和輝膠囊的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)

肖云峰，李文妍，馬睿婷，喬俊纏

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)新藥安全評(píng)價(jià)研究中心，內(nèi)蒙古呼和浩特 010110）（2.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院藥學(xué)處，內(nèi)蒙古呼和浩特 010017）（3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010000）（4.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010110）

近年來(lái)，我國(guó)動(dòng)脈粥樣硬化引起的心腦血管疾病發(fā)生率顯著升高，而其最重要的誘發(fā)因素為高脂血癥[1]。高脂血癥，是指脂肪代謝或運(yùn)轉(zhuǎn)異常使血漿中一種或多種脂質(zhì)濃度超出正常范圍的而誘發(fā)的一系列疾病[2]，即為古籍中常述之為“膏”的病癥表現(xiàn)?！饵S帝內(nèi)經(jīng)靈樞集注》記載：中焦之氣，蒸津液化，其精微溢于外則皮肉膏肥，余于內(nèi)則清育豐滿(mǎn)[3]。研究發(fā)現(xiàn)，高血脂癥會(huì)導(dǎo)致機(jī)體氧自由基增加，抗氧化能力下降，脂質(zhì)過(guò)氧化作用增強(qiáng)[4]；臨床主要表現(xiàn)為血管硬化、血漿或血清渾濁、血管某部位形成斑塊等。目前，臨床常使用他汀類(lèi)藥物治療高血脂癥，但需長(zhǎng)期服用，副作用較多。因此，研究具有輔助調(diào)節(jié)血脂功能的保健食品日益受到關(guān)注。

和輝膠囊以丹參、蓽茇和沙棘為主要原料，是一種具有輔助降脂功能的保健食品。丹參祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩?！侗窘?jīng)》記載：丹參主心腹邪氣，寒熱積聚；破癥除瘕，止煩滿(mǎn)，益氣；臨床主要用于冠心病以及血栓閉塞性脈管炎等疾病的治療[5,6]。蓽茇溫中散寒，下氣止痛?！侗静菥V目》記載：蓽茇辛熱，入陽(yáng)明經(jīng)散浮熱；臨床用于脘腹冷痛、嘔吐、泄瀉以及冠心病等疾病的治療[7,8]。沙棘能消食化滯，活血散瘀?！端牟酷t(yī)典》記載：沙棘健脾養(yǎng)胃、破瘀治血；臨床用于消化不良、食積腹痛以及跌撲瘀腫等疾病的治療[9～11]。組方后發(fā)現(xiàn)，和輝膠囊不僅能夠改善血脂異常、脂肪肝和各種肥胖相關(guān)的癥狀，而且對(duì)血脂異常所引發(fā)的高血壓、糖尿病具有良好的調(diào)節(jié)作用。本文就和輝膠囊的食用安全問(wèn)題，進(jìn)行毒理學(xué)研究，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 受試物

和輝膠囊，內(nèi)容物為黃棕色顆粒和粉末（內(nèi)蒙古謹(jǐn)康醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào) 20101014），基本組方為丹參、蓽茇和沙棘等藥食同源的物品；粒重0.32 g，人體推薦用量為3次/d，3粒/次，常溫保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)環(huán)境

SD大鼠，清潔級(jí)，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（軍）2007-007。

昆明種小鼠，清潔級(jí)，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（軍）2007-007。全部實(shí)驗(yàn)均于陜西省中醫(yī)醫(yī)院/陜西省疾病預(yù)防控制中心開(kāi)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證編號(hào)：SYXK（陜）2007-004。

1.3 主要儀器與試劑

全自動(dòng)生化分析儀，型號(hào)OLYMPUS AU400；全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，型號(hào) HEMAVET950FS；電子天平，型號(hào)YB1201/0.1 g；電子天平，型號(hào)DT200A/0.01 g；電子天平，型號(hào)BS323S320/0.001 g；生物顯微鏡，型號(hào)OLYMPUS41。

1.4 主要試劑

復(fù)方環(huán)磷酰胺片，天津金世制藥有限公司；阿的平，Sigma公司；注射用鹽酸柔紅霉素，浙江海正藥業(yè)股份有限公司；疊氮化鈉，Sigma公司；2-氨基芴，Sigma公司；絲裂霉素C，Sigma公司；1,8-二羥基蒽醌，Sigma公司。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 大鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)[12]

選取SD大鼠20只，雌、雄各半，體重180～220 g，于試驗(yàn)前隔夜禁食12 h。將受試物按最大耐受劑量設(shè)計(jì)為15.0 g/kg·bw，試驗(yàn)時(shí)稱(chēng)取樣品50.0 g加蒸餾水至100 mL制成混懸液備用，以1.0 mL/100 g·bw的灌胃劑量，給予大鼠灌胃三次（間隔4 h）。觀察其飲食情況、活動(dòng)情況、中毒癥狀及死亡現(xiàn)象等，連續(xù)14 d。按急性毒性劑量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)受試物的急性毒性強(qiáng)弱。

1.5.2 遺傳毒性試驗(yàn)[13～15]

1.5.2.1 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

選取昆明種小鼠50只，雌、雄各半，體重25～30 g，采用數(shù)字隨機(jī)法分為5組，每組10只。將受試物設(shè)3個(gè)劑量組，分別為10.0 g/kg·bw、5.0 g/kg·bw、2.5 g/kg·bw，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照組（蒸餾水）和陽(yáng)性對(duì)照組（環(huán)磷酰胺40 mg/kg·bw）。將受試物10.0 g、5.0 g、2.5 g各加蒸餾水至20 mL分別配成50.0%、25.0%、12.5%的混懸液。以0.2 mL/10 g·bw的灌胃劑量，給予小鼠灌胃兩次（間隔24 h）。第二次灌胃6 h后，頸椎脫臼處死小鼠，取其股骨骨髓用小牛血清稀釋涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光學(xué)顯微鏡下，每只小鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞（PCE），觀察含有微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，微核率以千分率表示；同時(shí)計(jì)數(shù)200個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，計(jì)算嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比值（PCE/NCE）。采用卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理結(jié)果，若試驗(yàn)組的微核率比陰性對(duì)照組高，并有明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則為陽(yáng)性結(jié)果。

1.5.2.2 小鼠精子畸形試驗(yàn)

選取昆明種小鼠50只，雄性，體重25～35 g，數(shù)字隨機(jī)法分為5組，每組10只。將受試物設(shè)3個(gè)劑量組，分別為 10.0 g/kg·bw、5.0 g/kg·bw、2.5 g/kg·bw，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照組（蒸餾水）和陽(yáng)性對(duì)照組（環(huán)磷酰胺40 mg/kg·bw）。將受試物10.0 g、5.0 g、2.5 g各加蒸餾水至20 mL分別配成50.0%、25.0%、12.5%的混懸液。每天以0.2 mL/10 g·bw的灌胃劑量，給予小鼠灌胃一次，連續(xù)5 d。于首次給受試物后的第35 d，頸椎脫臼處死小鼠，取其雙側(cè)附睪的精子于生理鹽水稀釋液涂片，甲醇固定，伊紅染色。在光學(xué)顯微鏡下，每只小鼠計(jì)數(shù)完整精子1000個(gè)，計(jì)算精子畸形率。采用Wilcoson秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理結(jié)果，若試驗(yàn)組的精子畸形率比陰性對(duì)照組增高，并有明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則為陽(yáng)性結(jié)果。

1.5.2.3 Ames試驗(yàn)

將受試物設(shè)計(jì) 5000 μg/皿、1000 μg/皿、200 μg/皿、40 μg/皿、8 μg/皿五個(gè)劑量組。稱(chēng)取受試物1.0 g加蒸餾水至20 mL配成5%濃度的混懸液（高劑量），高壓滅菌（0.103 MPa，20 min）后使用，依次加無(wú)菌水5倍稀釋為其它各劑量的混懸液備用。另設(shè)自然回變對(duì)照組、陰性對(duì)照組（蒸餾水）和陽(yáng)性對(duì)照組（環(huán)磷酰胺）。用Ames試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株TA97、TA98、TA100和TA102，在加與不加肝S-9混合液的條件下，分別對(duì)受試物做平板摻入法Ames試驗(yàn)。各菌株每劑量做三個(gè)平行皿，每皿加菌加樣各0.1 mL，整個(gè)試驗(yàn)重復(fù)二次，培養(yǎng)48 h后，記錄各皿回變菌落數(shù)。若受試物的回變菌落數(shù)是自然回變菌落數(shù)的二倍以上且有劑量-反應(yīng)關(guān)系者，則為誘變?cè)囼?yàn)陽(yáng)性。

1.5.3 大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)[16,17]

選取SD大鼠80只，雌、雄各半，體重51.0～77.3 g，數(shù)字隨機(jī)法分為4組，每組20只。受試物設(shè)3個(gè)劑量組，分別為 4.80 g/kg·bw（相當(dāng)于人體推薦用量的 100 倍）、2.40 g/kg·bw 和 1.20 g/kg·bw，另設(shè)一個(gè)陰性對(duì)照組（蒸餾水）。將受試物48 g、24 g和12 g各加蒸餾水至100 mL分別配成48%、24%和12%的混懸液備用，各組均以1.0 mL/100 g·bw灌胃劑量（陰性對(duì)照組灌胃等容量蒸餾水）每天給予小鼠灌胃一次，連續(xù)30 d。小鼠自由進(jìn)食和飲水，每天觀察并記錄動(dòng)物的一般表現(xiàn)（包括外表、體形、行動(dòng)、呼吸、被毛、鼻、口腔、眼、耳、生殖器、尿、糞便及其它異常），每周稱(chēng)體重及進(jìn)食量，最后計(jì)算食物利用率。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，摘眼球取血，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清生化指標(biāo)（血紅蛋白、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)等）。然后將試驗(yàn)動(dòng)物脫頸椎處死，進(jìn)行大體解剖，取肝、腎、脾、睪丸等臟器稱(chēng)重，觀察有無(wú)異常，并將陰性對(duì)照組和高劑量組動(dòng)物的肝、腎、脾、胃腸、睪丸（卵巢）固定，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.5.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法[18]

試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。在統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett檢驗(yàn)進(jìn)行多個(gè)劑量組與對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿(mǎn)足方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)仍未達(dá)到方差齊要求，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 大鼠急性毒性試驗(yàn)

以受試物最大劑量 15.0 g/kg·bw 給予大鼠灌胃后，大鼠飲食活動(dòng)正常，生長(zhǎng)良好，未見(jiàn)體重受到影響，未發(fā)現(xiàn)大鼠有明顯中毒表現(xiàn)及死亡現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)束解剖大鼠，大體觀察：肝、腎、脾、胃、腸、心、肺等主要臟器均未見(jiàn)明顯異常改變。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，保健食品和輝膠囊急性毒性屬無(wú)毒級(jí)。結(jié)果表明，相當(dāng)于人體推薦用量312.5倍劑量的和輝膠囊對(duì)雌、雄大鼠體重及臟器均無(wú)影響，屬無(wú)毒級(jí)保健食品，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 和輝膠囊對(duì)急性毒性試驗(yàn)大鼠體重的影響Table 1 The effect of Hehui capsules on the body weight of rats in acute toxicity test

2.2 遺傳毒性試驗(yàn)

2.2.1 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

與陰性對(duì)照組相比，雌、雄小鼠陽(yáng)性對(duì)照組微核率均明顯升高，具有極顯著性差異（p＜0.01）；受試物各劑量組微核率與陰性對(duì)照組，無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊在試驗(yàn)劑量 2.5 g/kg·bw～10.0 g/kg·bw 范圍內(nèi)，小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。初步認(rèn)為和輝膠囊無(wú)明顯致小鼠骨髓細(xì)胞染色體完整性受損及染色體分離作用。

2.2.2 小鼠精子畸形試驗(yàn)

與陰性對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠畸形率明顯高于陰性對(duì)照組，有極顯著性差異（p＜0.01）；受試物各劑量組小鼠精子畸形率與陰性對(duì)照組比較，均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊在試驗(yàn)劑量2.5 g/kg·bw～10.0 g/kg·bw 范圍內(nèi)，對(duì)小鼠精子無(wú)明顯毒性，初步認(rèn)為無(wú)明顯致小鼠精子畸形作用。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 和輝膠囊對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)的影響Table 2 The effect of Hehui capsules on the bone marrow cells of mice in micronucleus test

表3 和輝膠囊對(duì)小鼠精子畸形試驗(yàn)的影響Table 3 The effect of Hehui capsules on the mouse sperm abnormality test

2.2.3 Ames試驗(yàn)

與自然回變菌落數(shù)相比，受試物各劑量組及陰性對(duì)照組各菌株回變菌落數(shù)均未超過(guò)自然回變菌落數(shù)的二倍，而陽(yáng)性對(duì)照組菌落數(shù)達(dá)到自然回變菌落數(shù)的二倍以上。結(jié)果表明，和輝膠囊在試驗(yàn)劑量8 μg/皿～5000 μg/皿范圍內(nèi)，Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。未發(fā)現(xiàn)和輝膠囊存在誘變作用。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 和輝膠囊對(duì)Ames試驗(yàn)的影響Table 4 The effect of Hehui capsules on the Ames test（±s）

表4 和輝膠囊對(duì)Ames試驗(yàn)的影響Table 4 The effect of Hehui capsules on the Ames test（±s）

菌株組別 TA97 TA98 TA100 TA102 S-9(-) S-9(+) S-9(-) S-9(+) S-9(-) S-9(+) S-9(-) S-9(+)陰性對(duì)照 144±7 146±14 37±2 37±3 168±12 167±11 269±15 278±9陽(yáng)性對(duì)照 2721±233 1808±192 2956±144 5808±194 2857±212 2951±298 2169±284 969±62自然回變 148±22 147±8 38±7 35±2 173±19 161±12 275±23 278±28 5000 μg 皿 151±12 158±21 33±3 30±2 156±6 167±14 276±24 280±22 1000 μg 皿 150±8 160±10 39±2 38±2 186±6 170±9 273±21 270±11 200 μg/皿 138±10 153±9 34±4 33±1 180±16 172±3 281±9 277±14 40 μg/皿 151±5 140±22 37±7 33±6 174±24 172±22 287±8 282±4 8 μg/皿 142±15 145±14 39±5 38±8 184±4 171±8 266±9 274±4阿的平10 μg/皿10 μg/皿 柔毛霉素6.0 μg/皿2AF 2AF 10 μg/皿NaN3 1.5 μg/皿2AF 10 μg/皿絲裂霉素C 0.5 μg/皿1,8-二羥基蒽醌50.0 μg/皿

2.3 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

與陰性對(duì)照組比較，受試物各劑量組雌、雄鼠各期體重均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）；受試物各劑量組雌、雄大鼠各周進(jìn)食量、食物利用率及總食物利用率均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊長(zhǎng)期食用不會(huì)影響大鼠體重、進(jìn)食，觀察期內(nèi)未發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)明顯毒作用表現(xiàn)。

2.3.1 對(duì)大鼠體重的影響

與陰性對(duì)照組相比，受試物各劑量組大鼠給藥期間體重均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊對(duì)大鼠給藥期間體重增長(zhǎng)無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 和輝膠囊對(duì)大鼠體重的影響Table 5 The effect of Hehui capsules on the body weight of rats（±s）

表5 和輝膠囊對(duì)大鼠體重的影響Table 5 The effect of Hehui capsules on the body weight of rats（±s）

性別 劑量/(g/kg?bw) 始重/g 一周末/g 二周末/g 三周末/g 終重/g陰性對(duì)照 63.39±8.04 113.67±10.24 149.28±15.32 172.58±14.22 199.16±12.29雌性雄性4.80 63.8±8.59 111.9±11.20 152.1±10.05 179.45±7.63 202.01±9.11 2.40 63.7±8.62 110.00±12.40 147.56±11.60 172.27±10.41 194.31±8.80 1.20 63.38±8.10 112.43±9.66 151.19±7.80 174.60±8.36 198.38±6.00 4.80 61.90±8.76 116.18±13.40 168.76±16.55 216.90±20.34 268.07±18.08 2.40 62.00±8.51 116.97±11.18 172.88±13.03 225.53±15.84 276.00±15.49 1.20 62.10±8.35 117.18±7.29 172.91±9.01 221.39±12.38 267.34±20.25陰性對(duì)照 61.90±8.63 119.98±11.80 171.29±18.46 226.78±16.80 285.00±23.66

2.3.2 對(duì)大鼠進(jìn)食量和食物利用率的影響

2.3.2.1 對(duì)大鼠各周進(jìn)食量的影響

與陰性對(duì)照組相比，受試物各劑量組大鼠給藥期間各周進(jìn)食量均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊對(duì)大鼠各周進(jìn)食無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表6。

2.3.2.2 對(duì)大鼠食物利用率的影響

與陰性對(duì)照組相比，受試物各劑量組大鼠給藥期間食物利用率均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊對(duì)大鼠給藥期間食物利用率無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表7。

2.3.2.3 對(duì)大鼠總食物利用率的影響

與陰性對(duì)照組相比，受試物各劑量組大鼠給藥期間總食物利用率均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊對(duì)大鼠給藥期間總食物利用率無(wú)影響。

表6 和輝膠囊對(duì)大鼠各周進(jìn)食量的影響Table 6 The effect of Hehui capsules on the food intake of rats each week（±s，n=10）

表6 和輝膠囊對(duì)大鼠各周進(jìn)食量的影響Table 6 The effect of Hehui capsules on the food intake of rats each week（±s，n=10）

性別 劑量/(g/kg?bw) 第一周/g 第二周/g 第三周/g 第四周/g陰性對(duì)照 95.17±7.69 101.08±11.09 101.68±8.64 149.04±10.52雌性雄性4.80 94.84±6.35 106.26±10.43 109.56±8.79 149.39±16.18 2.40 91.13±3.85 101.14±9.74 97.34±8.48 144.24±12.48 1.20 94.12±6.56 102.07±6.87 106.84±8.85 143.21±16.89陰性對(duì)照 105.01±9.12 119.81±14.27 142.99±11.42 204.18±14.17 4.80 98.76±6.49 120.82±11.69 135.97±16.83 198.43±14.03 2.40 98.64±5.04 124.72±4.79 135.42±7.45 194.10±16.19 1.20 100.54±4.00 120.78±13.22 133.88±15.77 193.91±24.52

表7 和輝膠囊對(duì)大鼠各周食物利用率的影響Table 7 The effect of Hehui capsules on the weekly food utilization of rats（±s，n=10）

表7 和輝膠囊對(duì)大鼠各周食物利用率的影響Table 7 The effect of Hehui capsules on the weekly food utilization of rats（±s，n=10）

性別 劑量/(g/kg?bw) 第一周/% 第二周/% 第三周/% 第四周/%陰性對(duì)照 52.84±1.69 34.91±6.03 23.03±4.27 17.67±3.50雌性雄性4.80 50.60±2.54 38.23±5.43 24.56±5.29 14.98±2.25 2.40 50.60±3.19 37.07±3.19 25.40±6.02 15.17±2.12 1.20 52.15±2.30 38.14±5.47 21.69±3.99 16.39±2.96陰性對(duì)照 55.37±2.55 42.38±6.70 38.84±4.82 28.33±5.91 4.80 54.92±4.46 43.56±2.41 35.57±2.66 25.82±3.69 2.40 55.74±4.02 44.82±2.36 38.86±3.59 25.78±6.65 1.20 54.76±3.30 46.48±5.01 36.42±4.97 23.41±3.21

表8 和輝膠囊對(duì)大鼠總食物利用率的影響Table 8 The effect Hehui capsules on the total food utilization of rats（±s，n=10）

表8 和輝膠囊對(duì)大鼠總食物利用率的影響Table 8 The effect Hehui capsules on the total food utilization of rats（±s，n=10）

性別 劑量/(g/kg·bw) 體重總增重/g 總進(jìn)食量/g 總食物利用率/%陰性對(duì)照 135.77±10.10 446.97±24.66 30.38±1.55雌性雄性4.80 138.12±12.45 460.05±18.32 30.00±2.04 2.40 130.52±7.35 433.85±15.18 30.10±1.75 1.20 135.00±7.74 446.24±19.30 30.28±1.88陰性對(duì)照 223.10±26.09 571.99±34.86 38.96±3.32 4.80 206.17±12.11 553.98±37.69 37.27±1.75 2.40 214.00±12.72 552.88±17.36 38.72±2.21 1.20 205.24±18.97 549.11±41.42 37.39±2.31

2.3.3 對(duì)大鼠血常規(guī)的影響

與陰性對(duì)照組相比，受試物各劑量組大鼠血常規(guī)各指標(biāo)均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊對(duì)大鼠血液中紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血紅蛋白的數(shù)量變化及形態(tài)分布無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表9。

表9 和輝膠囊對(duì)大鼠血常規(guī)的影響Table 9 The effect of Hehui capsules on the blood routine of rats（±s，n=10）

表9 和輝膠囊對(duì)大鼠血常規(guī)的影響Table 9 The effect of Hehui capsules on the blood routine of rats（±s，n=10）

性別 劑量/(g/kg?bw) 血紅蛋白/(g/L) 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)/(1012/L) 白細(xì)胞計(jì)數(shù)/(109/L)陰性對(duì)照 158.20±20.88 7.08±0.86 10.86±3.54雌性雄性4.80 166.40±13.11 7.50±0.53 11.12±2.78 2.40 163.00±17.55 7.43±0.74 12.06±3.66 1.20 167.10±9.67 7.60±0.48 10.64±2.96陰性對(duì)照 164.80±11.04 7.53±0.47 10.62±1.33 4.80 162.10±11.12 7.41±0.38 9.61±1.77 2.40 163.30±7.85 7.47±0.35 11.30±1.54 1.20 154.40±29.87 7.25±0.73 10.83±2.92

2.3.4 對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響

與陰性對(duì)照組比較，雄鼠受試物各劑量組肌酐均有顯著性差異（p＜0.05），受試物高劑量組總膽固醇有極顯著性差異（p＜0.01）；其余受試物各劑量組各項(xiàng)生化指標(biāo)均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，雄性雄鼠受試物各劑量組肌酐和高劑量組總膽固醇均低于陰性對(duì)照組，但均在本實(shí)驗(yàn)室正常參考值范圍內(nèi)，故無(wú)生物學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表10。

表10 和輝膠囊對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響Table 10 The effect of Hehui capsules on the biochemical indicators of rats(1)（±s，n=10）

表10 和輝膠囊對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響Table 10 The effect of Hehui capsules on the biochemical indicators of rats(1)（±s，n=10）

性別 劑量/(g/kg?bw) 谷丙轉(zhuǎn)氨酶/(U/L) 谷草轉(zhuǎn)氨酶/(U/L) 白蛋白/(g/L) 總蛋白/(g/L) 白/球陰性對(duì)照 30.15±5.46 195.40±37.62 34.40±2.42 71.32±4.11 0.94±0.08雌性4.80 33.11±8.50 167.80±12.52 34.50±1.40 71.02±3.15 0.94±0.07 2.40 31.50±12.50 176.70±39.74 34.59±2.39 71.70±4.94 0.95±0.05 1.20 34.03±7.72 184.80±21.09 34.82±1.14 71.75±2.66 0.96±0.05雄性陰性對(duì)照 33.91±5.80 198.60±23.66 33.00±1.27 66.61±1.12 1.00±0.07 4.80 34.18±7.67 206.50±17.92 31.93±1.21 64.38±1.62 0.97±0.05 2.40 39.87±8.82 222.80±28.40 31.42±2.09 64.97±2.82 0.93±0.10 1.20 42.39±10.47 204.90±20.20 31.99±2.18 64.90±2.85 0.97±0.08性別 劑量/(g/kg?bw) 尿素氮/(mmol/L) 肌酐/(μmol/L) 血糖/(mmol/L) 總膽固醇/(mmol/L)甘油三酯/(mmol/L)雌性 陰性對(duì)照 6.61±0.72 50.54±2.50 3.44±0.63 2.06±0.35 1.22±0.34 4.80 6.71±1.06 51.84±4.50 3.63±0.63 1.82±0.27 1.44±0.34

注：與陰性對(duì)照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。

2.3.5 病理學(xué)大體解剖觀察檢查

各組大鼠肝臟、腎臟、胃和脾臟的大體檢查結(jié)果均正常，病理組織學(xué)檢查也未見(jiàn)明顯的病理改變。2.3.5.1 對(duì)大鼠臟器重量的影響

與陰性對(duì)照組相比，受試物各劑量組大鼠臟器重量均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊對(duì)大鼠臟器重量無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表11。

表11 和輝膠囊對(duì)大鼠臟器重量的影響Table 11 The effect of Hehui capsules on the organ weight of rats（±s，n=10）

表11 和輝膠囊對(duì)大鼠臟器重量的影響Table 11 The effect of Hehui capsules on the organ weight of rats（±s，n=10）

性別 劑量/(g/kg·bw) 空腹重/g 肝重/g陰性對(duì)照 189.33±9.68 6.18±0.70雌性4.80 193.05±7.38 6.62±0.48 2.40 186.05±6.36 6.20±0.44 1.20 189.48±4.50 6.22±0.41雄性陰性對(duì)照 268.61±19.10 8.60±0.84 4.80 255.52±14.73 8.16±0.63 2.40 259.91±9.59 7.91±0.34 1.20 255.94±12.08 7.92±0.58腎重/g 脾重/g 1.52±0.12 0.50±0.08 1.56±0.08 0.48±0.04 1.53±0.11 0.47±0.09 1.55±0.10 0.45±0.09 2.39±0.17 0.72±0.13 2.21±0.20 0.68±0.10 2.24±0.15 0.69±0.11 2.26±0.32 0.61±0.13

2.3.5.2 對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響

與陰性對(duì)照組相比，受試物各劑量組大鼠臟器系數(shù)均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)果表明，和輝膠囊對(duì)大鼠臟器系數(shù)無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表12。

表12 和輝膠囊對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響（±s，n=10）Table 12 The effect for rats of organ coefficient by Hehui capsules (±s, n=10)

表12 和輝膠囊對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響（±s，n=10）Table 12 The effect for rats of organ coefficient by Hehui capsules (±s, n=10)

性別 劑量/(g/kg·bw) 肝臟系數(shù)/g陰性對(duì)照 3.26±0.26雌性4.80 3.43±0.22 2.40 3.33±0.16 1.20 3.28±0.22雄性陰性對(duì)照 3.20±0.26 4.80 3.19±0.19 2.40 3.04±0.10 1.20 3.10±0.23腎臟系數(shù)/g 脾臟系數(shù)/g 0.80±0.04 0.26±0.04 0.81±0.03 0.25±0.02 0.82±0.05 0.25±0.04 0.82±0.05 0.24±0.04 0.89±0.05 0.27±0.04 0.86±0.05 0.27±0.04 0.86±0.04 0.27±0.05 0.88±0.12 0.24±0.05

3 結(jié)論

為科學(xué)地評(píng)價(jià)和輝膠囊作為保健食品的安全性，本次試驗(yàn)中，對(duì)其進(jìn)行了大鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、3項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)和大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)。大鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示和輝膠囊對(duì)雌、雄大鼠急性經(jīng)口最大耐受劑量（MTD）均大于15.0 g/kg·bw，急性經(jīng)口毒性屬無(wú)毒級(jí)。Ames試驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)的摻入法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示和輝膠囊受試樣品各劑量組的回變菌落數(shù)均未出現(xiàn)超過(guò)對(duì)照組回變菌落數(shù)的2倍，且無(wú)劑量-反應(yīng)關(guān)系，Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性，表明和輝膠囊無(wú)致突變作用。小鼠骨髓微核試驗(yàn)和小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)的結(jié)果皆為陰性，表明和輝膠囊對(duì)哺乳動(dòng)物體細(xì)胞和生殖細(xì)胞無(wú)致染色體畸變和基因突變的作用。上述3項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)采用不同試驗(yàn)方法對(duì)和輝膠囊進(jìn)行了遺傳毒性檢測(cè)，結(jié)果均為陰性，表明該樣品無(wú)遺傳毒性。大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)中，在1.20、2.40和4.80 g/kg·bw劑量下(相當(dāng)于人體推薦量的25、50和100倍)，連服1個(gè)月，大鼠一般生理體征、行為、大小便和皮毛等均無(wú)異常，各臟器未見(jiàn)明顯的功能損害，體重和食物利用率指標(biāo)正常，血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，組織病理學(xué)檢查結(jié)果未見(jiàn)特異性病理改變。以上試驗(yàn)表明在本試驗(yàn)條件下口服和輝膠囊無(wú)明顯毒副作用。