液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物組織中卡巴氧和喹乙醇代謝物殘留量

□ 任召珍 威海海洋職業(yè)學(xué)院

卡巴氧（Carbadox）和喹乙醇（Olaquindox）是喹喔啉類化合物[1],這類藥物具有促進動物生長和抑菌作用[2], 廣泛用于動物飼料中。研究發(fā)現(xiàn)這類藥物具有潛在的致畸變、致癌作用，代謝產(chǎn)物也對健康有危害[3，4]。因此許多國家將卡巴氧、喹乙醇和其代謝產(chǎn)物列為食用動物禁用或限用的藥物[5，6]。由于喹乙醇代謝物的危害性，本文建立了喹乙醇代謝物的液質(zhì)檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試劑和材料

甲醇及乙腈（德國默克）、乙酸乙酯、正己烷、甲酸、乙酸皆為色譜純；鹽酸、乙酸鈉為分析純；蛋白酶（Sigma P5147）；Tris堿（Sigma T1503）；陰離子交換柱（Oasis MAX 60 mg，3 mL）；標(biāo)準(zhǔn)品（DR公司，純度＞90%）。

1.1.2 儀器

液質(zhì)聯(lián)用儀（Thermo）、電子天平（奧豪斯）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化）、冷凍離心機（貝克曼）、研磨儀（Retsch）、渦旋混合器（IKA）、氮氣儀、固相萃取裝置（天津津騰）。

1.2 樣品前處理

稱5 g均勻樣品，精確至0.01 g，置于50 mL離心管中，加入15 mL 0.8%甲酸溶液，渦旋混勻后，置于48℃振蕩水浴中振搖30 min，先加入4 mL 0.5 mol/L pH值為10的磷酸鹽緩沖溶液混勻后，再加入0.5 mL蛋白酶水溶液，渦旋混勻1 min，置于48 ℃水浴振蕩箱中酶解16 h。冷卻至室溫后加入20 mL 0.3 mol/L鹽酸溶液使試樣酸化，告訴渦旋振蕩1 min后在4 ℃以8 000 r/min離心10 min，上清液過濾。

1.3 樣品凈化

將1.2取得濾液用waters 混合陰離子固相萃取柱凈化，用15 mL甲醇水溶液（1+9）溶液淋洗固相萃取柱，用真空泵抽干后用10 mL二氯甲烷洗脫脫氧卡巴氧至離心管內(nèi)。固相萃取柱再用5 mL甲醇水（1+9）、5 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液和5 mL水溶液分別淋洗，用真空泵抽干后用10 mL酸化乙酸乙酯溶液洗脫喹乙醇代謝物至離心管中， 45 ℃氮氣吹至近干后自然風(fēng)干。用1.0 mL 酸化甲醇（1‰甲酸）溶液定容，過0.22 μm有機濾膜，供液質(zhì)聯(lián)用儀進行測定。

1.4 色譜-質(zhì)譜條件

液相條件如下。

色 譜 柱：C18柱，100 mm×2.1 mm×5 μm

流動相：A為甲醇，B為0.1%甲酸溶液

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

取1 mg/L的喹乙醇代謝物，在液質(zhì)聯(lián)用儀的ESI源正離子模式下進行掃描，根據(jù)待測物的信噪比優(yōu)化最佳噴霧電壓、碰撞能量和氣流量。經(jīng)優(yōu)化噴霧電壓：4 000 V；鞘氣40 , 輔助氣10，離子源溫度350 ℃，3種喹乙醇代謝物的質(zhì)譜條件見表2，喹乙醇代謝物TIC如圖1所示。

2.2 線性方程

配置混合標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，濃度為 0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 μg/L。3種藥物在 0～100 μg/L 的范圍內(nèi)呈線性良好，r2均大于0.99。詳細(xì)情況見表3。

2.3 回收率試驗

取豬肉陰性樣品，添加濃度為2、5、10 μg/kg的三個濃度水分，每個水平6個平行，樣品的回收率和回收率的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值見表4。

表1 流動相梯度洗脫條件

表2 喹乙醇代謝物的質(zhì)譜條件

圖1 喹乙醇代謝物TIC圖（總離子流圖）

表3 喹乙醇代謝物線性方程

表4 喹乙醇代謝物的回收率及檢測精密度

3 結(jié)論

本方法可以準(zhǔn)確地測定豬肉中喹乙醇代謝物，回收率和精密度均滿足微量殘留測定范圍要求。該方法的定量下限為2.0 μg/kg，可以滿足動物組織中3種喹乙醇代謝物殘留含量的測定。