高脂飼料中添加丙硫氧嘧啶對(duì)大鼠血脂、體質(zhì)量及體脂的影響

郝維佳 楊秋實(shí) 李靜宜, 2 馬 毅 陸 莉 熊 杰 李宇航 徐平湘 陳 怡 薛 明 李曉蓉*

(1.首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系，北京 100069；2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院 北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所 熱帶病防治研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

高脂血癥是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化、腦卒中、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(以下簡(jiǎn)稱冠心病)、心肌梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，也是促進(jìn)高血壓、糖尿病、脂肪肝等的重要危險(xiǎn)因素。多年來(lái)，高脂血癥病因、病理機(jī)制以及藥物開(kāi)發(fā)始終是研究的熱點(diǎn)。而理想的高脂血癥動(dòng)物模型是這些研究工作成功的基石，制備高脂血癥動(dòng)物模型有多種方法，其中最常用的方法是使用提高了能量和脂質(zhì)含量的高脂飼料，如加入植物油脂、動(dòng)物油脂、膽固醇等，誘發(fā)動(dòng)物高脂模型。此法簡(jiǎn)單易行，成本低廉，對(duì)動(dòng)物損傷小，應(yīng)用非常廣泛。但是飲食誘發(fā)的高脂模型常常需要數(shù)月時(shí)間，制作周期長(zhǎng)，且有時(shí)血脂升高程度不理想，因此在制作模型時(shí)研究者常會(huì)加入抗甲狀腺藥物——丙硫氧嘧啶作為工具藥，大幅度縮短成模時(shí)間和提高血脂濃度，因而添加丙硫氧嘧啶是常用的建模策略[1-2]。筆者曾對(duì)2011-2015年發(fā)表的使用高脂飼料的中文文獻(xiàn)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，其中使用丙硫氧嘧啶作為添加劑的文獻(xiàn)約占13%，說(shuō)明國(guó)內(nèi)使用這一方法的研究者較多[3]。但是作為抗甲狀腺藥，丙硫氧嘧啶協(xié)助升高血脂的同時(shí)帶來(lái)甲狀腺功能抑制的其他伴隨癥狀，例如體質(zhì)量下降、體脂降低、體質(zhì)下降以及脂質(zhì)代謝酶活性改變等，可能對(duì)合理分析高脂血癥的病理機(jī)制，以及對(duì)調(diào)脂藥物的藥效和作用機(jī)制的評(píng)價(jià)產(chǎn)生影響，尤其是體質(zhì)量、體脂等方面的影響非常容易被忽略，目前關(guān)于這方面的研究報(bào)道還比較少，本研究將系統(tǒng)探討丙硫氧嘧啶對(duì)飲食誘導(dǎo)的高脂模型大鼠的血脂及動(dòng)物采食量、體質(zhì)量和體脂的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠32只，雄性，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品和儀器

丙硫氧嘧啶(純度>99%)(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20140326)。全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)Dade Behring 公司)，光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司 BX41)，免疫分析儀(美國(guó)貝克曼公司DX1800)，萬(wàn)分之一電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)，2D5-2A型低速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)，Vortex-Genie2渦旋混合器(美國(guó)Scientific Industries公司)。K-Viewer數(shù)字病理解決方案軟件(寧波江豐生物信息技術(shù)有限公司)。

1.3 動(dòng)物分組及方法

所有動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d后，采用數(shù)字表法隨機(jī)分為4組[4]，分別為正常飼料組(control，Con)、正常飼料+丙硫氧嘧啶組(control+propylthiouracil，Con+PTU)、高脂飼料組(high fat diet，HFD)、高脂飼料+丙硫氧嘧啶組(high fat diet+propylthiouracil，HFD+PTU)。正常飼料為嚙齒類動(dòng)物正常維持料，高脂飼料為基礎(chǔ)飼料中添加10%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))豬油、2%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))膽固醇、0.3%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))膽鹽構(gòu)成。PTU劑量為 50 mg·kg-1·d-1，每日灌胃1次，連續(xù)4周。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每日測(cè)量動(dòng)物體質(zhì)量，并記錄采食量，實(shí)驗(yàn)結(jié)束日采用10%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))水合氯醛麻醉后準(zhǔn)確測(cè)量大鼠從鼻尖至肛門的長(zhǎng)度即體長(zhǎng)，并根據(jù)公式Lee’s 指數(shù)=體質(zhì)量(g)1/3×103/體長(zhǎng)(cm)計(jì)算Lee’s 指數(shù)[5-7]，腹主動(dòng)脈插管取血，靜置1 h，4 000 r/min，離心10 min，取血漿檢測(cè)血脂4項(xiàng)、血糖、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)和門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)，血漿三碘甲狀腺原氨酸(triiodothyronine，T3)、甲狀腺素(tetraiodothyrenine, T4)、游離T3(free T3, FT3)及游離T4(free T4, FT4)濃度，并且取肝臟、腎周脂肪和睪周脂肪，稱質(zhì)量計(jì)算肝系數(shù)和脂肪系數(shù)，多聚甲醛固定肝臟和脂肪組織，肝臟進(jìn)行HE和油紅O染色，脂肪組織進(jìn)行HE染色[8]。Image J軟件測(cè)量脂肪細(xì)胞面積(400×)，每份標(biāo)本測(cè)量10個(gè)視野[9-10]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

檢測(cè)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件,應(yīng)用析因設(shè)計(jì)方法對(duì)測(cè)量值進(jìn)行分析，采用SPSS中的General Linear ModelUnivariate模塊進(jìn)行分析。動(dòng)物體質(zhì)量和采食量數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，使用SPSS中General Linear ModelRepeated Measurement模塊進(jìn)行分析，兩兩比較用LSD法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2 結(jié)果

2.1 高脂飼料和丙硫氧嘧啶對(duì)大鼠血脂的影響

高脂飼料和丙硫氧嘧啶對(duì)大鼠血脂的影響結(jié)果詳見(jiàn)表1，正常飼料組血漿總膽固醇(total cholesterol, TC)為(1.51±0.29)mmol/L，HFD和PTU均具有升高血漿TC的作用(P<0.01)，HFD與PTU合用后血漿TC濃度更進(jìn)一步顯著升高，較單用HFD或PTU升高數(shù)倍，析因分析表明HFD和PTU之間的交互效應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，結(jié)合數(shù)據(jù)表明HFD和PTU有協(xié)同升高TC的作用。低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol, LDL-C)的變化趨勢(shì)與總膽固醇的變化趨勢(shì)一致，HFD和PTU均具有升高LDL-C濃度的作用，二者合用進(jìn)一步顯著升高LDL-C濃度，HFD和PTU的交互效應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，說(shuō)明添加PTU可加強(qiáng)高脂飼料誘導(dǎo)升高血漿LDL-C濃度的作用。給予HFD后血漿高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C) 濃度下降(P<0.05)，此特點(diǎn)與臨床常見(jiàn)的高脂血癥中血脂變化特征相似，而給予PTU后血漿HDL-C濃度升高，這一特征與高脂飼料引起的變化趨勢(shì)不一致，造成動(dòng)物模型中HDL-C濃度表現(xiàn)復(fù)雜多變，與臨床血脂變化常常不統(tǒng)一。各組之間的三酰甘油(triglycerides，TG)濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。總之，從上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，高脂飼料中添加PTU，可協(xié)同升高血漿中TC和LDL-C濃度，使動(dòng)物造模速度和幅度均提高。

GroupTCTGHDL-CLDL-CCon1.51±0.29 0.46±0.111.28±0.29 0.19±0.05 Con+PTU2.46±0.40**0.35±0.111.87±0.12*0.95±0.20**HFD2.36±0.21**0.46±0.140.96±0.06*1.52±0.21**HFD+PTU18.00±8.88**##0.61±0.323.57±0.87**##15.87±8.96**## *P<0.05, **P<0.01 vs Con; ##P<0.01 vs HFD; PTU:propylthiouracil; HFD:high fat diet;TC:total cholester-ol;TG:triglycerides;HDL-C:high density lipoprotein-cholesterol;LDL-C:low density lipoprotein-cholesterol; Con:control.

2.2 高脂飼料和丙硫氧嘧啶對(duì)大鼠血漿轉(zhuǎn)氨酶和血糖的影響

如表2所示，各組之間的ALT和AST濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，單獨(dú)給予HFD或與PTU合用誘導(dǎo)1個(gè)月并沒(méi)有造成血漿轉(zhuǎn)氨酶濃度顯著升高，提示誘導(dǎo)1個(gè)月并未造成明顯的肝細(xì)胞損傷。血糖檢測(cè)結(jié)果表明，僅給予PTU組血糖濃度下降，而HFD和HFD+PTU組的血糖濃度與正常組相當(dāng)。

GroupALT/(IU·L-1)AST/(IU·L-1)Glucose/(mmol·L-1)Con70.83±33.48139.77±81.4311.42±2.42Con+PTU47.17±13.0897.93±23.657.15±0.89**#HFD43.08±14.27215.77±118.4810.44±3.02HFD+PTU60.15±14.12100.47±55.5711.85±3.45 **P<0.01 vs Con;#P<0.05; PTU:propylthiouracil; HFD:high fat diet; ALT:alanine aminotransferase;AST:aspartate aminotransferase;Con:control.

2.3 高脂飼料和丙硫氧嘧啶對(duì)大鼠甲狀腺功能的影響

從表3可看出，單獨(dú)給予HFD對(duì)血漿T3、T4、FT3、FT4濃度沒(méi)有影響，而PTU可使甲狀腺素濃度下降尤其是T3、T4濃度(P<0.01)，析因分析表明HFD和PTU之間無(wú)交互作用。

2.4 高脂飼料和丙硫氧嘧啶對(duì)大鼠體質(zhì)量及采食量的影響

對(duì)各組大鼠體質(zhì)量數(shù)據(jù)應(yīng)用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)方差分析顯示, 時(shí)間因素有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001), 說(shuō)明動(dòng)物體質(zhì)量有隨時(shí)間變化的趨勢(shì)；但時(shí)間和飼料的交互作用沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 說(shuō)明時(shí)間因素的作用不隨著飼料的不同而不同，時(shí)間和PTU分組的交互作用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001), 說(shuō)明時(shí)間因素的作用隨著是否加入PTU的不同而不同。組間變異計(jì)算結(jié)果顯示，HFD處理因素?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PTU處理因素具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，提示PTU的有或無(wú)可造成動(dòng)物體質(zhì)量的不同。實(shí)驗(yàn)的最初幾天動(dòng)物體質(zhì)量勻速上升，且各組體質(zhì)量增長(zhǎng)趨勢(shì)相同，大約到第10天左右時(shí)，動(dòng)物體質(zhì)量增長(zhǎng)趨勢(shì)分化為含PTU和不含PTU兩類，不含PTU組動(dòng)物體質(zhì)量依然保持原有增長(zhǎng)速度，含有PTU組動(dòng)物體質(zhì)量不再繼續(xù)增長(zhǎng)，而是基本維持不變，繼而略有下降。在第10天時(shí)Con與Con+PTU組的體質(zhì)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第13天HFD與HFD+PTU組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這些差異越來(lái)越顯著，一直持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束(圖1)。

GroupT3/(ng·dL-1)T4/(ng·mL-1)FT3/(pg·mL-1)FT4/(ng·dL-1)Con68.72±8.22 50.89±8.60 1.94±0.30 1.66±0.23 Con+PTU23.59±20.62**##18.04±4.14**##0.72±1.591.08±0.35HFD56.21±6.7845.23±7.281.83±0.171.29±0.17HFD+PTU15.58±10.07**##14.94±8.17**##0.12±0.29*#0.56±0.49** *P<0.05, **P<0.01 vs Con;#P<0.05, ##P<0.01 vs HFD; PTU:propylthiouracil; HFD:high fat di-et; T3:triiodothyronine;T4:tetraiodothyronine;FT3:free T3;FT4:free T4;Con:control.

圖1 丙硫氧嘧啶和高脂飼料對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響Fig.1 Effects of PTU and HFD on body weightof rats(n=8)

*P<0.05,Con+PTUvsCon;#P<0.05,HFD+PTUvsHFD；Con:control;PTU:propylthiouracil;HFD:high fat diet.

對(duì)采食量的分析表明，時(shí)間因素有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001), 說(shuō)明動(dòng)物采食量有隨時(shí)間變化的趨勢(shì)；時(shí)間和飼料分組的交互作用(P<0.01)以及時(shí)間和PTU分組的交互作用(P<0.001)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 說(shuō)明動(dòng)物采食量隨時(shí)間的變化趨勢(shì)與是否使用高脂飼料和是否加入PTU的不同而不同。組間變異結(jié)果顯示，HFD和PTU處理因素的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，提示飼喂高脂飼料或加入PTU可對(duì)動(dòng)物的采食量產(chǎn)生顯著影響。各組動(dòng)物的采食量在最初5 d左右基本相同，圍繞20 g/d左右上下波動(dòng)，Con組和Con+PTU在第5 d，HFD和HFD+PTU組于第8 d差異出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，含PTU的組動(dòng)物采食量均低于相應(yīng)不含PTU的實(shí)驗(yàn)組。第6～30天，HFD組采食量低于Con組，第8～30天，HFD+PTU采食量低于Con+PTU組，高脂飼料為基礎(chǔ)的組的采食量低于不含高脂飼料組(圖2)。結(jié)合體質(zhì)量和采食量結(jié)果可知采食量下降幾天后，體質(zhì)量出現(xiàn)下降[11]。

圖2 丙硫氧嘧啶和高脂飼料對(duì)大鼠采食量的影響Fig.2 Effects of PTU and HFD on feed consumptionof rats(n=8)

*P<0.05,Con+PTUvsCon;#P<0.05,HFD+PTUvsHFD；Con:control;PTU:propylthiouracil;HFD:high fat diet.

2.5 高脂飼料和丙硫氧嘧啶對(duì)大鼠Lee’s指數(shù)、肝系數(shù)及腎周脂肪和睪周脂肪的影響

各組之間Lee’s指數(shù)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是含有PTU組的均數(shù)低于不含PTU組，析因分析表明，PTU主效應(yīng)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，HFD效應(yīng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，二者之間也不存在交互效應(yīng)(圖3A)。表明PTU可引起動(dòng)物以體長(zhǎng)為標(biāo)準(zhǔn)的體質(zhì)量降低，動(dòng)物消瘦。

以高脂飼料為基礎(chǔ)的兩個(gè)組的肝系數(shù)均比相應(yīng)的兩個(gè)正常飼料組顯著升高，析因分析表明高脂飼料是影響肝系數(shù)的重要因素(P<0.01)。在正常飼料的基礎(chǔ)上加入PTU可使肝系數(shù)顯著降低，而在高脂飼料的基礎(chǔ)上加入PTU后肝系數(shù)顯著升高(圖3B)，此結(jié)果表明PTU本身并不造成肝系數(shù)升高或肝損傷，但是PTU與高脂飼料合用后，可加強(qiáng)高脂飼料提高肝系數(shù)造成肝損傷的作用。結(jié)合前文血脂的數(shù)據(jù)，可看出PTU與HFD合用后，協(xié)同升高血漿TC、LDL-C和肝系數(shù)，提高高脂飼料升高血脂及對(duì)肝臟造成的損傷。

對(duì)于脂肪組織的分析結(jié)果表明，對(duì)于脂肪組織，高脂飼料可顯著提高睪周脂肪系數(shù)(圖3C)，但是對(duì)腎周脂肪系數(shù)(圖3D)沒(méi)有升高作用。無(wú)論是正常飼料還是高脂飼料加入PTU后，腎周和睪周脂肪組織的重量均顯著減輕，析因分析結(jié)果也表明，PTU對(duì)腎周和睪周脂肪的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，是影響脂肪系數(shù)的重要因素(P<0.01)。

圖3 丙硫氧嘧啶和高脂飼料對(duì)大鼠Lee’s指數(shù)、肝系數(shù)及脂肪系數(shù)的影響Fig.3 Effects of PTU and HFD on the Lee’s index, liver index, adipose index of

**P<0.01;A：Lee’s index；B：liver index;C:epididymal adipose index;D: perirenal adipose index；Con:control;PTU:propylthiouracil;HFD:high fat diet.

2.6 高脂飼料和丙硫氧嘧啶對(duì)高脂血癥大鼠肝組織病理學(xué)的影響

肝臟組織油紅O染色的病理檢查結(jié)果顯示：肝細(xì)胞核為藍(lán)色，脂滴為橘紅色。正常組肝索排列整齊，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心單行排列成板狀結(jié)構(gòu)，肝細(xì)胞形態(tài)、大小正常，胞質(zhì)豐富，胞質(zhì)內(nèi)沒(méi)有橘紅色脂質(zhì)顆粒(圖4A)。正常飼料+PTU組肝細(xì)胞形態(tài)略小，細(xì)胞內(nèi)有少量脂質(zhì)沉積，肝索結(jié)構(gòu)正常(圖4B)。高脂飼料組肝細(xì)胞增大胞質(zhì)內(nèi)有大量紅染脂滴，部分肝索結(jié)構(gòu)紊亂，局部肝細(xì)胞溶解壞死(圖4C)。高脂飼料+PTU組肝細(xì)胞內(nèi)也有大量的脂質(zhì)沉積，肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死(圖4D)。

2.7 高脂飼料和丙硫氧嘧啶對(duì)大鼠脂肪細(xì)胞大小的影響

Image J測(cè)量脂肪細(xì)胞面積顯示，正常飼料組脂肪細(xì)胞飽滿，結(jié)構(gòu)清晰，高脂飼料組的脂肪細(xì)胞面積比正常飼料組面積增大，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，給予PTU后，脂肪細(xì)胞面積顯著小于相應(yīng)的無(wú)PTU飼料組，即正常飼料+PTU<正常飼料組，高脂飼料+PTU<高脂飼料組，并且高脂飼料+PTU組>大于正常飼料+PTU組(P<0.01)(圖5A、B)。析因分析表明HFD和PTU對(duì)脂肪細(xì)胞面積的影響均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩因素間沒(méi)有交互作用，表明兩個(gè)因素均對(duì)脂肪細(xì)胞面積具有獨(dú)立顯著影響。

圖4 丙硫氧嘧啶和高脂飼料對(duì)大鼠肝臟組織病理學(xué)影響Fig.4 Effects of HFD and PTU on liver histopathological changes of rats (oil red staining, 200×)

**P<0.01;A：Con；B：Con+PTU；C：HFD；D：HFD+PTU；Con:control;HFD:high fat diet;PTU:propylthiouracil.

圖5 高脂飼料和丙硫氧嘧啶對(duì)大鼠脂肪細(xì)胞大小的影響Fig.5 Effects of HFD and PTU on adipocytes size of rats(HE staining, 400×)**P<0.01;Con:control; HFD:high fat diet; PTU:propylthiouracil.

3 討論

血脂異常在人群中很常見(jiàn)，可表現(xiàn)為高膽固醇血癥、高三酰甘油(triglyceride, TG)血癥、低HDL-C和混合型高脂血癥4種類型，其中以LDL-C升高為主要表現(xiàn)的高膽固醇血癥是動(dòng)脈粥樣硬化性心血管病的最重要危險(xiǎn)因素，控制血漿總膽固醇和LDL-C是冠心病的一級(jí)預(yù)防和二級(jí)預(yù)防中的重要任務(wù)。數(shù)十年來(lái)，我國(guó)居民血脂異常的流行趨勢(shì)日趨嚴(yán)重，高膽固醇血癥發(fā)病率逐年上升，控制高膽固醇血癥的形勢(shì)還相當(dāng)嚴(yán)峻，研究開(kāi)發(fā)優(yōu)秀的降血脂藥依然是藥理學(xué)工作者的重任。構(gòu)建合適的高脂血癥動(dòng)物模型是降脂研究的基石，應(yīng)用提高膽固醇和飽和脂肪酸含量的高脂飼料誘發(fā)高脂血癥動(dòng)物模型是最常用、最方便的方法，但是常規(guī)高脂飼料造模需要數(shù)月時(shí)間，周期較長(zhǎng)，且血脂濃度升高程度有限，因此加入抗甲狀腺藥物加速造模和提高模型血脂濃度是常用策略，PTU是最常用的工具藥。本研究的結(jié)果也支持這個(gè)觀點(diǎn)，本研究中在給予SD大鼠高脂飼料的基礎(chǔ)上給予PTU能夠使血脂在1個(gè)月時(shí)就非常顯著地升高，大大提高了造模的速度和幅度。但是甲狀腺是體內(nèi)重要的代謝調(diào)節(jié)激素，對(duì)糖、脂肪、蛋白質(zhì)的代謝及交感、副交感神經(jīng)均具有調(diào)節(jié)作用，因此抑制甲狀腺功能，會(huì)在升高血脂的同時(shí)帶來(lái)多種復(fù)雜影響，這些作用可能會(huì)干擾降脂藥物研究過(guò)程中藥效和作用機(jī)制的評(píng)價(jià)，需要慎重權(quán)衡。

首先，抑制甲狀腺功能除了影響脂質(zhì)代謝外還可影響蛋白質(zhì)和糖的代謝，因此加入PTU實(shí)際上是制作了一個(gè)復(fù)雜代謝障礙的模型，并非是一個(gè)單純的高膽固醇血癥模型。單純高脂飼料誘發(fā)的高脂血癥模型中血脂四項(xiàng)及血糖常常表現(xiàn)為升高[12-14]，加入PTU后血脂的變化以TC和LDL-C升高為主，TG濃度變化小，并且血糖升高不明顯甚至表現(xiàn)為下降[15]，這些變化特征與單純高脂飼料引起的血脂變化特征不完全一致，且和臨床常見(jiàn)飲食相關(guān)的高脂血癥患者的血脂譜表現(xiàn)形式也不一致，此模型適于進(jìn)行高膽固醇血癥的研究，不適用于高TG或混合型高脂血癥的研究。而且甲狀腺功能降低或抑制還和多種對(duì)高血脂、高血壓、心血管病不利因素有關(guān)，如炎性反應(yīng)、舒張期高血壓、高同型半胱氨酸血癥、止血異常、腎功能改變、非酒精性脂肪肝、胰島素抵抗、代謝綜合征等[16-19]。

其次，添加PTU在降低代謝率的同時(shí)可顯著抑制動(dòng)物食欲，從而引起采食量顯著下降，繼之體質(zhì)量持續(xù)下降，動(dòng)物逐漸消瘦、活動(dòng)減少、毛色發(fā)黃干枯、精神不振、對(duì)外界刺激反應(yīng)性下降，本研究中HFD+PTU組的動(dòng)物采食量、體質(zhì)量、腎周脂肪、睪周脂肪、Lee’s指數(shù)等均低于單純使用HFD組，并且統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明針對(duì)這些指標(biāo)，PTU作用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些現(xiàn)象總體呈現(xiàn)為血漿膽固醇持續(xù)升高，肝臟脂質(zhì)蓄積，而體脂卻持續(xù)減少，動(dòng)物一般情況下降的特征，這與臨床高脂血癥的特征也不一致，因而在研究中需要慎重權(quán)衡。

另外，抑制甲狀腺功能還能夠影響體內(nèi)多種代謝脂質(zhì)的酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體的活性，甲狀腺功能下降時(shí)，膽汁酸合成的限速酶7a羥化酶活性下降最快、最明顯[20]，而肝臟、成纖維細(xì)胞和其他組織中LDL-C受體的表達(dá)明顯降低，肝臟攝取LDL-C減少[21-22]。甲狀腺功能減退癥時(shí)促甲狀腺激素(thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH)濃度升高可提高HMG-CoA還原酶活性，加速膽固醇合成[23]，而TSH濃度升高還可提高ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1)表達(dá)，從而加速膽固醇外排過(guò)程[24]，加速膽固醇從血管內(nèi)皮、平滑肌等外周細(xì)胞轉(zhuǎn)移至HDL-C。將膽固醇酯從HDL-C轉(zhuǎn)移到LDL-C和VLDL-C的膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(cholesterol ester transfer protein, CETP)的活性下降[25]，抑制了HDL-C和LDL-C、VLDL-C之間的膽固醇酯交換過(guò)程，肝脂肪酶和脂蛋白脂肪酶活性下降，抑制脂蛋白中富含TG的脂蛋白的降解和TG從這些脂蛋白轉(zhuǎn)移到HDL-C的速度[26]，有研究[27]表明甲狀腺激素可提高肝臟HDL-C受體即B類I型清道夫受體(scavenger receptor class-B, type I，SR-BI)的表達(dá)，這些過(guò)程不利于HDL-C循環(huán)利用。因此甲狀腺功能減退時(shí)表現(xiàn)為膽固醇合成增加、代謝減少、細(xì)胞外排膽固醇過(guò)程加強(qiáng)，而肝臟攝取膽固醇能力下降，這些變化共同造成血漿膽固醇濃度升高。因而抗甲狀腺藥物雖然是很好的高脂血癥造模工具藥，但是進(jìn)行降脂藥物作用機(jī)制研究時(shí)，它們對(duì)多種脂質(zhì)代謝酶的影響會(huì)嚴(yán)重干擾研究者對(duì)藥物作用機(jī)制和作用靶點(diǎn)的分析判斷。因此這種模型適用于藥物開(kāi)發(fā)臨床前研究階段藥物降脂療效的篩選或初步評(píng)價(jià)，而不適用于藥物作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制的深入探討?？傊疀Q定是否添加PTU需要根據(jù)研究目的和研究方案慎重考慮。

[1] 蔡潔娜，胡志明，張犁，等. 口服脂肪酶對(duì)高脂性模型大鼠脂代謝和脂肪肝的影響[J]. 廣東醫(yī)學(xué), 2014，35(7): 989-992.

[2] 吳人照，吳煥淦，壽張根，等. 生物信息反饋紅外治療儀對(duì)高血脂大鼠降脂作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 世界中醫(yī)藥, 2016，11(12): 2533-2538.

[3] 郝維佳，李靜宜，蔣輝，等. 純化成分高脂/高糖飼料的優(yōu)勢(shì)及國(guó)內(nèi)應(yīng)用現(xiàn)狀[J]. 衛(wèi)生研究,2017，46(1): 143-147.

[4] 徐勇勇,孫振球.醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)[M]. 4版. 北京： 人民衛(wèi)生出版社, 2015: 571-574.

[5] Lu Y, Li H, Shen S W, et al. Swimming exercise increases serum irisin level and reduces body fat mass in high-fat-diet fed Wistar rats[J]. Lipids Health Dis, 2016, 15: 93-100.

[6] 何明，涂長(zhǎng)春，黃起壬，等. Lee’s指數(shù)用于評(píng)價(jià)成年大鼠肥胖程度的探討[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)雜志, 1997，2(3): 177-179.

[7] 董乃相，張書(shū)義，梁玉磊，等. 針刺對(duì)不同性別單純性肥胖大鼠Lee’s指數(shù)與Leptin含量的影響[J]. 中醫(yī)學(xué)報(bào), 2015，30(6): 846-848.

[8] Van der Heijden R A, Sheedfar F, Morrison M C, et al. High-fat diet induced obesity primes inflammation in adipose tissue prior to liver in C57BL/6j mice[J]. Aging (Albany NY), 2015, 7(4): 256-268.

[9] 曹艷麗，谷劍秋，王滌非，等. 肥胖者脂肪組織中TNF-α表達(dá)與脂肪細(xì)胞大小的相關(guān)性分析[J]. 中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2013，22(4): 282-285.

[10] Aoki S, Iwai A, Kawata K, et al. Oral administration of the aureobasidium pullulans-derived β-glucan effectively prevents the development of high fat diet-induced fatty liver in mice[J]. Sci Rep, 2015, 5: 10457-10466.

[11] 常露，趙珍，朱振東，等. 兩種高脂飼料分段喂養(yǎng)對(duì)大鼠體重和血脂的影響[J]. 昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2015，36(8): 19-22.

[12] Sung Y Y, Kim D S, Choi G, et al. Dohaekseunggi-tang extract inhibits obesity, hyperlipidemia, and hypertension in high-fat diet-induced obese mice[J]. BMC Complement Altern Med, 2014, 14: 372-380.

[13] Han J M, Lee J S, Kim H G, et al. Synergistic effects of Artemisia iwayomogi and Curcuma longa radix on high-fat diet-induced hyperlipidemia in a mouse model[J]. J Ethnopharmacol, 2015, 173: 217-224.

[14] Lee H S, Nam Y, Chung Y H, et al. Beneficial effects of phosphatidylcholine on high-fat diet-induced obesity, hyperlipidemia and fatty liver in mice[J]. Life Sci, 2014, 118(1): 7-14.

[15] Al-Noory A S, Amreen A N, Hymoor S. Antihyperlipidemic effects of ginger extracts in alloxan-induced diabetes and propylthiouracil-induced hypothyroidism in (rats)[J]. Pharmacognosy Res, 2013, 5(3): 157-161.

[16] Pandrc M S, Ristic A, Kostovski V, et al. The effect of early substitution of subclinical hypothyroidism on biochemical blood parameters and the quality of life[J]. J Med Biochem, 2017, 36(2): 127-136.

[17] Hennessey J V, Espaillat R. Subclinical hypothyroidism: a historical view and shifting prevalence[J]. Int J Clin Pract, 2015, 69(7): 771-782.

[18] Pesic M M, Radojkovic D, Antic S, et al. Subclinical hypothyroidism: association with cardiovascular risk factors and components of metabolic syndrome[J]. Biotechnol Biotechnol Equip, 2015, 29(1): 157-163.

[19] Karabulut A, Dogan A, Tuzcu A K. Myocardial performance index for patients with overt and subclinical hypothyroidism[J]. Med Sci Monit, 2017, 23: 2519-2526.

[20] Ness G C, Pendleton L C, Li Y C, et al. Effect of thyroid hormone on hepatic cholesterol 7 alpha hydroxylase, LDL receptor, HMG-CoA reductase, farnesyl pyrophosphate synthetase and apolipoprotein A-I mRNA levels in hypophysectomized rats[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1990, 172(3): 1150-1156.

[21] Pearce E N. Hypothyroidism and dyslipidemia: modern concepts and approaches[J]. Curr Cardiol Rep, 2004, 6(6): 451-456.

[22] Thompson G R, Soutar A K, Spengel F A, et al. Defects of receptor-mediated low density lipoprotein catabolism in homozygous familial hypercholesterolemia and hypothyroidism in vivo[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 1981, 78(4): 2591-2595.

[23] Tian L, Song Y, Xing M, et al. A novel role for thyroid-stimulating hormone: up-regulation of hepatic 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-coenzyme A reductase expression through the cyclic adenosine monophosphate/protein kinase A/cyclic adenosinemonophosphate-responsive element binding protein pathway[J]. Hepatology,2010, 52(4): 1401-1409.

[24] Zhang T, Zhou L, Li C C, et al. TSH increases synthesis of hepatic ATP-binding cassette subfamily A member 1 in hypercholesterolemia[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2016, 476(2): 75-81.

[25] Tan K C, Shiu S W, Kung A W. Plasma cholesteryl ester transfer protein activity in hyper-and hypothyroidism[J]. J Clin Endocrinol Metab, 1998, 83(1): 140-143.

[26] Lam K S, Chan M K, Yeung R T. High-density lipoprotein cholesterol, hepatic lipase and lipoprotein lipase activities in thyroid dysfunction—effects of treatment[J]. Q J Med, 1986, 59(229): 513-521.

[27] Johansson L, Rudling M, Scanlan T S, et al. Selective thyroid receptor modulation by GC-1 reduces serum lipids and stimulates steps of reverse cholesterol transport in euthyroid mice[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2005, 102(29): 10297-10302.