血漿熱休克蛋白90α評(píng)估非小細(xì)胞肺癌化療療效的意義

劉若男 江倩 柯張延 郭嘉 吳海波 高敏 張妍蓓

安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸與危重癥學(xué)科（合肥 230022）

近年來(lái)，腫瘤的高發(fā)病率備受人們關(guān)注［1］。在所有惡性腫瘤中，肺癌發(fā)病率及病死率均居較高地位，其中85%以上為非小細(xì)胞肺癌［2-3］。因肺癌早期常無(wú)明顯臨床癥狀，當(dāng)患者因出現(xiàn)癥狀而就診時(shí)，多處晚期，僅能采取以化療為主的綜合治療［4］。因此，肺癌的早期診斷極為重要。目前肺癌的診斷方法多樣，如影像學(xué)、病理學(xué)、血清腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)等［5］。其中，腫瘤標(biāo)記物因其簡(jiǎn)便、快捷、無(wú)創(chuàng)而受到廣大研究者的青睞［6］。熱休克蛋白90α（HSP90α）在維持分子伴侶結(jié)構(gòu)、調(diào)控細(xì)胞周期及凋亡、協(xié)調(diào)激素信號(hào)傳遞等方面發(fā)揮重要作用［7-8］。相關(guān)研究表明，在肺癌進(jìn)展中，HSP90α處于動(dòng)態(tài)演變過(guò)程，可作為一種新型腫瘤標(biāo)記物［9］。目前HSP90α已被證實(shí)在NSCLC等多種腫瘤細(xì)胞中含量增高且其對(duì)肺癌診斷的靈敏度及特異度均較高［6，10］。因國(guó)內(nèi)外對(duì)于HSP90α在肺癌化療療效評(píng)價(jià)方面的研究仍較少，故開(kāi)展本研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016年1月1日至2017年11月30日安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸與危重癥學(xué)科收治的NSCLC患者47例。其中男33例，女14例，中位年齡64歲。病理分型：肺鱗癌13例，腺癌31例，腺鱗癌3例。有胸腔積液組25例，無(wú)積液組22例。入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有入選患者均接受常規(guī)實(shí)驗(yàn)室及影像學(xué)檢查，且均經(jīng)病理組織活檢確診；（2）為原發(fā)性肺癌，且未接受其他治療；（3）對(duì)化療藥物均無(wú)過(guò)敏；（4）所有患者病例資料均記錄完整，PS評(píng)分＜2分，可耐受化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有嚴(yán)重心腦腎等臟器疾病，不耐受化療者；（2）有嚴(yán)重感染者；（3）依從性差，不能配合治療者；（4）妊娠期及哺乳期婦女。

1.2 試劑與方法 應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血漿HSP90α濃度，其定量檢測(cè)試劑盒、酶免分析儀均由煙臺(tái)普羅吉生物科技發(fā)展有限公司提供。所有入選患者分別于首次確診及第4次化療結(jié)束后，于清晨空腹時(shí)使用EDTA抗凝管采集靜脈血2 mL，于4℃3 000 r/min離心10 min，分離血漿，并于-80℃凍存，所有標(biāo)本統(tǒng)一解凍后，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)，具體檢測(cè)方法嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。HSP90α的正常參考值范圍為0～82.06 ng/mL，＞82.06 ng/mL即為陽(yáng)性。

1.3 治療及療效評(píng)價(jià) 收集的NSCLC患者均采用以卡鉑為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療（鱗癌為紫杉醇聯(lián)合卡鉑，腺癌為培美曲塞聯(lián)合卡鉑），21 d為1個(gè)周期，經(jīng)4個(gè)周期化療結(jié)束后，根據(jù)WHO實(shí)體瘤近期療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估，完全緩解（CR）0例，部分緩解（PR）2例，穩(wěn)定（SD）29例，進(jìn)展（PD）16例。CR+PR+SD為化療有效組，（PD）為化療無(wú)效組，即經(jīng)過(guò)4個(gè)周期化療結(jié)束后可分為化療有效組31例和化療無(wú)效組16例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)處理用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，化療前后的均數(shù)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，不同病理類型間的均數(shù)比較采用方差（F）分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 化療前后各腫瘤標(biāo)記物水平監(jiān)測(cè) 血漿HSP90α、CYFRA211、D?D及血紅蛋白（Hb）水平在化療后明顯低于化療前，其中血漿HSP90α及Hb濃度在化療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血漿CEA、NSE及白蛋白（ALB）水平在化療后較化療前升高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 化療前后各腫瘤標(biāo)記物水平Tab.1 The levels of tumor markers before and after chemotherapy ±s

表1 化療前后各腫瘤標(biāo)記物水平Tab.1 The levels of tumor markers before and after chemotherapy ±s

化療前化療后t值P值HSP90α（ng/mL）115.12±85.09 72.55±66.99 2.729 0.009 CEA（ng/mL）28.86±82.68 30.50±108.47-0.315 0.754 CYFRA211（ng/mL）7.36±7.18 5.69±6.14 1.744 0.088 NSE（ng/mL）17.14±7.70 23.50±51.95-0.881 0.383 D?D（ng/mL）2.30±4.83 1.31±1.52 1.392 0.170 Hb（g/L）127±15 116±15 5.584 0.000 ALB（g/L）39.37±4.16 40.16±11.58-0.449 0.655

2.2 化療有效組與無(wú)效組在化療前后各腫瘤標(biāo)記物水平監(jiān)測(cè) 化療有效組中，各腫瘤標(biāo)記物水平化療后均較化療前有所下降，其中血漿HSP90α、CYFRA211及Hb在化療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；化療無(wú)效組中，血漿HSP90α、CEA、NSE及ALB化療后水平較化療前有所升高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 化療有效組與無(wú)效組化療前后各腫瘤標(biāo)記物水平Tab.2 The levels of tumor markers were compared between the effective and ineffective groups of chemotherapy ±s

表2 化療有效組與無(wú)效組化療前后各腫瘤標(biāo)記物水平Tab.2 The levels of tumor markers were compared between the effective and ineffective groups of chemotherapy ±s

HSP90α（ng/mL）CEA（ng/mL）CYFRA211（ng/mL）NSE（ng/mL）D?D（μg/mL）Hb（g/L）ALB（g/L）組別有效組化療前化療后t值P值無(wú)效組化療前化療后t值P值例數(shù)31 132.79±87.36 59.35±39.98 4.457 0.000 17.27±32.00 14.09±26.23 1.243 0.223 6.21±4.72 4.05±3.37 3.439 0.002 16.61±8.24 15.87±6.22 0.482 0.633 2.89±5.81 1.42±1.82 1.374 0.180 124±15 114±14 3.899 0.001 39.25±4.24 38.35±4.85 0.890 0.380 16 80.88±71.02 98.12±97.51-0.618 0.546 51.33±134.54 62.29±181.86-0.761 0.459 9.60±10.26 8.87±8.74 0.282 0.782 18.18±6.67 38.29±88.57-0.957 0.354 1.17±1.46 1.09±0.66 0.256 0.802 131±15 119±17 4.473 0.000 39.60±4.13 43.68±18.55-0.843 0.413

2.3 有無(wú)胸腔積液對(duì)化療前后各腫瘤標(biāo)記物水平的影響 有胸腔積液組中，血漿HSP90α、CY?FRA211、NSE、D?D、Hb及ALB化療后水平較化療前有所下降，其中血漿HSP90α、CYFRA211、Hb在化療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；無(wú)積液組中，血漿HSP90α、CEA、Hb化療后水平較化療前有所下降，其中Hb水平在化療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3。

2.4 不同病理分型化療前后血漿HSP90α水平化療后肺鱗癌組、腺癌組、腺鱗癌組血漿HSP90α水平均較化療前有所下降，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表4。

表3 有胸腔積液組與無(wú)胸腔積液組化療前后各腫瘤標(biāo)記物水平Tab.3 The levels of tumor markers were presented before and after chemotherapy in patients who had hydrothorax or not ±s

表3 有胸腔積液組與無(wú)胸腔積液組化療前后各腫瘤標(biāo)記物水平Tab.3 The levels of tumor markers were presented before and after chemotherapy in patients who had hydrothorax or not ±s

組別有積液化療前化療后t值P值無(wú)積液化療前化療后t值P值例數(shù)25 HSP90α（ng/mL）CEA（ng/mL）CYFRA211（ng/mL）NSE（ng/mL）D?D（μg/mL）Hb（g/L）ALB（g/L）134.17±104.35 58.03±32.74 3.547 0.002 37.80±109.62 43.87±146.55-0.72 0.479 7.85±8.87 4.50±5.40 3.001 0.006 15.80±4.52 15.00±4.06 0.832 0.414 3.52±6.37 1.37±1.48 1.695 0.103 126±17 111±16 4.572 0.000 39.45±4.39 38.96±4.63 0.499 0.622 22 93.47±49.92 89.05±89.83 0.218 0.829 18.71±32.24 15.30±27.82 0.611 0.548 6.80±4.72 7.04±6.75-0.157 0.877 18.67±10.10 33.16±75.56-0.941 0.357 0.92±0.99 1.23±1.60-0.812 0.426 128±13 121±13 3.552 0.002 39.27±3.99 41.53±16.29-0.618 0.543

表4 不同病理分型化療前后血漿HSP90α水平Tab.4 The levels of plasma HSP90α were showed among different pathological types before and after chemotherapy

3 討論

肺癌是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤，其發(fā)病率及病死率均較高［3］，故肺癌的早期診斷尤為重要。在眾多檢測(cè)方法中，血清腫瘤標(biāo)記物因其無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便而備受關(guān)注。其中，HSP90α成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)之一。HSP90α在致癌信號(hào)的傳導(dǎo)、血管的新生、抗細(xì)胞凋亡及腫瘤轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用［7］。張聞龍等［9］亦在研究中表明HSP90α可作為一種新型腫瘤標(biāo)記物。

本研究將NSCLC患者化療前后的血漿HSP90α濃度進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化療后HSP90α水平較化療前明顯下降，該結(jié)果與SHI等［11］的研究結(jié)果一致，表明化療對(duì)HSP90α在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)具有較為重要的影響，在化療過(guò)程中監(jiān)測(cè)HSP90α濃度對(duì)于評(píng)價(jià)化療療效有著極其重要的作用。另外，本研究亦對(duì)入組患者化療結(jié)束后的療效進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示：在化療有效組中，血漿HSP90α及肺癌三項(xiàng)水平均較化療前有所下降，其中HSP90α及CYFRA211在化療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；由此可見(jiàn)，單獨(dú)檢測(cè)血漿HSP90α水平對(duì)于NSCLC化療后的療效評(píng)價(jià)優(yōu)于肺癌三項(xiàng)（因其簡(jiǎn)化了檢測(cè)程序并降低了檢測(cè)成本），此為患者化療后隨訪提供更優(yōu)選擇。

肺癌患者常伴有胸腔積液，在本研究中，有胸腔積液組患者化療后HSP90α水平較化療前明顯下降，而無(wú)積液組患者無(wú)明顯差異，由此可見(jiàn)化療對(duì)于有積液組患者療效更佳。SHI等［12］研究表明：肺癌患者血漿HSP90α水平在不同病理分型間無(wú)明顯差異，與本研究結(jié)果一致。但本研究因樣本量少，病理分型間可能存在偏倚，在后期研究中將增大樣本量使得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更加完善。

晚期肺癌患者多伴有凝血功能異常，研究表明，纖溶系統(tǒng)及凝血機(jī)制的改變導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)血液黏稠度上升，使得機(jī)體呈現(xiàn)出高凝狀態(tài)，此為肺癌患者機(jī)體內(nèi)最常見(jiàn)的改變之一［12］。相關(guān)研究表明，肺癌患者的預(yù)后好壞與血漿D?D水平呈負(fù)相關(guān)。本研究中，血漿D?D水平在化療前后差異顯著，表明化學(xué)治療可改善肺癌患者的凝血狀態(tài)，該檢查對(duì)于肺癌化療療效的評(píng)價(jià)亦有重要意義。

本研究對(duì)入選患者的Hb進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是化療有效組還是無(wú)效組，Hb水平在化療前后差異顯著。如上所述，肺癌患者就診時(shí)多已處晚期，長(zhǎng)期惡病質(zhì)使得患者處于貧血狀態(tài)，研究表明，腫瘤組織缺氧是誘導(dǎo)化療耐藥的重要原因，而Hb作為機(jī)體內(nèi)攜氧的主要分子，具有重要的參考價(jià)值［13］。

本研究對(duì)入組患者化療前后的血漿HSP90α水平、肺癌三項(xiàng)、Hb、ALB及D?D分別進(jìn)行了探討，結(jié)果顯示血漿HSP90α可用于評(píng)估化療療效并指導(dǎo)后續(xù)治療。但因本研究樣本量有限，對(duì)于病理分型間的探討可能存在偏倚。另外，本研究?jī)H檢測(cè)了肺癌患者首診及第4次化療結(jié)束后的各腫瘤標(biāo)記物水平，在后期研究中將增大樣本量，并對(duì)每次化療結(jié)束后各腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)，以便得出其中的相關(guān)關(guān)系。除此之外，還將對(duì)血漿HSP90α水平與肺癌患者靶向治療及客觀生存率間的關(guān)系分別進(jìn)行探討。