廢棄杏鮑菇菇根中總黃酮提取工藝

□ 馬 娟 賀曉龍 延安大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 汪 飛 延安市微生物研究所 陳改琴 延安嘉康食用菌有限責(zé)任公司毛 玲 羅玲玲 延安大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

杏鮑菇（Pleurotus eryngii Quel），別名剌芹、側(cè)耳，隸屬于真菌門、擔(dān)子菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬。杏鮑菇集食用、藥用、食療于一體的珍稀食用菌，肉質(zhì)肥厚，質(zhì)地脆嫩，肉質(zhì)乳白、結(jié)實，口感較好，具有杏仁香味和鮑魚的口感，故稱杏仁鮑魚菇。其子實體色澤雪白，質(zhì)地脆嫩，也稱“雪茸”，又有“平菇王”“干貝菇”“草原上的美味牛肝菌”之美譽。杏鮑菇含有17種氨基酸，游離氨基酸2.36%，含蛋白質(zhì)21.44%，脂肪1.88%，還原糖2.17%，總糖36.78%，甘露醇2.27%，總碳水化合物57.35%，水溶性成分66.9%，灰分7.83%，水分11.56%。并且鈣、鋅、硒的干重分別為 248.42，4.28，0.074 mg/100 g（ 均為干重）是提高運動能力的功能成分。子實體和菌絲中的維生素C的含量分別為 21.4 mg/100 g和 13.9 mg/100 g。杏鮑菇還具有降血脂、降低膽固醇、促進胃腸消化、增強機體免疫能力、防止心血管病[1,2]等功效。

黃酮類化合物是具有多種生物活性的多酚類化合物，具有抗炎抑菌、抗氧化、抗癌、抗輻射、降血糖、抗腫瘤、增加免疫力等作用?；诖?，項目組對杏鮑菇工廠化生產(chǎn)中的廢棄菇根進行綜合利用，采用熱浸提法對影響杏鮑菇廢棄菇根中的黃酮提取的因素進行優(yōu)化組合，對黃酮進行初步定性和定量檢測，尋找最佳提取方法，降低廢菇根的污染[3]。

1 材料、試劑與儀器

1.1 供試材料

杏鮑菇菇根，由陜西瑞福興生物科技有限公司提供，樣品經(jīng)烘干后研磨成粉末，過60目篩后置陰涼干燥處備用。

1.2 試驗藥品

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（純度98%） ，中國食品藥品檢定研究院；10%鹽酸、10%氫氧化鈉，均為分析純。

1.3 儀器設(shè)備

高速萬能粉碎機、水浴鍋、真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、濾紙、燒杯、量筒、玻璃棒、pH試紙、電子天平等。

2 試驗方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用NaNO3-Al(NO3)3-NaOH比色法，測定體系在510 nm處的吸光值[4]，利用軟件UVprobe自動生成蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如圖1所示。

2.2 單因素試驗

通過摸索試驗，筆者采用堿提酸沉法進行單因素試驗設(shè)計[5]。

2.2.1 料液比

精確稱取 1.00 g 杏鮑菇菇根粉末5份，分別按料液比 1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50加蒸餾水，堿提時pH值為8，酸沉?xí)rpH值為5，提取時間為25 min。對濾液趁熱抽濾，濃縮合并提取液，靜止24 h。對其進行再次抽濾，沉淀物水洗至中性，在60 ℃條件下進行干燥，得到粗品，進行純結(jié)晶，70～80 ℃得純品。

2.2.2 堿提時pH值

精確稱取 1.00 g杏鮑菇菇根粉末5份，料液比為1∶30，堿提時pH值為8，酸沉?xí)rpH值為5 ，分別按堿提時pH值為8、8.5、9、9.5、10，提取時間25 min。接下來方法同2.2.1。

2.2.3 酸沉?xí)rpH值

精確稱取 1.00 g杏鮑菇菇根粉末5份，料液比為1∶30，堿提時pH值為8，按酸沉?xí)rpH值為3.5、4.0、4.5、5.0、5.5，提取時間25 min。接下來方法同2.2.1。

2.2.4 提取時間

精確稱取 1.00 g杏鮑菇菇根粉末5份，料液比為1∶30，堿提時pH值為8，酸沉?xí)rpH值為5 ，分別提取 15、20、25、30、35 min。接下來方法同2.2.1。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 正交試驗

根據(jù)單因素的試驗驗結(jié)果，設(shè)計正交試驗。

3 結(jié)果與分析

3.1 單因素試驗結(jié)果

3.1.1 料液比對廢棄杏鮑菇菇根中的黃酮提取的影響

不同料液比提取所得黃酮得率，如圖2所示。

通過不同料液比對廢棄杏鮑菇菇根中提取黃酮影響試驗，可以得出杏鮑菇菇根中黃酮提取的最適料液比應(yīng)在1∶30左右。

3.1.2 堿提時的pH值對廢棄杏鮑菇菇根中的黃酮提取的影響

堿提時不同pH值提取所得黃酮得率，如圖3所示。

通過堿提時不同pH值對廢棄杏鮑菇菇根中提取黃酮影響試驗，可以得出杏鮑菇菇根中黃酮提取的最適堿提時pH值應(yīng)在8.5左右。

3.1.3 酸沉?xí)r的pH值對廢棄杏鮑菇菇根中的黃酮提取的影響

酸沉?xí)r不同pH值提取所得黃酮得率，如圖4所示。

通過酸沉?xí)r不同pH值對廢棄杏鮑菇菇根中提取黃酮影響試驗，可以得出杏鮑菇菇根中黃酮提取的最適酸沉?xí)rpH值應(yīng)在5左右。

3.1.4 提取時間對廢棄杏鮑菇菇根中的黃酮提取的影響

不同提取時間提取所得黃酮得率，如圖5所示。

通過不同提取時間對廢棄杏鮑菇菇根中提取黃酮影響試驗，可以得出杏鮑菇菇根中黃酮提取的最適提取時間應(yīng)在25 min左右。

圖2 不同料液比提取所得黃酮得率

圖3 堿提時不同pH值提取所得黃酮得率

圖4 酸沉?xí)r不同pH值提取所得黃酮得率

圖5 不同提取時間提取所得黃酮得率

3.2 正交試驗結(jié)果

通過單因素試驗，筆者確定了廢棄杏鮑菇菇根提取黃酮的大概范圍，選取了四個因素相對最適值進一步進行正交試驗（見表1、表2）。分別是：料液比為1∶30，堿提時pH值為8.5，酸沉?xí)rpH值為5，提取時間為25 min。

表1 因素水平表

表2 正交試驗結(jié)果

通過正交試驗，我們可以得到最佳提取條件是：料液比 1∶25，堿提時pH值8.5、酸沉?xí)rpH值5、提取時間25 min。

4 結(jié)論

以廢棄的杏鮑菇菇根為原料，分別從料液比，堿提時的pH值，酸沉?xí)r的pH值以及提取時間作了單因素試驗。通過單因素試驗，得出提取黃酮的大概范圍，從而設(shè)置正交試驗。通過正交試驗優(yōu)化，能夠得出的最佳提取條件為料液比 1∶25，堿提時PH值為8.5、酸沉?xí)rpH值為5、提取時間25 min。試驗過程中只是針對總黃酮的提取等進行了探究，而對于黃酮的分離、純化、成分檢測及其他活性物質(zhì)的研究還需進一步探究。