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    糠秕馬拉色菌感染與尋常性銀屑病患者血清炎性因子的關(guān)系研究

    2018-07-02 07:55:28鄧國輝楊國良
    實(shí)用皮膚病學(xué)雜志 2018年1期
    關(guān)鍵詞:色菌馬拉銀屑病

    鄧國輝,楊國良

    尋常性銀屑病(psoriasis vulgaris,PV)為炎性、免疫性皮膚疾病。尋常性銀屑病病情遷延難愈,具有高復(fù)發(fā)性。白色鱗屑、發(fā)亮薄膜和點(diǎn)狀出血是診斷銀屑病的重要三聯(lián)征[1]。銀屑病發(fā)病機(jī)制尚不明確,有研究認(rèn)為多種炎性因子在皮損組織處大量聚集可能與尋常性銀屑病的發(fā)生有密切的關(guān)系[2]。近年有研究指出[3],真菌可作為交叉抗原或超抗原誘導(dǎo)銀屑病的發(fā)生及病情進(jìn)展,其中最常見的真菌為糠秕馬拉色菌(Malassezia furfur)。糠秕馬拉色菌為一種寄生在正常人體皮膚中的致病性酵母菌屬,當(dāng)宿主防御功能或皮膚微環(huán)境發(fā)生變化時(shí),其可大量繁殖并引起多種皮膚疾病。其致病機(jī)制源于菌體對(duì)細(xì)胞脂質(zhì)的分解,引起角質(zhì)形成導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變及凋亡。本研究應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)尋常性銀屑病患者血清中糠秕馬拉色菌特異性抗原,分析馬拉色菌特異性抗原與尋常性銀屑病患者血清炎性因子的關(guān)系,旨在探討尋常性銀屑病發(fā)病機(jī)制,為尋常性銀屑病的防治提供臨床資料。

    1 資料及方法

    1.1 臨床資料

    選擇2014年5月―2015年12月68例尋常性銀屑病患者為研究對(duì)象,其中男 36例,女32例,年齡22~78歲,平均(46.23±3.4)歲,病程1~15年,平均(9.8±1.2)年,進(jìn)展期28例,緩解期 40例;另選取同期在本院行體格檢查的35例健康體檢者作為對(duì)照組,男 20例,女15例,年齡18~68歲,平均(45.2±2.8)歲,兩組性別、年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),具有可比性。研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn):①研究對(duì)象均符合《臨床診療指南-皮膚與性病分冊(cè)》、《臨床操作指南-皮膚與性病分冊(cè)》及《中國銀屑病治療指南》中對(duì)尋常性銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。②所有患者納入研究前2個(gè)月未接受過糖皮質(zhì)激素、維A酸及免疫抑制劑等藥物治療;③所有研究對(duì)象近2個(gè)月未應(yīng)用過任何治療銀屑病的外用藥物;④所有研究對(duì)象均簽署知情同意書。

    1.2 方法

    1.2.1 儀器及試劑 ELISA分析儀(瑞士Tecan Fame ELISA系統(tǒng));超聲粉碎儀(北京祥鵠智能有限公司);紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);ELISA板(上海邦景實(shí)業(yè)有限公司);羊抗人IgG、IgA、IgM(美國sigma公司);IL-8試劑盒(北京伯樂生命科學(xué)發(fā)展有限公司),TNF-α試劑盒[通蔚試劑(上海)有限公司],SP試劑盒(上海研卉生物科技有限公司),糠秕馬拉色菌(菌株CBS7878,中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所提供)。

    1.2.2 糠秕馬拉色菌抗原制備 將糠秕馬拉色菌菌株分別接種培養(yǎng)4 d后,采用PBS沖洗液對(duì)培養(yǎng)樣本進(jìn)行沖洗,將懸浮物離心處理并去沉淀物。按0.5 mg/ml制成真菌懸液,并分裝于2個(gè)試管中,1個(gè)試管用于制備整菌抗原包被液,即為整菌抗原(Wag),1個(gè)試管在-20℃~37℃中反復(fù)冷融、加熱后采用超聲粉碎儀處理20 min,頻率為18 000 Hz,以3 000 r/min離心處理30 min,留取上清液即為可溶性抗原(Sag),采用紫外分光儀測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。

    1.2.3 血清炎性因子水平測(cè)定 研究對(duì)象空腹12 h抽取靜脈血3 ml,3 000 r/min離心處理后留取上清液待檢,采用ELISA法測(cè)定兩組尋常性銀屑病患者及對(duì)照組血清IL-8、TNF-α、SP,嚴(yán)格按試劑說明書操作,當(dāng)日質(zhì)控保證結(jié)果的有效性。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    計(jì)量資料指標(biāo)均進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn),符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多組計(jì)量資料樣本均數(shù)的比較方差分析,進(jìn)一步兩兩分析采用SNK法檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析,采用SPSS19.0軟件包進(jìn)行處理,以P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組尋常性銀屑病患者及對(duì)照組抗體水平對(duì)比

    3組抗Wag IgG水平、抗Sag IgM水平經(jīng)方差分析均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),組間兩兩比較經(jīng)SNK法分析,尋常性銀屑病進(jìn)展期組、尋常性銀屑病緩解期組及對(duì)照組抗Wag IgG水平依次降低,組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);尋常性銀屑病進(jìn)展組與尋常性銀屑病緩解組抗Sag IgM水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),尋常性銀屑病進(jìn)展組、尋常性銀屑病緩解組抗Sag IgM水平均低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);3組抗Wag IgA水平、抗Wag IgM水平、抗Sag IgG水平、抗Sag IgA水平經(jīng)方差分析均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表1。

    2.2 尋常性銀屑病患者及對(duì)照組血清炎性因子水平對(duì)比

    兩組尋常性銀屑病患者和對(duì)照組血清炎性因子IL-8、TNF-α及SP經(jīng)方差分析均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),組間兩兩比較經(jīng)SNK法分析比較,尋常性銀屑病進(jìn)展期、尋常性銀屑病緩解期及對(duì)照組IL-8、TNF-α及SP均依次降低,組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

    2.3 糠秕馬拉色菌抗體與尋常性銀屑病患者血清炎性因子的關(guān)系

    糠秕馬拉色菌抗體與尋常性銀屑病患者血清炎性因子經(jīng)Pearson相關(guān)性分析,抗Sag IgM水平、抗Wag IgG水平與血清IL-8、TNF-α、SP均呈正相關(guān)(P>0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表3。

    3 討論

    尋常性銀屑病為臨床常見的復(fù)發(fā)性皮膚病,分為尋常性、膿皰性、紅皮病性及關(guān)節(jié)病性4種類型,其中尋常性銀屑病占95%左右[5]。其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,有資料顯示近30%尋常性銀屑病患者具有家族遺傳性[6]。近年研究證明T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫異常與尋常性銀屑病的發(fā)病及病情進(jìn)展均有密切的關(guān)系[7,8]。微生物感染為機(jī)體免疫異常的重要誘因,正常寄生真菌誘發(fā)銀屑病引起了臨床的關(guān)注[9]。免疫抑制、溫度改變及潮濕等因素均可引起真菌菌相轉(zhuǎn)變,包括細(xì)胞表面抗原質(zhì)或量的改變,菌絲的形成,菌毒力因子的改變,菌相的變化同時(shí)也是真菌的致病機(jī)制之一。Aydogan等[10]研究發(fā)現(xiàn)尋常性銀屑病患者體內(nèi)存在抗馬拉色菌特異性IgG抗體。Gomez-Moyano等[11]研究也證明馬拉色菌PO100、PO120結(jié)合位點(diǎn)為細(xì)菌或真菌胞壁中的N-乙酰葡萄糖胺殘基(Glc-Nac)。李源等[12]研究進(jìn)一步顯示,抗Glc-Nac可與人角蛋白K14多肽產(chǎn)物結(jié)合,并生成K14蛋白。Honnavar等[13]發(fā)現(xiàn)在銀屑病患者血清K14水平顯著高于正常對(duì)照組。上述研究表明,糠秕馬拉色菌與皮膚組織自身抗原發(fā)生的交叉反應(yīng)與尋常性銀屑病發(fā)病及病情進(jìn)展過程關(guān)系密切??凤躐R拉色菌易引起皮膚淺表角質(zhì)層和毛囊感染,導(dǎo)致角質(zhì)層損傷,損傷皮膚的屏障功能,防御能力降低,在脂質(zhì)作用下更容易發(fā)生炎性反應(yīng)[14]。本研究結(jié)果顯示,尋常性銀屑病患者血清抗Sag IgM水平低于對(duì)照組,抗Wag IgG水平顯著高于對(duì)照組,分析原因可能為抗Sag IgM水平與抗Wag IgG水平相互發(fā)生交叉作用,導(dǎo)致病原菌細(xì)胞免疫發(fā)生異常,與銀屑病的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。

    表1 各組抗體水平比較 (±s,g/L)

    表1 各組抗體水平比較 (±s,g/L)

    注:PV:尋常性銀屑?。慌c對(duì)照組相比,aP<0.05;與緩解期值相比,bP<0.05

    PV進(jìn)展期組 28 0.563±0.122ab 0.122±0.05 0.069±0.02 0.725±0.112 0.105±0.052 0.098±0.012a PV緩解期組 40 0.412±0.121a 0.118±0.06 0.062±0.05 0.742±0.119 0.098±0.052 0.096±0.010a對(duì)照組 35 0.312±0.112 0.119±0.08 0.064±0.07 0.756±0.121 0.106±0.048 0.145±0.082 F值 6.232 0.114 0.122 0.118 0.118 7.856 P值 0.000 0.856 0.893 0.896 0.836 0.000

    表2 兩組尋常性銀屑病患者及對(duì)照組血清炎性因子水平比較 ( ±s,g/L)

    表2 兩組尋常性銀屑病患者及對(duì)照組血清炎性因子水平比較 ( ±s,g/L)

    注:PV:尋常性銀屑??;與對(duì)照組相比,aP<0.05;與緩解期組相比,bP<0.05

    PV進(jìn)展期組 28 256.36±48.25ab 18.22±3.25ab 312.85±32.56ab PV緩解期組 40 128.96±32.52a 7.98±2.45a 285.69±30.48a對(duì)照組 35 52.63± 7.98 4.98±1.46 148.52±22.45 F值 12.963 9.145 15.252 P值 0.000 0.000 0.000

    表3 糠秕馬拉色菌抗體與尋常性銀屑病患者血清炎性因子的關(guān)系

    本研究顯示,尋常性銀屑病進(jìn)展期、尋常性銀屑病緩解期及對(duì)照組血清炎性因子IL-8、TNF-α及SP均依次降低,組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。炎性因子網(wǎng)絡(luò)失衡在銀屑病發(fā)病過程中起到重要的作用,局部炎性細(xì)胞浸潤(rùn),促使血管細(xì)胞增殖,導(dǎo)致皮損形成[15]。IL-8、TNF-α是由T淋巴細(xì)胞及角質(zhì)形成細(xì)胞分泌,具有促使細(xì)胞增殖及角質(zhì)形成的作用。同時(shí)IL-8參與激活或趨化中性粒細(xì)胞,TNF-α可促進(jìn)血管新生[16]。TNF-α為先天性免疫炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子,對(duì)巨噬細(xì)胞及記憶性T淋巴細(xì)胞有強(qiáng)烈的誘導(dǎo)作用,T淋巴細(xì)胞功能異常引發(fā)皮膚表層角質(zhì)形成及細(xì)胞繼發(fā)性增殖過度也是尋常性銀屑病發(fā)病的關(guān)鍵所在。SP屬于神經(jīng)肽,可刺激角質(zhì)形成及促進(jìn)細(xì)胞增殖,調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),并引起皮膚瘙癢[17],尋常性銀屑病患者臨床癥狀及體征均與炎性因子的大量聚集關(guān)系密切。國外研究指出[18],IL-8、TNF-α、SP等炎性因子在尋常性銀屑病患者靜脈血清中及皮損組織中含量顯著高于正常人群,且與患者病情進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸有密切的關(guān)系。本研究結(jié)果也證實(shí),尋常性銀屑病患者中血清IL-8、TNF-α、SP水平顯著高于正常人群,且進(jìn)展期患者高于穩(wěn)定期患者,與上述觀點(diǎn)相符。本文研究數(shù)據(jù)提示炎性因子IL-8、TNF-α及SP在尋常性銀屑病患者皮損處存在高濃度聚集現(xiàn)象,炎性因子與尋常性銀屑病疾病的發(fā)生及進(jìn)程關(guān)系密切。Abdel-Hamid等[19]研究認(rèn)為,炎性因子的產(chǎn)生主要源自于皮損局部的異常分泌。但本研究結(jié)果顯示,血清IL-8、TNF-α、SP水平與糠秕馬拉色菌抗Sag IgM、抗Wag IgG水平呈正相關(guān),這提示尋常性銀屑病患者炎性因子的升高可能是由皮損意外的免疫細(xì)胞產(chǎn)生并在皮損處聚集的結(jié)果。同時(shí)研究數(shù)據(jù)也說明馬拉色菌感染可能會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能異常,并刺激炎性因子釋放,尋常性銀屑病患者機(jī)體免疫調(diào)節(jié)紊亂對(duì)尋常性銀屑病發(fā)病及防治均有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

    綜上所述,糠秕馬拉色菌感染可能與尋常性銀屑病的發(fā)病有著密切的關(guān)系,其作用機(jī)制可能與糠秕馬拉色菌感染后引起體液免疫異常,促使機(jī)體炎性因子釋放,使得炎性因子在皮損部位大量濃集有關(guān)。

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