Cu2+脅迫下花斑裸鯉IL-8基因的組織表達(dá)分析

栗瑞紅，韓步鷹，張 霞，王玉晴，馬 睿，吳 君，王國(guó)杰，王振吉，李長(zhǎng)忠*

(1.青海大學(xué) 生態(tài)環(huán)境工程學(xué)院，青海 西寧 810016；2 青海省漁業(yè)環(huán)境監(jiān)測(cè)站，青海 西寧 810012)

花斑裸鯉(Gymnocypriseckloni)又稱(chēng)大嘴魚(yú)，鯉科(Cyprinidae)裂腹魚(yú)亞科(Schizothoracinae)裸鯉屬(Gymnocypris)。是我國(guó)黃河上游特有的土著魚(yú)類(lèi)，在高原淡水生態(tài)系統(tǒng)的食物鏈中具有重要的地位，也是我國(guó)重要的水生野生動(dòng)物種質(zhì)資源?；ò呗沲幠壳暗难芯恐饕性谠谙到y(tǒng)發(fā)育和起源、遺傳多樣性、人工繁育和馴化養(yǎng)殖、胚胎發(fā)育以及生物學(xué)特性等方面[1-2]?；ò呗沲庨L(zhǎng)期生存在無(wú)污染的天然水體中，對(duì)于重金屬脅迫的敏感性尚不明了，重金屬污染對(duì)花斑裸鯉的潛在危害和風(fēng)險(xiǎn)需要系統(tǒng)評(píng)估。本試驗(yàn)以花斑裸鯉為研究對(duì)象，通過(guò)白細(xì)胞介素-8(interleukin 8，IL-8)對(duì)Cu2+脅迫下不同組織的應(yīng)答特點(diǎn)來(lái)篩選重金屬脅迫下生物標(biāo)記物，以期對(duì)環(huán)境中水體污染進(jìn)行早期預(yù)警，實(shí)現(xiàn)水體生態(tài)環(huán)境和土著魚(yú)類(lèi)資源的保護(hù)。IL-8是第一個(gè)在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的能夠趨化中性粒細(xì)胞的細(xì)胞因子[3]。它的氨基酸序列被分為CXC，CC，C和CX3C四個(gè)亞型[4-5]。IL-8蛋白在促進(jìn)細(xì)胞遷移、炎癥發(fā)生和引發(fā)呼吸爆發(fā)等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[6-9]。目前，IL-8基因在褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)[10]、七鰓鰻(Lampetrafluviatilis)[11]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[12]、鯉(Cyprinuscarpio)[13]等魚(yú)類(lèi)中被克隆，而對(duì)IL-8的重金屬脅迫應(yīng)答方面的研究較少。銅是魚(yú)類(lèi)所必需的微量元素之一，過(guò)量時(shí)依舊會(huì)損傷魚(yú)類(lèi)的神經(jīng)生理功能，破壞嗅覺(jué)器官的結(jié)構(gòu)以及內(nèi)分泌功能[14-15]。為了控制漁業(yè)水域水質(zhì)，防止水體生物受到污染，《國(guó)家漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》(GB11607-89)中規(guī)定水體中的銅濃度應(yīng)小于等于0.01 mg/L。

本研究克隆鑒定了花斑裸鯉GeIL-8基因，分析了GeIL-8在肝臟、腎臟、腦和鰓組織中的表達(dá)分布特點(diǎn)，并對(duì)花斑裸鯉在0.01 mg/L Cu2+脅迫下GeIL-8基因在各個(gè)組織中mRNA水平的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，分析Cu2+脅迫下GeIL-8的應(yīng)答模式，旨在為生物標(biāo)記物的篩選、水環(huán)境污染的早期預(yù)警以及花斑裸鯉的保護(hù)等奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 花斑裸鯉 2015年08月15日從青海省漁業(yè)環(huán)境監(jiān)測(cè)站隆務(wù)河口養(yǎng)殖場(chǎng)(青海，循化)取3齡期成體花斑裸鯉20尾，平均體長(zhǎng)為(20.3±2.5)cm，平均體質(zhì)量(90.1±10.5) g。試驗(yàn)在青海大學(xué)生態(tài)環(huán)境工程學(xué)院細(xì)胞遺傳實(shí)驗(yàn)室4個(gè)水族箱(480 mm×250 mm×455 mm)內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)開(kāi)始前，水族箱用0.5 ppm的高錳酸鉀(分析純)溶液浸泡30 min，然后用清水反復(fù)清洗確保無(wú)高錳酸鉀殘留?；ò呗沲庍\(yùn)回后，在水族箱內(nèi)暫養(yǎng)2周并每天正常投食以避免饑餓對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。養(yǎng)殖期間用水皆為曝氣2 d的自來(lái)水且每天更換1/3，試驗(yàn)期間用自動(dòng)增氧泵增氧保證溶氧量不低于6 mg/L。

1.1.2 試劑及儀器 總RNA提取試劑盒(DP419)，購(gòu)自天根生物試劑公司；瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒(D1200)，購(gòu)自索萊寶生物試劑公司；PrimeScriptTMⅡ1st strand cDNASynthesis Kit(6210A)、pMDTM19-T Vector Cloning Kit(6013)、3'Full RACE Core Set with PrimeScriptTM RTase試劑盒(6106)、SMARTer○RRACE 5'/3' Kit (634859)、Premix ExTaq酶，PrimeScriptTM RT reagent Kit(Perfect Real Time)(RR0370A)，均購(gòu)自TaKaRa公司；SYBR Green Supermix，購(gòu)自伯樂(lè)生物公司；大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，由上海生工生物有限公司提供，引物合成與序列測(cè)定也由該公司完成；Nano Drop 2000 RNA濃度測(cè)定儀，購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific公司，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(CFX96)，購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD公司。

1.2 Cu2+脅迫

參考國(guó)家漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)漁業(yè)水質(zhì)Cu2+質(zhì)量濃度小于等于0.01 mg/L的規(guī)定，本試驗(yàn)選取0.01 mg/L的Cu2+對(duì)花斑裸鯉進(jìn)行脅迫。挑取健康無(wú)傷病和規(guī)格相近的花斑裸鯉個(gè)體20尾，隨機(jī)均分為空白對(duì)照組和3個(gè)平行試驗(yàn)組，空白對(duì)照組正常飼養(yǎng)，試驗(yàn)組進(jìn)行Cu2+脅迫。在Cu2+脅迫的0，12，24和36 h時(shí)從各組隨機(jī)取樣3尾，將魚(yú)擊昏后擦去表面水漬，在冰上迅速剖取肝臟、鰓、腎和腦組織，液氮中迅速冷凍后置于-80 ℃冰箱中保存，待用。

1.3 總RNA提取與cDNA合成

使用總RNA提取試劑盒提取花斑裸鯉肝臟、鰓、腎和腦組織的總RNA，用1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性合格后，用Nano Drop 2000測(cè)定RNA濃度。利用Prime ScriptTMⅡ1st strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，并調(diào)整樣品總cDNA質(zhì)量濃度為100 ng/μL。

1.4 花斑裸鯉GeIL-8全長(zhǎng)序列的克隆

1.4.1 引物的設(shè)計(jì)與合成 根據(jù)GenBank中虹鱒魚(yú)(Oncorhynchus mykiss)、草魚(yú)(Ctenopharyngodon idella)、羅非魚(yú)(Oreochromis niloticus)等的IL-8基因保守序列(GenBank序列登錄號(hào)分別為： AAP42829.1、AER38413.1、ACU30057.1)，利用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)引物GeIL-8-F和GeIL-8-R(表1)。

1.4.2 編碼區(qū)片段的擴(kuò)增 以1.3中反轉(zhuǎn)錄的對(duì)照組花斑裸鯉鰓組織的cDNA為模板，分別利用GeIL-8-F和GeIL-8-R作為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得花斑裸鯉IL-8編碼區(qū)片段。PCR反應(yīng)體系為25 μL，其中，Premix ExTaq 12.5 μL，引物各1 μL(10 μmol/L)，cDNA模板1 μL(10 μmol/L)，加ddH2O補(bǔ)足25 μL。擴(kuò)增程序：95 ℃ 4 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。取20 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.2%瓊脂糖電泳，并用BIO-RAD凝膠成像系統(tǒng)拍照，切下目的片段，用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒進(jìn)行純化回收，回收產(chǎn)物保存于-20 ℃。

表1 引物名稱(chēng)及序列Table 1 Names and sequences of primers

利用pMDTM 19-T Vector Cloning Kit將目的DNA片段與載體pMD19-T進(jìn)行連接。將上述連接液轉(zhuǎn)入到50 μL DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，最終將培養(yǎng)液涂到含氨芐青霉素(AMP)的LB固體培養(yǎng)基上，利用藍(lán)白斑試驗(yàn)篩選陽(yáng)性克隆菌。用槍頭挑取陽(yáng)性白色克隆菌落，37 ℃下160 r/min震蕩培養(yǎng)12 h，菌液PCR后測(cè)序。

1.4.3 3'-UTR和5'-UTR的擴(kuò)增 用上述所獲得的GeIL-8部分編碼區(qū)片段，用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)5'RACE引物GeIL-8-5'F和3'RACE引物GeIL-8-5'R(表1)。用3'Full RACE Core Set with Prime ScriptTMRTase試劑盒反轉(zhuǎn)1.3中花斑裸鯉鰓組織總RNA，獲得3'-UTR cDNA模板。用SMARTer○RRACE 5'/3' Kit試劑盒反轉(zhuǎn)錄1.3中花斑裸鯉鰓組織總RNA獲得5'-UTR cDNA模板。分別以GeIL-8-5'F和GeIL-8-5'R為引物進(jìn)行3'-UTR和5'-UTR的擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系為25 μL，其中，Premix ExTaq 12.5 μL，引物 1 μL(10 μmol/L)，cDNA模板1 μL(10 μmol/L)，UPM 1 μL(10 μmol/L)，加ddH2O補(bǔ)足25 μL。擴(kuò)增程序：95 ℃ 4 min；95 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。按照1.4.2所述步驟進(jìn)行PCR產(chǎn)物電泳并回收5'-UTR和3'-UTR PCR目的基因片段，轉(zhuǎn)化、菌液PCR鑒定后測(cè)序。

1.4.4 GeIL-8全長(zhǎng)cDNA的獲得 將測(cè)序獲得的編碼區(qū)片段、3'-UTR和5'-UTR使用DNAMAN軟件進(jìn)行拼接，獲得GeIL-8全長(zhǎng)cDNA。根據(jù)GeIL-8全長(zhǎng)cDNA序列，分別在GeIL-8基因的5'和3' UTR設(shè)計(jì)引物GeIL-8-CF和GeIL-8-CR(表1)進(jìn)行confirm PCR。按照1.4.2所述步驟進(jìn)行PCR擴(kuò)增、電泳并回收擴(kuò)增目的基因片段，轉(zhuǎn)化、菌液PCR鑒定后測(cè)序并比對(duì)。

1.5 GeIL-8序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建

用ExPASY Protparam(Http://web.expasy.org/prot param/)軟件在線分析GeIL-8的蛋白性質(zhì)及結(jié)構(gòu)；運(yùn)用生物信息學(xué)軟件Alignment進(jìn)行不同物種IL-8序列的同源性比對(duì)；使用MEGA5軟件以鄰位相接法(Neighbor Joining，N-J)構(gòu)建不同物種的IL-8基因序列系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

1.6 GeIL-8在花斑裸鯉肝、腎、腦和鰓組織中的表達(dá)分布

按照GeIL-8基因全長(zhǎng)cDNA序列設(shè)計(jì)Real-time引物(表1)。利用PrimeScriptTMRT reagent Kit(Perfect Real Time)反轉(zhuǎn)1.3提取的花斑裸鯉各組織RNA作為模板，利用Real-time PCR檢測(cè)正常水平及Cu2+脅迫下GeIL-8在花斑裸鯉肝臟、腎臟、腦和鰓的表達(dá)情況。反應(yīng)體系為20 μL：包括SYBR Green Supermix 10 μL，上下游引物各0.5 μL(10 μmol/L)，模板cDNA 1 μL(10 μmol/L)，ddH2O 8 μL。反應(yīng)在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(CFX96)上進(jìn)行(購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD公司)，擴(kuò)增條件為95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)。被檢測(cè)組織的樣品分別來(lái)自3尾魚(yú)，每個(gè)樣品的IL-8基因和β-actin分別進(jìn)行3次重復(fù)，每尾魚(yú)的每個(gè)樣品分別檢測(cè)后取平均值。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

Real-time PCR所得的數(shù)據(jù)應(yīng)用2-△△Ct方法進(jìn)行相對(duì)定量分析，基因的相對(duì)表達(dá)水平用Excel、SPSS20.0和OriginPro 8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異性檢驗(yàn)采用單因素方差分析(Analysis of variance, ANOVA)，多重比較采用Student-Newman-Keuls。結(jié)果均以P<0.05作為顯著性判斷的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 花斑裸鯉GeIL-8全長(zhǎng)cDNA的克隆

根據(jù)GenBank中已知IL-8基因保守序列，通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得花斑裸鯉的IL-8的部分編碼區(qū)片段186 bp(圖1-A)，然后在此片段序列的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)5'RACE和3'RACE的引物，分別擴(kuò)增獲得GeIL-8的5'-UTR片段198 bp(圖1-B)和3'-UTR片段380 bp(圖1-C)。分別在該基因的5'和3' UTR設(shè)計(jì)引物，通過(guò)confirm PCR擴(kuò)增獲得GeIL-8全長(zhǎng)cDNA序列582 bp。擴(kuò)增獲得的編碼區(qū)片段、非編碼區(qū)序列和confirm PCR擴(kuò)增獲得的全長(zhǎng)cDNA序列，經(jīng)過(guò)測(cè)序、比對(duì)而確認(rèn)為GeIL-8基因序列。

2.2 GeIL-8序列特征分析

花斑裸鯉GeIL-8的全長(zhǎng)cDNA序列共582 bp，由45 bp的5'-UTR、240 bp的3'-UTR和297 bp的編碼區(qū)構(gòu)成，編碼98個(gè)氨基酸。用ExPASY Protparam軟件進(jìn)行在線分析，結(jié)果表明GeIL-8分子質(zhì)量為8.5 kDa，等電點(diǎn)(Isoelectric point，PI)為8.8，該蛋白包含4個(gè)保守的半胱氨酸，分別位于第34、36、60和77位氨基酸處，第34和36的半胱氨酸間存在一個(gè)精氨酸(Arg，R)，由此形成了CXC型趨化因子的特征結(jié)構(gòu)。3' UTR含有3個(gè)mRNA不穩(wěn)定信號(hào)(ATTTA)(圖2)。

2.3 花斑裸鯉GeIL-8的進(jìn)化分析

利用Alignment軟件進(jìn)行以下不同物種的IL-8序列的同源性比對(duì)。結(jié)果表明，花斑裸鯉GeIL-8基因序列與鯽魚(yú)(AGG11027.1)、草魚(yú)(AER38413.1)、虹鱒魚(yú)(AAP42829.1)、羅非魚(yú)(ACU30057.1)、牛(AEO13897.1)、綿羊(AGS44976.1)、家鴿(ABD49206.1)、原雞(ABD49203.2)、灰雁(ABD49205.1)的同源性分別為：87%、81%、 68%、51%、35%、34%、34%、31%、30%。經(jīng)分析表明本試驗(yàn)克隆的GeIL-8基因與其他物種的IL-8基因同源性較高，具有很高的保守性。

圖1 花斑裸鯉GeIL-8克隆結(jié)果Fig.1 The cloning result of Gymnocypris eckloni GeIL-8

圖2 GeIL-8 cDNA序列及其編碼的氨基酸序列Fig.2 The complete cDNA sequences and amino acid sequences of GeIL-8

使用MEGA5軟件以鄰位相接法(Neighbor Joining，N-J)構(gòu)建不同物種的IL-8基因序列系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果如圖3所示。由圖3可知，硬骨魚(yú)類(lèi)獨(dú)立聚成一支，其中花斑裸鯉與鯽魚(yú)遺傳距離最近，隨后是草魚(yú)、虹鱒魚(yú)等硬骨魚(yú)類(lèi)，與灰雁的遺傳距離最遠(yuǎn)。符合物種傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)和生化特征分類(lèi)進(jìn)化地位。

2.4 GeIL-8在花斑裸鯉各組織的表達(dá)分布特征

通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)正常狀態(tài)下花斑裸鯉GeIL-8在各個(gè)組織的表達(dá)量。結(jié)果(圖4)表明，GeIL-8基因在花斑裸鯉肝臟、腎臟、腦和鰓中均有表達(dá)，在肝中表達(dá)量最高，顯著高于其他組織(P<0.05)；其次是鰓，顯著高于腎和腦(P<0.05)；而在腎和腦中表達(dá)水平較低?；ò呗沲幵谥亟饘貱u2+脅迫下各組織中的mRNA水平在不同時(shí)間段間的表達(dá)模式(圖5)，結(jié)果顯示：在36 h內(nèi)花斑裸鯉各組織中GeIL-8 mRNA水平的表達(dá)總體表現(xiàn)為先升后降的趨勢(shì)，在12 h時(shí)即達(dá)到最大值，表達(dá)顯著(P<0.05)，隨后隨著脅迫時(shí)間的持續(xù)表達(dá)量逐漸下降。

3 討 論

本試驗(yàn)克隆得到的花斑裸鯉GeIL-8基因經(jīng)過(guò)氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，包含4個(gè)保守的半胱氨酸，第34和36的半胱氨酸間存在一個(gè)精氨酸，由此形成了CXC型趨化因子的特征結(jié)構(gòu)[16]。同源性分析表明，花斑裸鯉GeIL-8與其他魚(yú)類(lèi)的相似性達(dá)到80%以上，其中與鯽魚(yú)的相似性最高(87%)?；ò呗沲嶨eIL-8系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析將花斑裸鯉與硬骨魚(yú)類(lèi)的鯽魚(yú)、草魚(yú)、虹鱒魚(yú)、羅非魚(yú)聚在一個(gè)魚(yú)類(lèi)的分支上，這與條石鯛[17]、斑馬魚(yú)[18]和牙鲆[19]的分類(lèi)結(jié)果一致，也與傳統(tǒng)分類(lèi)學(xué)分類(lèi)結(jié)果一致。

圖3 基于IL-8基因的相關(guān)物種進(jìn)化分析Fig. 3 Evolutionary analysis of related species based on IL-8

圖4 GeIL-8在花斑裸鯉不同組織的mRNA表達(dá)分析Fig.4 Analysis of mRNA expression level of GeIL-8 in Gymnocypris eckloni different tissues

圖5 0.01mg/L Cu2+脅迫下GeIL-8在花斑裸鯉不同組織的mRNA水平表達(dá)分析Fig.5 Expression of GeIL-8 mRNA in Gymnocypris eckloni

Real-time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，GeIL-8基因在肝臟、腎臟、腦和鰓組織中均有表達(dá)，尤其在肝中表達(dá)量顯著高于其他組織(P<0.05)，其次是鰓，在腎臟和腦中表達(dá)水平較低。這與草魚(yú)[20]、虹鱒魚(yú)[21]研究的IL-8表達(dá)模式相似，進(jìn)一步表明IL-8在魚(yú)類(lèi)組織中CXC型的表達(dá)特點(diǎn)[22]。

對(duì)Cu2+脅迫下不同時(shí)間段花斑裸鯉GeIL-8在肝臟、鰓、腎和腦組織中的mRNA表達(dá)水平的結(jié)果顯示：在36 h內(nèi)花斑裸鯉各組織中GeIL-8 mRNA的表達(dá)水平總體表現(xiàn)為先升后降的趨勢(shì)，在12 h時(shí)達(dá)到最大值，差異顯著(P<0.05)，隨著脅迫時(shí)間的持續(xù)，表達(dá)量逐漸下降。Kim[23]的研究顯示，在重金屬脅迫下魚(yú)類(lèi)肝臟的表達(dá)量顯著升高，本研究結(jié)果與之相似，說(shuō)明肝臟作為魚(yú)類(lèi)最主要的代謝器官和最大的消化腺，參與體內(nèi)的消化、代謝、解毒及免疫等多種功能，而魚(yú)類(lèi)的鰓作為粘膜淋巴組織之一，在魚(yú)類(lèi)自身免疫中起重要作用。Kim等[23]研究表明，將虹鱒浸泡免疫后，鰓中會(huì)檢測(cè)到顆粒物質(zhì)的吸收。對(duì)硬骨魚(yú)免疫的研究顯示，在魚(yú)類(lèi)免疫細(xì)胞發(fā)生時(shí)，胸腺中最先檢測(cè)到T淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞在胸腺中發(fā)育成熟后被運(yùn)送到肝臟、頭、腎等外周免疫器官對(duì)抗原刺激產(chǎn)生應(yīng)答[24]。

Cu2+脅迫最初時(shí)期花斑裸鯉體內(nèi)IL-8表達(dá)量的升高，表明魚(yú)體對(duì)外界刺激產(chǎn)生炎性反應(yīng)而誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生大量IL-8，趨化外周血中的中性粒細(xì)胞到達(dá)受刺激部位，而IL-8又激活中性粒細(xì)胞表面的CXCR1和CXCR2刺激細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄因子，促使中性粒細(xì)胞增殖，通過(guò)這種信號(hào)通路的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)逐步延伸到后續(xù)反應(yīng)，到了12 h，各組織表達(dá)量明顯升高，進(jìn)一步證明了IL-8的促炎功能[25]；24 h后又有降低趨勢(shì)，說(shuō)明經(jīng)過(guò)一系列炎癥細(xì)胞的免疫應(yīng)激后，釋放治愈性的因子[26]，抑制了外界刺激的進(jìn)一步危害，到達(dá)恢復(fù)期。

花斑裸鯉在重金屬Cu2+脅迫下各個(gè)組織中GeIL-8 mRNA的表達(dá)水平表現(xiàn)出一定的規(guī)律性，表明IL-8參與了炎癥反應(yīng)，具有免疫調(diào)節(jié)功能。但其應(yīng)答模式的調(diào)控機(jī)理還需進(jìn)一步研究。本研究獲得花斑裸鯉GeIL-8 cDNA全長(zhǎng)序列、生物信息學(xué)特征、正常水平以及Cu2+脅迫下各個(gè)組織中GeIL-8的mRNA水平的應(yīng)答模式，有助于更加深入的理解GeIL-8的應(yīng)激應(yīng)答模式，為天然水體環(huán)境污染的早期預(yù)警、生物標(biāo)記物的篩選、應(yīng)激應(yīng)答模式研究及花斑裸鯉的保護(hù)等方面提供一定的理論依據(jù)。

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