上饒市獻血人群JK（a-b-）表型篩查及分子生物學特征分析

何輝，沈有華

(上饒市中心血站，江西 上饒 334000)

Kidd血型系統(tǒng)是人類血型系統(tǒng)之一，決定該血型系統(tǒng)分型的抗原稱為Kidd抗原或Jk抗原，分為Jka、Jkb、Jk3三種抗原。存在4種表型為Jk（a+b－）、Jk（a－b+）、Jk（a+b+）和一種罕見的表型 Jk（ab－），也稱為JKnull。Kidd血型基因編碼產(chǎn)物為尿素通道蛋白，Jk（a－b－）表型個體紅細胞可以耐受2mol/L的尿素溶液30min內(nèi)完全不溶血，而其他的表型約3min內(nèi)出現(xiàn)完全溶血[1－4]。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2016年3月至2017年5月上饒市中心血站獻血者血液篩查標本38483例。

1.2 儀器與試劑 分析純尿素 （上海展云化工公司，批號 20150915），單克隆抗－JKa、抗－JKb（法國DIAGAST，批號448000）。RSP100全自動加樣儀（瑞士帝肯公司），KA2200臺式離心機 （日本久保田株式會社）。

1.3 紅細胞尿素溶血實驗 采用RSP100全自動加樣儀，取12μl壓積紅細胞，用600μl生理鹽水配成2%的紅細胞懸液。在120孔OLYMPUS微孔板上，每孔先加入20μl紅細胞懸液，再加入2mol/L的尿素溶液。振蕩混勻，室溫放置30min。肉眼觀察結果，溶血者陽性，不溶血者為陰性。

1.4 JK（a－b－）血清學確認實驗 標本紅細胞用生理鹽水洗滌3遍配成2%的紅細胞懸液。采用鹽水試管法檢測紅細胞上的JKa、JKb抗原，單克隆抗JKa、JKb 試劑各 50μl，再加入 50μl 2%的紅細胞懸液，3000r/min離心15s，肉眼觀察結果，凝集者陽性，不凝集者陰性。

1.5 Kidd血型測序和序列分析 委托上海血液中心進行對表型為 Jk（a－b－）的獻血者的Jk基因編碼外顯子進行PCR擴增，并測定序列。與GenBank收錄的Kidd血型基因各外顯子的核苷酸序列比對。

2 結果

2.1 JK（a－b－）初篩和血清學確認實驗 38483 份血液篩查標本中有1份標本未出現(xiàn)溶血，其余均出現(xiàn)溶血，進行血清學實驗，確認為JK（a－b－）血型，分布頻率約為0.0025%。

2.2 JK（a－b－）測序 對 Kidd 基因第 6 和第 9 外顯子測序結果顯示，該獻血者為JKB/JKB純合子，JKB基因第5內(nèi)含子剪切位點突變AG＞AA （純合突變），見圖 1。

3 討論

Jk（a－b－）表型分布頻率存在地域、人群的差異，本研究發(fā)現(xiàn)上饒地區(qū)分布頻率約為0.0025%，低于上海地區(qū) 0.0039%[5]、 溫州 0.014%[6]、 廣州0.02%[7]。

圖1 JK（a-b-）獻血者基因測序結果

Kidd血型基因11個外顯子中只有第4－11外顯子參與kidd血型蛋白肽鏈，只對參與編碼的外顯子測序。 本文中的 Jk（a－b－）基因型為 JKBΔ6/JKBΔ6，而 JKBΔ6（IVS5－1G＞A）是中國人群中最常見的 Jknull等位基因。Jk（a－b－）在不同的種族人群中分子機理不同，本例中JKB基因的第六外顯子的第5內(nèi)含子剪切位點突變AG＞AA（純合突變），導致第6外顯子的編碼序列在轉錄和翻譯過程中被遺漏，是一種導致 Jk（a－b－）表型的常見變異，這是導致Jk（a－b－）的個體紅細胞尿滲透障礙的遺傳基礎[8－11]。

紅細胞表面缺乏Jka、Jkb抗原，因輸血或懷孕與胎兒血型不合時可產(chǎn)生相應抗體，其抗體與溶血性輸血反應相關，也可導致新生兒溶血病[12]。臨床上遇到 Jk（a－b－）表型的患者需要輸血時，往往無法及時找到相匹配的血液，而輸注血型不合的血液可能引起輸血反應。這種血型的人需要輸血時有3個途徑：他人捐獻、自身儲血、親屬間同型互助。明確該表型在本地獻血人群中的分布頻率，儲存該表型的獻血者血液，對保證該類表型患者的安全輸血有重要意義[13－15]。

[1]杰夫.丹尼爾.人類血型學[M].朱自嚴.譯.北京：科技出版社，409－416.

[2]Onodera T，Sasaki K，T suneyama，et al.Jknull alleles identified from Japanese individuals with JK(a－b)phenotype.Vox sang，2014，106(4)，382－384.

[3]Vucelic，Savic N，Djordjevic.Delayde hemolytic transfusion reaction due to anti－Jk(a).Acta Chir Lugosl，2005，52(3)：111－115.

[4]朱發(fā)明，許先國，洪小珍，等.Jk（a－b－）表型分子機理的初步研究[J].中國輸血雜志.2003，16(4)：245－247.

[5]王晨，朱自嚴.上海地區(qū)人群部分稀有血型篩選[J].檢驗醫(yī)學，2007，22（5）：583－584.

[6]陳倉榮，林杰，林碧，等.溫州地區(qū)稀有血型 Jk（a－b－）獻血者篩選和臨床應用[J].中國輸血雜志，2014，27（11）：1132－1133.

[7]姬艷麗，魏玲，王貞，等.廣州地區(qū)無償獻血者 Jk（a－b－）表型篩選及分子遺傳學研究[J].中國輸血雜志，2012，25（3）：216－219.

[8]章文，李德發(fā)，王紅梅，等.某地區(qū)兒童 Kidd 血型 Jk（a－b－）表型的篩選[J].國際檢驗雜志，2011，32（17）：1942－1945.

[9]陳青，李平，肖建宇，等.Jk（a－b－）表型和基因多態(tài)性分析方法的建立及其應用[J].中國輸血雜志，2015，28（2）：113－115.

[10]趙華山，李志滿，呂斌，等.2mol/L尿素溶血試驗在UT－B基因敲出小鼠核型鑒定中的應用[J].中國實驗診斷學，2017，21(11)：1425－1428.

[11]孟艷，周雪艷，李楊，等.一中國家族中導致Jknull顯型的JK位點的一個新的突變[J].中國科學，2005，35（3）：201－205.

[12]熊莉，翁美芝，何華慶.Kidd血型抗JKa致1例疑難配血結果分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學雜志.2014，32（2）：222－223.

[13]羅廣平，汪傳喜，夏文杰，等.稀有血型抗體抗JK－3的發(fā)現(xiàn)及Jk （a－b－） 血型家系遺傳研究背景 [J].中國輸血雜志，2008，21（3）：172－174.

[14]許志遠，王濤.北京市稀有血型患者輸血途徑探討[J].北京醫(yī)學，2013，35(2)：134－136.

[15]嚴康峰，鄧詩楨，曹玫玫，等.廣州番禺地區(qū)獻血人群稀有血型的篩選[J].中國輸血雜志，2007，20(4)：290－291.