ~ 6.2能夠滿足叢生芽增殖的要求。一般而言，液體培養(yǎng)方式在進行愈傷組織的懸浮培養(yǎng)應(yīng)用較為普遍，該種培養(yǎng)方式能夠大大提高愈傷組織的生長速度，但在器官發(fā)生則運用較少。在本次實驗中，‘涌金’叢生芽在震蕩培養(yǎng)條件下增殖效率差，這可能與葉芽原基長時間浸泡在液體中有關(guān)。

有人通過試驗得出過樟莖尖誘導(dǎo)叢生芽的最佳配方為MS + 6-BA 5 mg·L-1+ NAA 0.5 mg·L-1，但僅對不同培養(yǎng)基以及植物生長調(diào)節(jié)劑（6-BA和NAA）進行了相關(guān)研究，對影響樟叢生芽誘導(dǎo)的其它因素均未涉及[19]。本研究較為系統(tǒng)的研究和分析了影響樟叢生芽誘導(dǎo)的各種因素（如蔗糖濃度、pH值、不同繼代方式以及不同繼代周期等），最終得出了一個解決叢生芽誘導(dǎo)過程中黃葉、褐化以及增殖效率高、長勢較好的優(yōu)良方案?！拷稹瘏采康脑鲋呈且粋€多因素共同協(xié)作的過程，而本試驗只涉及基本培養(yǎng)基、激素、附加物質(zhì)、培養(yǎng)條件等因素，對‘涌金’叢生芽在增殖過程中自身內(nèi)源生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的變化沒有做進一步的分析。這有待于做更多更細致的工作，了解叢生芽在增殖過程中的生理生化變化和各個階段培養(yǎng)要求，以加快‘涌金’叢生芽松實現(xiàn)工廠育苗的進程。本研究通過對‘涌金’叢生芽的增殖優(yōu)化研究得出其最優(yōu)方案MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（2 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1），蔗糖濃度在20 ~ 30 g·L-1，pH值5.8 ~ 6.2，繼代方式為①-③-①[①: MS+NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（3 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1）；③:MS + NaH2PO4（50 mg·L-1）+ 6-BA（1 mg·L-1）+ IBA（0.02 mg·L-1）]，繼代周期在25 ~ 30 d。

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Study Experiment on Optimization of Propagation for Clump Buds of‘Yongjin’

ZHANG Chun-fang1，F(xiàn)U Tao1，HE Yue-qiu1，WANG Jian-jun2，WANG Hao2，ZHENG Guo-qiang3

（1. Ningbo City College of Vocational Technology, Ningbo 315100, Zhejiang, China; 2. Seedling Breeding Center of Ningbo Specialty Forest Seedlings, Ningbo Forestry Bureau, Ningbo 315012, Zhejiang, China; 3. Jiangsu Bi Yun Tian Agriculture and Forestry Science and Technology Co., Ltd. of Jiangsu, Danyang 212300, China）

New shoots were collected from 14-year‘Yongjin’ in Ningbo, Zhejiang province in March of 2015 for experiment on propagation of clump buds. In order to improve the proliferation efficiency and growth condition of clump buds in‘Yongjin’, new shoots of axillary buds that have not yet germinated was as experimental materials of the‘Yongjin’in this paper, systematic study was carried out about different medium, hormones, sucrose concentrations, pH values, subculture patterns and succession subculture cycles by means of plant tissue culture techniques was tested on growth of clump buds. The result showed that the optimal scheme propagation of clump buds was as follows: MS+50 mg?L-1of NaH2PO4+2 mg?L-1of 6-BA+0.02 mg?L-1of IBA, about multiplication optimization of clump buds in‘Yongjin’, and sucrose concentration was between 20-30 g·L-1, pH was 5.8-6.2, subculture pattern was ①-③-①（①: MS+50 mg?L-1of NaH2PO4+3 mg?L-1of 6-BA+0.02 mg?L-1of 6- IBA,③: MS+50 mg?L-1ofNaH2PO4+1 mg?L-1of 6-BA+0.02 mg?L-1of IBA, subculture cycle was of 25-30 days. The results of this study can effectively improve growing weakness, yellow, brown of the buds in ‘Yongjin’ subculture, and increase the proliferation efficiency.

‘Yongjin’; clump buds; tissue culture ; proliferation

10.3969/j.issn.1001-3776.2018.03.001

S792.23

A

1001-3776（2018）03-0001-08

2017-12-23；

2018-04-16

國家星火計劃項目（2015GA690062）；寧波農(nóng)業(yè)重大（重點）項目（2012C10013）

張椿芳，講師，從事植物組織培養(yǎng)研究工作，E-Mail：zhangchunfang@nbcc.cn；

王建軍，教授級高工，從事新品種選育、推廣工作，E-mail：13600622469@163.com。