分光光度法在食品大腸菌群數(shù)快速檢測中的應(yīng)用

□ 王 斌 郎 平 新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)食品藥品檢驗所

隨著人們生活水平的提升，食品安全問題逐漸成為了各國公眾關(guān)注和政府關(guān)注的熱點問題[1]。大腸菌群是一種廣泛分布在自然界和溫血動物糞便中的細菌群體，是引起食品被污染的主要病原微生物，為此，加強對大腸菌群的快速檢測，成為了當(dāng)前食品藥品監(jiān)督管理的重要任務(wù)[2]。結(jié)合大腸菌群的特性，人們在對其檢測時，主要采用分光光度法，現(xiàn)對其實施方法及效果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

大腸桿菌菌種（新疆維吾爾自治區(qū)喀什大學(xué)）；伊紅美蘭培養(yǎng)基、去氧膽酸鹽瓊脂、乳糖膽鹽培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱）；分析純（上海生物科技）。

1.1.2 儀器

分光光度計（上海元析儀器，UV-8000ST）；溫度氣壓真空工作臺（成都星華冠機電）；手提式壓力蒸汽消毒器（萊富醫(yī)療，LF-23L-E）；電子天平（上海精天電子儀器）等。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基制備

①乳糖膽鹽培養(yǎng)基：精密量取乳酸膽鹽培養(yǎng)基粉末45 g，將其溶解到1 000 mL蒸餾水中，充分煮沸，高壓滅菌后備用。②LB液體培養(yǎng)基：精密量取LB培養(yǎng)基粉末1.25 g，將其溶解到50 mL蒸餾水中，充分加熱溶解，高溫滅菌后備用。③伊紅美蘭混合液：精密量取美蘭水溶液13 mL與伊紅水溶液20 mL充分混合，制作成伊紅美蘭混合液，高溫滅菌后備用。

1.2.2 濃縮菌液制備

為保障分光光度法靈敏度得到有效提升，均在菌液濃縮之后再實施檢測。本研究主要運用0.45 μm混合酯濾膜來對待檢樣品進行過濾處理。

1.2.3 不同濃度菌液制備

在凈化工作臺內(nèi)，在50 mL LB液體培養(yǎng)基中接種大腸菌群菌種，密封，放置在37 ℃搖床中，以190 r/min持續(xù)培養(yǎng)18 h，即可獲得大腸菌群飽和菌懸液，濃度為108個/mL。取飽和菌懸液10 mL將其置于1號試管，注入無菌生理鹽水9 mL，完成1∶10稀釋液的制備；另取1∶10稀釋后飽和菌懸液1 mL置于2號試管，注入9 mL，完成1∶100稀釋液的制備。按照上述相同的方法完成不同濃度菌液的制備，分別為：1∶103、1∶104、1 ∶ 105、1 ∶ 106、1 ∶ 107、1 ∶ 108。

2 結(jié)果與分析

2.1 吸收曲線

根據(jù)實驗方法進行培養(yǎng)，顯色逐漸穩(wěn)定之后，將波長設(shè)定在400～700 nm范圍內(nèi)掃描，選取入射光波長。根據(jù)結(jié)果來看，波長在500 nm時，達到最大吸收度。故本研究以500 nm作為測定波長。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

本研究將大腸菌群含量作為縱坐標(biāo)，將分光光度計測得的吸光度值設(shè)定為橫坐標(biāo)，構(gòu)建起標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過對該工作曲線即可進行菌液的測定，且能夠在2.5 h完成對菌液的檢測，根據(jù)測定結(jié)果，直線回歸方程為y=-16.029x+6.4005，r2=0.9911，具有較好的線形關(guān)系。

2.3 精密度實驗

向6號培養(yǎng)基中加入5 μL待測濃縮菌液，根據(jù)實驗方法在實施操作之后，在500 nm波長部位連續(xù)進行5次吸光度測定，并基于此實施精密度實驗。根據(jù)連續(xù)5次的測定結(jié)果來看，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）=2.550%，表明其精密度較高。

2.4 樣品誤差分析

自市面上購入大蔥、白菜和黃瓜，采用分光光度法對其進行重復(fù)3次的檢測，取檢測結(jié)果平均值，大蔥平均誤差為2%、白菜平均誤差為10.6%和黃瓜平均誤差為0.45%。見表1。

表1 樣品誤差分析

2.5 相關(guān)性分析

根據(jù)上述樣品檢測結(jié)果，另從市面上選取75個不同的樣品再次實施檢測。根據(jù)檢測結(jié)果來看，其相關(guān)系數(shù)r=0.9954，具有較好相關(guān)性。

3 結(jié)論

在食品大腸菌群數(shù)檢測中，分光光度法是一種具有較高精密度和相關(guān)性的方法，其能夠在較短施加內(nèi)完成對食品大腸菌群數(shù)的檢測，在保障食品安全上具有重要作用。