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    黑色素抗原C1、C2在乳腺癌組織中的表達及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

    2018-07-10 11:22:12楊淑改李曉燕周勇
    山東醫(yī)藥 2018年22期
    關(guān)鍵詞:著色陰性乳腺癌

    楊淑改,李曉燕,周勇

    (1 平頂山學(xué)院,河南平頂山 467000;2平頂山市第二人民醫(yī)院;3新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院)

    目前,臨床上對于乳腺癌的致病原因及具體發(fā)病機制尚未完全闡明,但關(guān)于其治療仍是當(dāng)前腫瘤免疫學(xué)研究的熱點之一[1]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷進步和發(fā)展,多種乳腺癌的治療方案逐漸被人們所認識。研究[2,3]發(fā)現(xiàn),不同臨床特征的乳腺癌患者采取相應(yīng)的治療后可出現(xiàn)不同的預(yù)后。黑色素抗原基因(MAGE)多存在于正常人群的睪丸組織中[4]。有研究[5,6]發(fā)現(xiàn),MAGE在多種惡性腫瘤組織中高表達。MAGE-C1與MAGE-C2是MAGE家族中常見的兩種類型,與多種惡性腫瘤的發(fā)生和進展有關(guān),但關(guān)于其與乳腺癌的關(guān)系尚未見明確報道。本研究回顧性分析84例乳腺癌患者的臨床及隨訪資料,旨在探討MAGE-C1與MAGE-C2在乳腺癌組織中的表達及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

    1 資料與方法

    1.1臨床資料選取我院2008年5月~2012年5月收治的84例乳腺癌患者作為研究對象,患者均為女性,年齡35~70(52.36±9.42)歲?;颊呔邮苁中g(shù)治療,術(shù)中收集切取的乳腺癌癌變組織84例作為觀察組,并在手術(shù)過程中收集相應(yīng)距離癌組織邊緣5 cm以上且外觀正常的組織為對照組。按照1997年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)中乳腺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[7],Ⅰ期14例、Ⅱ期48例、Ⅲ期22例。按照全國乳腺癌專業(yè)會議制定的病理分類方案[8],浸潤性導(dǎo)管癌46例、浸潤性小葉癌22例、乳腺髓樣癌16例。雌激素受體(ER)表達陰性52例、陽性32例,孕激素受體(PR)表達陰性58例、陽性26例,人類表皮生長因子受體2(HER2)表達陰性60例、陽性24例。納入標(biāo)準(zhǔn):符合2004年世界衛(wèi)生組織(WHO)制定的乳腺癌明確診斷標(biāo)準(zhǔn)[9];在完善術(shù)前準(zhǔn)備后行手術(shù)治療且術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)檢查證實;本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn);所有患者知情同意本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):存在嚴重肝腎功能不全者;除去乳腺癌外存在其他乳腺疾病及其他惡性腫瘤者;臨床及隨訪資料不完整者。

    1.2MAGE-C1、MAGE-C2檢測方法①MAGE-C1、MAGE-C2蛋白檢測。將所有組織標(biāo)本制成石蠟切片,按SP免疫組化試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)說明書所述的操作方法檢測MAGE-C1和MAGE-C2蛋白的表達。顯微鏡下觀察細胞染色棕黃色者為陽性,呈顆粒狀或片狀,位于胞質(zhì)與胞膜[12,13]。參考Thaker依照細胞著色密度和著色強度建立以下半定量評分方法。計數(shù)5個高倍視野,每例切片至少評價1 000個腫瘤細胞。依陽性細胞著色密度:陽性細胞百分數(shù)為0~5%時為0分,>5%~50%為2分,>50%為3分。依陽性細胞著色強度:陰性為0分,輕度著色為1分,中度著色為2分,強染色為3分。將兩者相加,0分及著色細胞百分數(shù)≤5%為陰性,1~6分為陽性。②MAGE-C1、MAGE-C2 mRNA檢測[11]。取2組組織,提取總RNA,合成cDNA,采用文獻[10]設(shè)計引物序列擴增PCR。取RT-PCR擴增產(chǎn)物5 μL和溴酚藍上樣緩沖液2 μL,混合后上樣于2%的瓊脂糖凝膠(0.5 μg/mL溴化乙錠染色)加樣孔中,80 V電泳30 min,紫外透射反射儀下觀察條帶,凝膠圖像分析儀對目的基因(MAGE-C1與MAGE-C2)及內(nèi)參照基因(GAPDH)進行積分吸光度分析并攝像。對比DNA Marker,擴增出221 bp和325 bp的條帶為陽性表達,內(nèi)參照基因為101 bp條帶。MAGE-C1/GAPDH和MAGE-C2/GAPDH分別代表MAGE-C1和MAGE-C2 mRNA的相對表達量。

    1.3預(yù)后隨訪方法所有患者出院后通過門診或電話等隨訪5年,隨訪終點為2017年5月30日或患者死亡。

    2 結(jié)果

    2.12組MAGE-C1、MAGE-C2表達比較觀察組、對照組MAGE-C1 mRNA相對表達量分別為3.64±1.34、0.14±0.02,蛋白表達陽性分別為54、8例,兩組相比P均<0.01。觀察組、對照組MAGE-C2 mRNA相對表達量分別為3.50±1.30、0.10±0.01,蛋白表達陽性分別為50、6例,兩組相比P均<0.01。

    2.2不同臨床病理特征乳腺癌患者MAGE-C1、MAGE-C2蛋白表達比較見表1。

    表1 不同臨床病理特征的乳腺癌患者MAGE-C1、MAGE-C2蛋白表達比較(例)

    2.3乳腺癌患者預(yù)后生存情況84例乳腺癌患者中,自出院至隨訪結(jié)束生存時間為1~54個月,中位生存時間為48.68個月,出院后1年生存率為94.05%(79/84),3年生存率為89.29%(75/84),5年生存率為78.57%(66/84)。

    2.4MAGE-C1、MAGE-C2與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系MAGE-C1陰性和陽性患者5年總生存率分別為93.33%(28/30)、70.37%(38/54),MAGE-C2陰性和陽性患者5年總生存率分別為88.24%(30/34)、72.00%(36/50),兩者相比P均<0.05。非條件單因素Cox比例風(fēng)險回歸模型分析結(jié)果顯示,臨床分期為Ⅲ期、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、MAGE-C1陽性、MAGE-C2陽性的乳腺癌患者生存時間短(P均<0.05),見表2。多因素Cox比例風(fēng)險回歸模型分析結(jié)果顯示,臨床分期為Ⅲ期、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、MAGE-C1陽性、MAGE-C2陽性為影響乳腺癌患者預(yù)后的獨立危險因素(P均<0.05),見表3。

    表2 不同臨床病理特征乳腺癌患者生存時間比較(月)

    3 討論

    相關(guān)調(diào)查研究顯示,乳腺癌在女性人群發(fā)病率高,且好發(fā)于絕經(jīng)期前后婦女,預(yù)后較差,嚴重影響患者的身體健康和生活質(zhì)量[14,15]。目前,臨床上治療乳腺癌的主要有效手段為手術(shù)切除治療,但有研究發(fā)現(xiàn),單純手術(shù)治療難以解決患者術(shù)后的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等問題[16]。而除去治療方案外,有學(xué)者認為機體相關(guān)細胞因子和基因的表達與術(shù)后治療效果及預(yù)后有著密不可分的關(guān)系,故尋找影響乳腺癌患者病情進展和預(yù)后的相關(guān)因素并及時予以干預(yù)是改善乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)鍵[17,18]。

    MAGE-C1與MAGE-C2均屬于腫瘤睪丸抗原(CTA)中的成員,屬于兩種較為新型的腫瘤標(biāo)志物,其在正常人體僅存在于睪丸和胎盤組織中[19]。有文獻報道,MAGE-C1與MAGE-C2最初被發(fā)現(xiàn)在黑色素瘤細胞中,后不少國內(nèi)外研究證實其在多種腫瘤細胞中均呈較高水平表達[20]。本研究結(jié)果顯示,觀察組MAGE-C1、MAGE-C2 mRNA表達水平及蛋白陽性表達例數(shù)均高于對照組,結(jié)果符合既往報道。本研究結(jié)果還顯示,臨床分期為Ⅲ期、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及ER和HER2為陽性的乳腺癌患者MAGE-C1與MAGE-C2的陽性表達率高。提示MAGE-C1與MAGE-C2在機體中的表達水平與乳腺癌發(fā)生和疾病進展有著密切聯(lián)系。目前,臨床上對于MAGE-C1與MAGE-C2在腫瘤細胞中表達的確切機制尚未完全闡明,但有研究表明,人類體細胞中MAGE基因高度甲基化,而在胚胎細胞和惡性腫瘤細胞中則可能發(fā)生去甲基化而獲得表達[21];除此之外,MAGE-C1與MAGE-C2在瘤細胞的胞質(zhì)內(nèi)被降解成九肽或十肽,然后作為抗原表位,與細胞內(nèi)HLA分子結(jié)合后呈遞到細胞膜,從而誘導(dǎo)機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)抗體。Zhang等[22]給黑色素瘤患者接種MAGE抗原肽和Sadanaga等[23]采用MAGE抗原肽刺激DCs治療胃腸癌均具有一定的臨床效果。有研究[24]顯示,當(dāng)MAGE-A11在機體中呈現(xiàn)高水平表達時,可一定程度促進前列腺癌的發(fā)生,更進一步提示MAGE與腫瘤有相關(guān)性。有研究發(fā)現(xiàn),HER2與乳腺癌的發(fā)生和疾病進展及預(yù)后有一定的聯(lián)系,HER2陽性表達提示乳腺癌患者預(yù)后不良[25]。本研究發(fā)現(xiàn),臨床分期為Ⅲ期、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、MAGE-C1陽性、MAGE-C2陽性患者生存時間短,表明MAGE-C1與MAGE-C2陽性與乳腺癌患者預(yù)后有著一定的聯(lián)系。進一步多因素Cox比例風(fēng)險回歸模型分析發(fā)現(xiàn),臨床分期為Ⅲ期、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及MAGE-C1陽性、MAGE-C2陽性均為影響乳腺癌患者預(yù)后的獨

    表3 影響乳腺癌患者預(yù)后的多因素分析

    立危險因素??梢?,MAGE-C1與MAGE-C2在乳腺癌的發(fā)生、進展以及預(yù)后中起著重要的作用,可作為臨床上評估乳腺癌患者預(yù)后的有效指標(biāo)。

    綜上所述,MAGE-C1與MAGE-C2在乳腺癌組織中高表達,臨床分期為Ⅲ期、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及ER和HER2為陽性時其均高表達,表達陽性者預(yù)后均不良。但本組研究所選樣本含量過小及研究時間過短,對于MAGE-C1與MAGE-C2的表達是否受其他因素影響尚未明確,可加大樣本量和延長研究時間進一步深入探討。

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