紅磚茶的降血脂及抗氧化活性研究

鄭鵬程，劉盼盼，王勝鵬，曹丹，鄭琳，龔自明

（湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所,湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心果茶分中心,湖北省茶葉工程技術(shù)研究中心，湖北武漢 430064）

高脂血癥是以血漿中總膽固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)升高，高密度脂蛋白膽固醇（High density lipoproteincholesterol，HDL-C）降低為主要特征的一種血脂代謝紊亂狀態(tài)，是引發(fā)和加重動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、高血壓和心肌梗死等心腦血管疾病的主要危險(xiǎn)因素之一[1]。隨著物質(zhì)生活水平的提高，我國高脂血癥的發(fā)病率不斷上升，有統(tǒng)計(jì)表明，在我國15～69歲做過血脂檢查的人群中，高脂血癥者占30%以上[2]，其已成為我國主要健康問題之一。目前，高脂血癥在臨床上主要通過他汀類藥物治療，但該類化合物存在較嚴(yán)重的毒副作用，可能會(huì)導(dǎo)致甚于病癥的有害程度[3]。因此，醫(yī)學(xué)界提倡通過科學(xué)飲食預(yù)防和控制高血脂[4]，而尋找天然、副作用小、適應(yīng)性廣的輔助降脂物質(zhì)，是未來預(yù)防高脂血癥的方向。

茶葉作為一種健康飲品，含有多種天然活性成分，近年來，其輔助降血脂功效得到廣泛關(guān)注，研究表明，茶葉中茶多酚[5,6]、茶褐素[7]等活性物質(zhì)具有較好降血脂效果，對(duì)高脂血癥模型老鼠灌喂青磚茶[8]、茯磚茶[9]、普洱茶[10]、六堡茶[11]君山銀針茶[12]，亦有效較好的降脂功效。紅（米）磚茶[13]，由軋制紅碎片末茶、切碎紅毛茶、紅片茶等加工而成，中國特有，湖北特產(chǎn)，在產(chǎn)銷區(qū)，人們有飲用紅磚茶預(yù)防高血脂的習(xí)慣，但缺乏實(shí)驗(yàn)依據(jù)支撐。本研究參照《輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法》[14]中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)紅磚茶水提物輔助降血脂功效進(jìn)行分析，并探究其抗氧化能力，為后續(xù)紅磚茶在預(yù)防高脂血癥中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試樣品及前處理

樣品：紅磚茶（湖北趙李橋茶廠有限公司 2007年生產(chǎn)）。前處理：將紅磚茶粉碎后，準(zhǔn)確稱取 2 kg粉碎樣，按1:8茶水比（g:mL）加入沸水（100 ℃），保溫浸提30 min，每隔10 min攪拌一次，紗布粗濾，得濾液與濾渣，濾渣繼續(xù)加入沸水（按1:7茶水比），保溫浸提20 min，中間攪拌一次，紗布粗濾，合并濾液，濾紙精濾，減壓濃縮至原體積的20%，于-20 ℃預(yù)凍后，冷凍干燥36 h，得茶粉426 g，得率為21.30%，密封包裝，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要儀器與試劑

旋轉(zhuǎn)濃縮儀，上海亞榮；冷凍干燥機(jī)，江蘇新申寶；SpectraMax M2全能酶聯(lián)儀，美國 Molecular Devices/MD公司；離心機(jī)，德國Eppendorf 5804R；解剖器械；TC、TG、LDL-C、HDL-C、MDA、SOD、GSH-Px試劑盒，北京中生生物工程高技術(shù)公司提供；膽固醇，天津博迪化工股份有限公司；膽酸鈉，上海如吉生技術(shù)有限公司；酪蛋白、磷酸氫鈣，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康成年雄性SD大鼠50只，體重為160～200 g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供（動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（鄂）2015-0018）。于華中科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施許可證號(hào)：SYXK（鄂）2010-0057）。環(huán)境溫度20～26 ℃，相對(duì)濕度40～70%。大鼠粉狀飼料由武漢市萬千佳興生物科技有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（鄂）2011-0011。

1.4 劑量選擇與受試物給予方式

紅磚茶人體推薦量，成人60 kg每日飲用10 g干茶，即 166.67 mg/(kg·d)。換算成凍干茶粉劑量=166.7×21.30%（得率）=35.50 mg/(kg·d)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中低、中、高劑量組分別按人體推薦量的2.5倍（88.75 mg/(kg·d)）、5 倍（177.50 mg/(kg·d)大鼠與人的等效劑量）、10 倍（355.00 mg/(kg·d)）。

各劑量組受試物均當(dāng)天新鮮配制，方式如下：（1）10倍劑量組：稱取3550 mg茶粉加蒸餾水定容至100 mL；（2）5倍劑量組：取50 mL上述10倍劑量組受試物加蒸餾水定容至100 mL；（3）2.5倍劑量組：取50 mL上述 5倍劑量組受試物加蒸餾水定容至 100 mL。大鼠灌胃量10 mL/kg·bw，樣品空白對(duì)照組和模型對(duì)照組同時(shí)給予同體積的純水。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

采用混合型高脂血癥動(dòng)物模型法，大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)維持飼料5 d后，按體重隨機(jī)分成2組，10只大鼠給予維持飼料作為空白對(duì)照組，40只給予高脂飼料作為模型對(duì)照組。高脂飼料配方為：蔗糖20%、豬油15%、膽固醇1.20%、膽酸鈉0.20%、酪蛋白9.40%、磷酸氫鈣1.72%、維持飼料52.48%。模型對(duì)照組給予模型飼料2周后，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組大鼠不禁食尾部采血，采血后立即分離血清，測(cè)定血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平。根據(jù)TC水平將模型對(duì)照組隨機(jī)分成4組，分別為模型對(duì)照組、樣品低、中、高劑量組。分組后，空白對(duì)照組繼續(xù)給予維持飼料，模型對(duì)照組及三個(gè)劑量組繼續(xù)給予模型飼料。試驗(yàn)期間，各組大鼠自由進(jìn)食和飲水，每周稱體重1次并結(jié)算進(jìn)食量。各組大鼠連續(xù)灌胃30 d后，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物：測(cè)定肝臟重量計(jì)算肝體比，測(cè)定血清生化指標(biāo)（總膽固醇 TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白膽固醇HDL-C、低密度脂蛋白膽固醇 LDL-C），取肝臟測(cè)定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用方差分析SNK檢驗(yàn)（方差齊時(shí)）及DunnettT3檢驗(yàn)（方差不齊時(shí)）分析（SPSS 19.0軟件）。

1.7 判定規(guī)則[14]

（1）各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低，且任一劑量組血清甘油三酯降低，差異均有顯著性，同時(shí)各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品輔助降低血脂功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。（2）各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低，差異均有顯著性，同時(shí)各劑量組血清甘油三酯不顯著高于模型對(duì)照組，各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品輔助降低血清膽固醇功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。（3）各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清甘油三酯降低，差異均有顯著性，同時(shí)各劑量組血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇不顯著高于模型對(duì)照組，血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品輔助降低血清甘油三酯功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 高血脂模型建立

圖1 造模2周時(shí)空白組與模型組大鼠血清生化指標(biāo)Fig.1 The Serum biochemical indexes of rats in control group and model groups at the end of two weeks

圖2 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)空白組與模型組大鼠血清生化指標(biāo)Fig.2 The Serum biochemical indexes of rats in control groupl and model groups at the end of the experiment

模型組采用高脂飼料喂養(yǎng)2周，與空白對(duì)照相比（如圖1所示），血清TG和TC極顯著升高（p<0.01），HDL-C顯著降低（p<0.05），模型組大鼠呈現(xiàn)高脂血癥；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型對(duì)照組（圖2所示）血清TC極顯著升高（p<0.01），血清TG和LDL-C顯著升高（p<0.05），HDL-C顯著降低（p<0.05），模型對(duì)照組大鼠持續(xù)呈現(xiàn)高脂血癥。因此，本實(shí)驗(yàn)高脂血癥大鼠模型成立。

2.2 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠血清生化指標(biāo)影響

紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠血清生化指標(biāo)的影響如表1所示。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與模型對(duì)照組相比，血清TG濃度，中、高劑量組呈極顯著下降（p<0.01），分別降低了35.47%、35.30%，說明這兩個(gè)劑量組具有較好降甘油三酯功效，低劑量組無顯著性差異；TC濃度，3個(gè)劑量與模型對(duì)照組均無顯著性差異；HDL-C濃度，中劑量組顯著升高（p<0.05），上升了 20.00%，低、高劑量組無顯著性差異；LDL-C濃度，高劑量組顯著降低（p<0.05），降低了 21.03%，低、中劑量組無顯著性差異。

表1 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠血清生化指標(biāo)影響的影響（ˉX±SD，n=10，mmol/L）Table 1 Effects of Hongzhuan tea extracts on serum biochemical indexes of hyperlipidemia rats (ˉX±SD, n=10, mmol/L)

2.3 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠肝勻漿抗氧化性影響

紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠肝勻漿抗氧化性的影響如表2所示，與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠肝勻漿中超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的水平顯著降低（p<0.05），丙二醛（MDA）濃度顯著升高（p<0.05）。

與模型對(duì)照組相比，3個(gè)劑量組大鼠肝臟中丙二醛（MDA）水平均顯著下降（p<0.05）；SOD水平，中、高劑量組顯著升高（p<0.05），低劑量組雖有一定程度升高，但差異不顯著；GSH-PX水平，中、高劑量組呈極顯著升高（p<0.01），分別提高了 65.01%、41.41%，低劑量組差異不顯著。

2.4 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠體重的影響

二次分組時(shí)，各組大鼠體重均一，無顯著差異，紅磚茶水提物對(duì)大鼠的體重影響如表3所示，模型對(duì)照組與空白組各期大鼠體重雖無顯著性差異，但其凈增重極顯著高于空白組，表明本實(shí)驗(yàn)所采用的高脂飼料能在一定程度上增加了大鼠的體重。劑量組與模型對(duì)照組比較，總重方面，各組間均無顯著性差異；凈增重方面，中、高劑量組增重均顯著低于模型對(duì)照組，低劑量組增重亦低于模型對(duì)照組，但差異不顯著。表明中、高劑量組紅磚茶水提物能在一定程度上減輕高脂大鼠的體重。

表2 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠肝勻漿抗氧化性影響（ˉX±SD，n=10，mmol/L）Table 2 Effects of Hongzhuan tea extracts on antioxidant activity of liver homogenate in hyperlipidemia rats (ˉX±SD, n=10, mmol/L)

表3 紅磚茶水提物對(duì)高脂血癥大鼠體重影響（ˉX±SD，n=10，g）Table 3 Effects of Hongzhuan tea extracts on body weight of hyperlipidemia rats (ˉX±SD, n=10, g)

3 討論

人們對(duì)六大茶類中的黑茶的輔助降血脂效果[8～11]關(guān)注較多，有研究認(rèn)為黑茶獨(dú)特的渥堆發(fā)酵工程過程中產(chǎn)生的以茶褐素為主的一類多聚物是降脂功效的關(guān)鍵物質(zhì)[7]。本研究中所采用的紅磚茶，其屬于紅茶類，內(nèi)含物質(zhì)組成與黑茶有一定的差異，但實(shí)驗(yàn)表明其水提物亦具有較好的輔助降脂功效，至于其中哪些具體成分發(fā)揮關(guān)鍵降脂作用、以及其降脂機(jī)理，則仍需進(jìn)一步的研究。

有研究表明，大鼠在高脂飲食狀態(tài)下，可以導(dǎo)致體內(nèi)嚴(yán)重的氧化與抗氧化的失衡，產(chǎn)生大量的自由基，引起脂質(zhì)過氧化，干擾機(jī)體正常的代謝活動(dòng)[15,16]。SOD和GSH-PX則是機(jī)體重要的抗氧化酶，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡具有至關(guān)重要的作用，其活性的高低可間接反映機(jī)體對(duì)氧自由基的清除能力[17]，在本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠與空白組相比較，SOD和GSH-PX活力顯著降低，表明高脂血癥大鼠機(jī)體肝組織正常的抗氧化能力受到抑制；3個(gè)紅磚茶劑量組與模型組相比較，中、高劑量組 SOD活力顯著提升，中、高劑量組GSH-PX活力極顯著提升，表明中、高劑量組紅磚茶水提物可提升高脂大鼠體內(nèi)抗氧化水平，低劑量組SOD和GSH-PX活力雖也有一定程度的升高，但差異不顯著，其是否與劑量相關(guān)，則需要進(jìn)一步研究。MDA是脂質(zhì)過氧化物最終產(chǎn)物，其含量的高低可以間接反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)的過氧化程度[18]。本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠與空白組相比較，MDA水平顯著提高，表明高脂大鼠體內(nèi)產(chǎn)生大量的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，這與模型組抗氧化酶系水平顯著降低相對(duì)應(yīng)；3個(gè)紅磚茶劑量組與模型組相比較，MDA水平均顯著降低，表明灌胃紅磚茶水提物能顯著降低高脂大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平，這可能與劑量組有效提升了機(jī)體內(nèi) SOD和GSH-PX水平相關(guān)，從而一定程度上抑制了機(jī)體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)發(fā)生。高脂、高熱量的食物是造成肥胖的主要原因之一[19]。本實(shí)驗(yàn)中，中、高劑量組大鼠增重顯著低于模型對(duì)照組，提示紅磚茶水提物在抑制高脂大鼠增重方面具有一定的潛力。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)在高脂血癥動(dòng)物模型構(gòu)建成功的基礎(chǔ)上，3個(gè)紅磚茶水提物劑量組與模型對(duì)照組相比，血清 TG濃度，中、高劑量組極顯著降低；血清 TC濃度，3個(gè)劑量組均無顯著差異；血清中 HDL-C濃度，中劑量組顯著升高；血清中LDL-C濃度，高劑量組顯著降低。依據(jù)《輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法》中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法判定規(guī)則，提示紅磚茶水提物輔助降低血脂功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性；輔助降低血清膽固醇功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性；輔助降低血清甘油三酯功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。