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    餌料錳含量對凡納濱對蝦亞成蝦生長及抗氧化活力的影響

    2018-07-13 21:07:06魯耀鵬陳曉丹張秀霞鄭佩華王冬梅冼健安王安利
    南方農(nóng)業(yè)學報 2018年2期
    關鍵詞:生長性能

    魯耀鵬 陳曉丹 張秀霞 鄭佩華 王冬梅 冼健安 王安利

    摘要:【目的】明確凡納濱對蝦亞成蝦餌料中錳(Mn)的適宜添加量,為對蝦餌料的科學配制提供參考依據(jù)?!痉椒ā恳砸凰蛩徨i(MnSO4·H2O)為Mn源,設6個不同Mn添加量的餌料處理組:0(對照)、50、100、150、200和300 mg/kg,投喂凡納濱對蝦亞成蝦(初始體重4.83±0.39 g/尾,初始體長8.23±0.43 cm/尾)10周后測定其生長性能和抗氧化活力指標。【結果】餌料Mn添加量對凡納濱對蝦的存活率無顯著影響(P>0.05,下同);除50 mg/kg處理組外,其他Mn添加處理組的對蝦增重率和特定生長率均顯著高于對照組(P<0.05,下同),且以Mn添加量為200 mg/kg的效果最佳。凡納濱對蝦血清和肝胰腺中的錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力均隨Mn添加量的增加呈先升高后降低的變化趨勢,當Mn添加量為150和200 mg/kg時,對應的Mn-SOD和T-SOD活力均顯著高于對照組;Mn添加量達300 mg/kg時,血清和肝胰腺Mn-SOD和T-SOD活力反而下降。凡納濱對蝦血清和肝胰腺總抗氧化能力(T-AOC)對餌料Mn添加量的響應與Mn-SOD和T-SOD活力基本一致,其適宜添加范圍也在150~200 mg/kg。餌料Mn添加量對凡納濱對蝦血清MDA含量未產(chǎn)生顯著影響,也未顯著降低肝胰腺MDA含量,但Mn添加量達300 mg/kg時,肝胰腺MDA含量顯著高于其他Mn添加處理組及對照組。【結論】餌料中添加適量的Mn可促進凡納濱對蝦亞成蝦生長,并通過提高SOD活力以提高機體的總體抗氧化水平,但添加過量會在一定程度上抑制抗氧化活力,并對肝胰腺造成一定損傷。綜合生長性能和抗氧化活力指標,凡納濱對蝦亞成蝦餌料中的Mn適宜添加量為150~200 mg/kg。

    關鍵詞: 凡納濱對蝦;錳(Mn);生長性能;抗氧化活力

    中圖分類號: S945.49 文獻標志碼:A 文章編號:2095-1191(2018)02-0391-06

    0 引言

    【研究意義】錳(Mn)作為生物體內(nèi)的必需微量元素,不僅參與機體各種酶的組成,還對機體的生長代謝有一定調(diào)控作用。Mn在水產(chǎn)動物體內(nèi)扮演著多種角色,在生理代謝方面,是各種酶的重要組成成分,對特定或非特定的酶具有激活作用(Ali,2000,2001;蔣蓉,2006);在生長發(fā)育方面,Mn對骨骼形成起至關重要的作用,缺Mn會阻礙水產(chǎn)動物骨骼生長且降低其柔韌性(牛景彥和劉占才,2016)。雖然水產(chǎn)動物對Mn元素的需求量較低,但其在水產(chǎn)動物的生長、免疫和抗脅迫等方面發(fā)揮重要作用,因此Mn的足量攝入不容忽視?!厩叭搜芯窟M展】至今,已有大量研究表明在餌料中添加適量Mn可有效提高水產(chǎn)動物的生長性能和免疫功能(陳曉丹等,2010)。郭建林(2007)通過研究鐵(Fe)、銅(Cu)、Mn和鋅(Zn)4種重要微量元素對異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)生長性能、生理機能及器官中微量元素含量的影響,結果發(fā)現(xiàn)Mn對血清、黏液和肝胰臟的總超氧化物歧化酶(T-SOD)及肝胰臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)水平的影響最明顯。趙鑫(2013)通過測定分析Mn對奧尼羅非魚幼魚生長、生理機能及機體微量元素沉積的影響,證實奧尼羅非魚幼魚基礎餌料中Mn的適宜添加量為107.15 mg/kg。聶家全等(2015)研究表明,當餌料中Mn含量能滿足斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)幼魚生長需要時,甘氨酸錳(GMn)的生物利用率高于羥基蛋氨酸錳(HMn),但兩種Mn源的抗氧化能力相似。有關Mn對蝦類的影響研究,董曉慧等(2005)根據(jù)凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)的生長性能和各組織中的Mn含量,確定了蝦苗餌料中硫酸錳(MnSO4)和GMn兩種Mn源的適宜添加量;王宏偉等(2006,2008,2009)研究表明,餌料中添加適量的Mn可提高中華米蝦(Caridina denticulata sinensis)和日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)的肌肉抗氧化活力,從而提高其抗脅迫能力;蔡海瑞(2016)根據(jù)凡納濱對蝦幼蝦生長性能、組織Mn含量和免疫酶活力等,確定凡納濱對蝦幼蝦餌料中MnSO4和HMn的最適添加量分別為33.00和24.77 mg/kg。【本研究切入點】隨著水產(chǎn)動物的成長,其生理發(fā)生各種變化,營養(yǎng)生理需求也會發(fā)生改變。雖然已有研究顯示凡納濱對蝦幼蝦餌料的Mn適宜添加量約30.00 mg/kg(董曉慧等,2005;蔡海瑞,2016),但在不同生長階段其對Mn的需求量有可能不同,因此有必要針對各生長發(fā)育階段的凡納濱對蝦開展餌料Mn適宜添加量研究?!緮M解決的關鍵問題】對比分析餌料Mn含量對凡納濱對蝦亞成蝦生長及抗氧化活力的影響,明確凡納濱對蝦亞成蝦餌料中Mn的適宜添加量,為對蝦餌料的科學配制提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1. 1 試驗材料

    凡納濱對蝦購自廣東省廣州市番禺區(qū)某對蝦養(yǎng)殖場,平均初始體重4.83±0.39 g/尾,平均初始體長8.23±0.43 cm/尾。對蝦在室內(nèi)循環(huán)過濾系統(tǒng)中馴養(yǎng)1周,以適應養(yǎng)殖環(huán)境,馴養(yǎng)期間投喂基礎餌料。

    1. 2 餌料制備

    基礎餌料的組成及營養(yǎng)成分見表1。以一水硫酸錳(MnSO4·H2O)為Mn源,設6個不同Mn添加量處理組:0(對照)、50、100、150、200和300 mg/kg,以原子吸收光譜法測得餌料中的實際Mn含量分別為23.6、66.0、108.0、166.0、214.0和312.0 mg/kg。餌料原料粉碎后過60目篩,加入脂肪源和水進行混合,用飼料機壓制成顆粒餌料,60 ℃烘箱烘干至恒重, -10 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1. 3 對蝦養(yǎng)殖

    供試對蝦在室內(nèi)循環(huán)過濾養(yǎng)殖系統(tǒng)中進行養(yǎng)殖。養(yǎng)殖桶為圓形塑料桶,放水約250 L,每處理設3個重復(桶),每桶隨機放養(yǎng)對蝦25尾。養(yǎng)殖期間水體條件:鹽度5‰,溫度(25±3)℃,pH 8.0,氨氮0.16±0.05 mg/L,亞硝酸鹽0.05±0.03 mg/L,養(yǎng)殖期間不間斷充氣增氧,每周換水1/5。每天投餌量約為對蝦體重的2%,并按實際攝食情況適當調(diào)整投喂量,每天投喂3次,分別于8:00、12:30和17:00進行投喂。養(yǎng)殖周期10周。

    1. 4 生長性能指標測定

    經(jīng)過10周飼養(yǎng)后,對試驗對蝦的生長性能指標進行測定,具體計算公式:

    存活率(%)=終末尾數(shù)/初始尾數(shù)×100

    增重率(WG,%)=(Wt-W0)/W0×100

    特定生長率(SGR,%/d)=100×(lnW-lnW0)/t

    式中,Wt為養(yǎng)殖t天后的對蝦平均體重(g),W0為對蝦初始平均體重(g),t為飼養(yǎng)天數(shù)(d)。

    1. 5 抗氧化活力指標測定

    1. 5. 1 血清制備 對蝦稱重后用吸水紙吸干體表水分,用1.0 mL注射器先吸取0.3 mL抗凝劑(檸檬酸鈉50 mmol/L,EDTA-Na2 10 mmol/L,pH 7.3),再從對蝦的圍心腔和腹血竇抽取0.3 mL血淋巴。血淋巴轉(zhuǎn)移至離心管后4 ℃下3000 r/min離心10 min,上清液即為血清,液氮速凍后-80 ℃保存?zhèn)溆谩C總€重復取對蝦3尾,每尾對蝦的血清作為單獨樣品進行測定。

    1. 5. 2 肝胰腺懸液制備 對蝦采集血淋巴后用滅菌鑷子立即取出肝胰腺放入離心管,液氮速凍后 -80 ℃保存?zhèn)溆谩C富盍y定前,取出肝胰腺樣品稱重,加入9倍體積的生理鹽水(0.85% NaCl,高溫滅菌),于冰浴條件下超聲波勻漿(勻漿3 s,間歇8 s,重復15次),勻漿液在4 ℃下10000 r/min離心30 min,上清液為待測的肝胰腺懸液。每尾對蝦的肝胰腺懸液作為單獨樣品進行測定。

    1. 5. 3 指標測定 血清和肝胰腺的總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力、總抗氧化能力(T-AOC)及肝胰腺丙二醛(MDA)含量均采用南京建成生物工程研究所研發(fā)的試劑盒進行測定。

    1. 6 統(tǒng)計分析

    試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0進行單因素方差分析(One-way ANOVA)。

    2 結果與分析

    2. 1 Mn添加量對凡納濱對蝦生長性能的影響

    至試驗結束時,各處理組凡納濱對蝦的存活率為81.3%~86.7%,組間差異均不顯著(P>0.05,下同);但在增重率和特定生長率方面,除50 mg/kg處理組外,其他Mn添加處理組的對蝦增重率和特定生長率均顯著高于對照組(P<0.05,下同),尤其以Mn添加量為200 mg/kg的效果最佳(圖1)。

    2. 2 Mn添加量對凡納濱對蝦血清抗氧化活力的影響

    2. 2. 1 Mn添加量對凡納濱對蝦血清SOD活力的影響 與對照組相比,當Mn添加量為150和200 mg/kg時凡納濱對蝦的血清Mn-SOD活力顯著升高(圖2),且以150 mg/kg處理組的血清Mn-SOD活力最高,為38.80 U/mL。當Mn添加量為150和200 mg/kg時凡納濱對蝦的血清T-SOD活力也顯著高于對照組,同樣以150 mg/kg處理組的血清T-SOD活力最高,達76.89 U/mL。

    2. 2. 2 Mn添加量對凡納濱對蝦血清T-AOC和MDA含量的影響 由圖3可看出,凡納濱對蝦血清T-AOC隨餌料Mn添加量的增加呈先升高后降低的變化趨勢,當Mn添加量為150和200 mg/kg時幾納濱對蝦的血清T-AOC顯著高于對照組,且以150 mg/kg處理組的效果最佳。餌料中添加Mn對凡納濱對蝦的血清MDA含量無顯著影響。

    2. 3 Mn添加量對凡納濱對蝦肝胰腺抗氧化活力的影響

    2. 3. 1 Mn添加量對凡納濱對蝦肝胰腺SOD活力的影響 凡納濱對蝦肝胰腺的Mn-SOD和T-SOD活力變化規(guī)律一致,均隨餌料Mn添加量的增加呈先升高后降低的變化趨勢(圖4),于Mn添加量為200 mg/kg時達最高值,分別為63.05和113.81 U/mg,二者顯著高于對照組。

    2. 3. 2 Mn添加量對凡納濱對蝦肝胰腺T-AOC和MDA含量的影響 由圖5可看出,凡納濱對蝦肝胰腺T-AOC隨餌料Mn添加量的增加呈先升高后降低的變化趨勢,當Mn添加量為200 mg/kg時對蝦肝胰腺T-AOC達最高值(3.50 U/mg),顯著高于對照組。在肝胰腺MDA含量方面,除300 mg/kg處理組凡納濱對蝦的肝胰腺MDA含量顯著高于對照組外,其他Mn添加處理組與對照組均無顯著差異。

    3 討論

    目前,餌料Mn含量對魚類生長性能的影響已有較多研究報道,且一致認為餌料中添加適宜的Mn可促進魚類生長,包括虹鱒(Salmo gaidnerii)、草魚(Ctenopharyngodon idellus)、黑鯛(Sparus macrocephalus)和黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)等(蔣蓉,2006)。在蝦類方面,董曉慧等(2005)研究表明餌料中添加MnSO4和GMn均能顯著促進凡納濱對蝦幼蝦的生長,蔡海瑞(2016)的研究也證實MnSO4和HMn對凡納濱對蝦幼蝦有促生長作用。本研究結果表明,在基礎餌料中添加一定量的Mn可促進凡納濱對蝦亞成蝦生長,與董曉慧等(2005)針對凡納濱對蝦蝦苗(0.160~0.164 g/尾)及蔡海瑞(2016)針對凡納濱對蝦幼蝦(1.925±0.002 g/尾)的研究結果相似,但在具體的適宜添加水平上存在差異。針對凡納濱對蝦的生長性能,本研究結果顯示凡納濱對蝦亞成蝦餌料的Mn適宜添加量為200 mg/kg,而董曉慧等(2005)、蔡海瑞(2016)研究認為凡納濱對蝦蝦苗和幼蝦餌料的Mn(Mn源為MnSO4)適宜添加量為30 mg/kg,其差異原因可能是:①Mn適宜添加量受餌料基礎Mn含量的直接影響。以本研究的餌料基礎Mn含量約23.6 mg/kg,蔡海瑞(2016)研究的餌料基礎Mn含量約5.17 mg/kg,而董曉慧等(2005)的研究未列出餌料基礎Mn含量。②不同生長發(fā)育階段凡納濱對蝦對Mn的需求量不同。以本研究結果與前人的相關研究結果(董曉慧等,2005;蔡海瑞,2016)進行對比,發(fā)現(xiàn)蝦齡越大,其對Mn的需求量越大。

    水產(chǎn)動物受外界環(huán)境脅迫或病原體侵染時,其機體會被誘導產(chǎn)生大量活性氧(ROS),而過量的ROS會對機體產(chǎn)生氧化脅迫,此時抗氧化系統(tǒng)即發(fā)揮重要的調(diào)控作用以保護機體免受氧化損傷(Achard-Joris et al.,2006;Lushchak,2011)??寡趸甘强寡趸到y(tǒng)的主要組成部分,SOD是重要的抗氧化酶成員之一,同時發(fā)現(xiàn)其對增強血細胞的吞噬作用和防御能力具有重要促進作用(劉曉華,2010),常作為鑒別機體免疫狀態(tài)的重要指標。許安陽(2005)研究顯示,在基礎餌料中添加Mn可促使凡納濱對蝦幼蝦肌肉Mn-SOD活力上升;王宏偉等(2006,2008,2009)研究發(fā)現(xiàn),在中華米蝦和日本沼蝦的餌料中添加適量Mn,可提高SOD等抗氧化酶的活力,進而提高蝦體對環(huán)境脅迫的抵抗力;蔡海瑞(2016)研究證實,適量添加MnSO4或GMn可提高凡納濱對蝦幼蝦肝胰腺的Mn-SOD和T-SOD活力,并上調(diào)Mn-SOD基因表達。本研究結果也顯示,在餌料中添加150~200 mg/kg的Mn可顯著提高凡納濱對蝦血清、肝胰腺的Mn-SOD和T-SOD活力,但二者的響應略有不同,表現(xiàn)為:對蝦的血清Mn-SOD和T-SOD活力在150和200 mg/kg兩處理組間無顯著差異,而在肝胰腺中,200 mg/kg處理組的Mn-SOD活力顯著高于150 mg/kg處理組,說明Mn添加量增至200 mg/kg時可進一步促進肝胰腺Mn-SOD活力。但Mn添加量達300 mg/kg時,導致凡納濱對蝦的SOD活力下降,可能是Mn的添加量已超出對蝦的承受力,在抗氧化活力上起到負面作用,與王宏偉等(2006,2008,2009)在中華米蝦和日本沼蝦上得到的研究結論一致。

    T-AOC是指機體內(nèi)包括抗氧化酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)在內(nèi)的總體抗氧化水平(姚翠鸞等,2003)。本研究通過測定分析凡納濱對蝦血清和肝胰腺的T-AOC變化,以判斷機體SOD活力的變化是否影響總體抗氧化活力,結果顯示,T-AOC對餌料Mn添加量的響應與Mn-SOD和T-SOD活力基本一致,其適宜添加范圍也在150~200 mg/kg,表明在餌料中添加適宜的Mn可通過提高SOD活力而提高蝦體的總體抗氧化水平。MDA是反映機體氧化損傷程度的重要指標(Sila et al.,2015)。本研究結果表明,餌料Mn添加量對凡納濱對蝦血清MDA含量未產(chǎn)生顯著影響,也未顯著降低肝胰腺MDA含量,可能是由于對蝦處于正常環(huán)境及生理狀態(tài)下,未受到氧化脅迫作用而產(chǎn)生過量MDA,因而沒有體現(xiàn)出Mn對MDA含量的影響。但300 mg/kg處理組的凡納濱對蝦肝胰腺MDA含量顯著高于其他Mn添加處理組及對照組,說明該添加量可能已對凡納濱對蝦的肝胰腺造成損傷。

    4 結論

    餌料中添加適量的Mn可促進凡納濱對蝦亞成蝦的生長,并通過提高SOD活力以提高機體的總體抗氧化水平,但添加過量可能對肝胰腺造成一定損傷。在本研究的餌料基礎Mn含量下(約23.6 mg/kg),綜合生長性能和抗氧化活力指標,凡納濱對蝦亞成蝦餌料中的Mn適宜添加量為150~200 mg/kg。

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    (責任編輯 蘭宗寶)

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