張加雄,萬 麗,王 張,楊沮勤,朱伊婷,陳英杰,夏媛媛
目前,預(yù)防急性高原?。ˋMS)的化學(xué)藥物主要有碳酸酐酶抑制劑、鈣離子通道阻滯劑、利尿劑、鎮(zhèn)靜催眠劑和糖皮質(zhì)激素等,代表性藥物分別有乙酰唑胺、硝苯地平、呋塞米、地西泮和地塞米松等;預(yù)防AMS的中藥主要為補益類、活血化瘀類中藥,代表性藥物有紅景天、生脈散、復(fù)方丹參制劑等。由于AMS涉及多器官、多組織的功能改變,疾病機(jī)理錯綜復(fù)雜,中醫(yī)藥因注重“整體觀念”、“辨證論治”,相較于西醫(yī)藥物預(yù)防具有一定的優(yōu)勢。外環(huán)境的低氧低壓、空氣干燥是AMS的主要病因,AMS經(jīng)中醫(yī)辨證可歸為“氣陰虛”的范疇,因此,筆者選擇中醫(yī)治療氣陰虛的基本方“生脈散”為研究對象,對生脈散配方顆粒及其益氣、活血的加味方劑益氣生脈散(黃芪+生脈散)、活血生脈散(丹參+生脈散)配方顆粒進(jìn)行抗急性缺氧方面的藥效學(xué)比較研究,為合理運用生脈散類方劑預(yù)防AMS提供實驗依據(jù)。
1.1 材料
1.1.1 主要試劑 生脈散配方顆粒(自制),紅景天(四川省中藥飲片有限責(zé)任公司),丹參配方顆粒、黃芪配方顆粒(四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司);大鼠 ALD、ANG-Ⅱ、ANP、EPO、NT-proBNP、Renin ELISA試劑盒,均由Abcam公司生產(chǎn),北京永輝生物科技有限公司進(jìn)口分裝。
1.1.2 實驗動物 SPF級SD大鼠,雌雄各半,體重180~220 g,購于成都達(dá)碩實驗動物有限公司,生產(chǎn)許可證號SCXK(川)2015-030,飼養(yǎng)于成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院實驗動物觀察室,實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w。
1.1.3 主要設(shè)備 FLYDWC50-ⅡA低壓氧艙(中航工業(yè)貴州風(fēng)雷航空軍械有限責(zé)任公司),Multlskan Mk3酶標(biāo)儀(賽默飛世爾儀器有限公司)。
1.2 實驗方法
1.2.1 動物分組與給藥 取大鼠60只,雌雄各半,隨機(jī)分成6組,每組10只,即空白組、模型組、紅景天(HJT)組、生脈散(SMS)組、益氣生脈散(YQSMS)組、活血生脈散(HXSMS)組??瞻捉M、模型組均灌胃給予生理鹽水(10 ml/kg),其余各組分別灌胃給予紅景天水煎液(以原生藥計,劑量為1 g/kg)、生脈散配方顆粒(以原生藥計,劑量為4 g/kg)、益氣生脈散配方顆粒(以原生藥計,劑量為5 g/kg)、活血生脈散配方顆粒(以原生藥計,劑量為5 g/kg),1次/d,連續(xù)7 d。
1.2.2 急性缺氧模型[1]連續(xù)給藥7 d后,除空白組外,其余各組均置于模擬海拔5000 m的低壓艙內(nèi),放置24 h,此期間正常供應(yīng)飼料及水。
1.2.3 檢測指標(biāo) 完成造模后,將各組自低壓氧艙取出,用10%水合氯醛腹腔注射(劑量為3 ml/kg),待大鼠失去意識后,取腹主動脈血液,離心,取上層血清,采用ELISA法檢測血清促紅細(xì)胞生成素(EPO)、心鈉素(ANP)、N-腦鈉鈦(NT-proBNP)、腎素(Renin)、血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)、醛固酮(ALD)的含量。
1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù),計量資料以±s表示,組間比較采用方差分析和兩兩比較t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
與空白組比較,其他各組血清EPO、ANP、NT-proBNP、Renin、ANG-Ⅱ、ALD 含量均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。但與模型組比較,HJT組、SMS組、YQSMS 組 和 HXSMS 組 的 EPO、ANP、NT-proBNP、Renin、ANG-Ⅱ、ALD 含量均較低 (P<0.05或P<0.01)。比較而言,在SMS組、YQSMS組和HXSMS組中,HXSMS組的EPO和ANP含量最接近空白組,其次是YQSMS組;在NT-proBNP的變化上,以HXSMS組最低(P<0.01),其他各組差異不大(P>0.05)。 見表1。
ANP、NT-proBNP是反映心臟功能的重要生化標(biāo)志物;腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RASS)在維持體內(nèi)水、電解質(zhì)平衡和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面發(fā)揮著重要作用;高原缺氧環(huán)境會導(dǎo)致機(jī)體血漿EPO含量升高,進(jìn)而導(dǎo)致紅細(xì)胞增生,血液粘稠度增高。基于以上因素,本研究選擇血清EPO、ANP、NT-proBNP、Renin、ANG-Ⅱ、ALD為急性缺氧的藥效學(xué)研究指標(biāo)。
紅景天防治AMS療效確切,目前已廣泛應(yīng)用于臨床[2-3],故本研究選擇其為陽性對照藥物。本研究結(jié)果顯示,實驗大鼠在暴露模擬海拔5000 m高原環(huán)境后, 血清 EPO、ANP、NT-proBNP、Renin、ANG-Ⅱ、ALD含量均明顯升高,而生脈散配方顆粒及加味方劑能明顯降低其含量,其中活血生脈散在降低急性缺氧大鼠血清EPO含量方面,較生脈散藥理作用更強;在降低NT-proBNP含量方面,較生脈散、紅景天藥理作用均更強,這是否表明丹參與生脈散配伍,產(chǎn)生了藥理協(xié)同作用,有待進(jìn)一步研究。
表1各組急性缺氧相關(guān)生化指標(biāo)比較(n=10)
查閱生脈散預(yù)防AMS的相關(guān)文獻(xiàn),雖偶見臨床應(yīng)用報道[4-6],但在基礎(chǔ)藥理方面,研究還不夠全面、深入。而本課題較全面地研究了生脈散及其加味方劑對模擬高原環(huán)境下急性缺氧大鼠生化指標(biāo)的影響,為合理應(yīng)用生脈散類方劑預(yù)防AMS提供了更充分的實驗依據(jù)。