脂肪酶的試劑攜帶污染對總膽汁酸檢測的影響

雷鵬，侯芳，陳開楊，歐陽慧，楊陽，向尹

(樂山市人民醫(yī)院檢驗科，四川 樂山 614000)

血清總膽汁酸（TBA）在臨床肝病診斷中應用較廣，對急、慢性肝炎，肝硬化，肝內外膽道阻塞，膽汁淤積等疾病的診斷具有重要的臨床意義[1，2]。在實際工作中我們發(fā)現(xiàn)部分TBA結果有假性升高的現(xiàn)象。經(jīng)追蹤發(fā)現(xiàn)，測定脂肪酶（LPS）后的TBA濃度與單獨測定TBA濃度有差異。為探討LPS試劑是否影響TBA測定，我們用日立7600－110和7600－020全自動生化分析儀，實驗分析LPS試劑對TBA攜帶污染的情況，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 ⑴檢測標本：收集當日無溶血、無黃疸、無脂血的血清標本混合成1份樣本后再分為20份，每份2ml。⑵儀器：日立7600－110、7600－020全自動生化分析儀。其中，7600－110由D模塊與P模塊組成，LPS與TBA試劑在P模塊。7600－020由兩個 P模塊組成，LPS試劑在 P2模塊，TBA試劑在P1模塊。試劑：TBA試劑由四川邁克提供，批號：0217011，有效期：20180209。

1.2 方法 ⑴LPS對TBA的干擾程度：先對10份混合血清的TBA進行單獨檢測，將其作為對照組。接著另取混合血清10份，做LPS檢測后接著做TBA檢測，連續(xù)10次，將其作為實驗組1。然后在LPS檢測后設置特殊清洗，做LPS檢測后接著做TBA檢測，連續(xù)10次，將其作為實驗組2。在7600－110上進行上述三種檢測，在7600－020上進行上述前兩種檢測。⑵干擾試劑的確認：取混合血清1份，取500μl混合血清與5μl生理鹽水混合作為對照組，再取兩份500μl混合血清分別與5μl LPS的R1、R2試劑混合作為實驗組1和實驗組2，每份樣本重復測定10次。在7600－020上進行上述檢測。⑶LPS對TBA結果影響的持續(xù)時間：將10份混合血清單獨測試TBA，作為對照組。接著在儀器上對15份混合血清按下列順序測試：LPS、LPS、LPS、LPS、LPS、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA、TBA，按上述檢測重復 10次作為實驗組1。然后在LPS檢測后設置特殊清洗，重復實驗組1步驟作為實驗組2。在7600－110上進行上述檢測。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以（±s）表示，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 LPS對TBA的干擾程度實驗結果 在7600－110上同時選擇LPS與TBA進行檢測所得TBA的值明顯高于單獨檢測TBA，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而在檢測LPS后設置特殊清洗再檢測TBA所得的值也明顯高于單獨檢測TBA，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 而在 7600－020 上同時選擇LPS與TBA進行檢測所得TBA的值與單獨檢測TBA 相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 （表 1）

2.2 攜帶污染的試劑確認實驗結果 加入LPS試劑R1后，所測得的TBA值明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 而加入 LPS試劑 R2后，所測得的TBA值也明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 （表 2）

2.3 LPS試劑攜帶污染對TBA結果影響的持續(xù)時間 參照參考文獻[3，4]方法，未設置特殊清洗時，LPS試劑對其后TBA檢測的干擾到第10管仍然存在，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而在 LPS 檢測后設置特殊清洗，LPS試劑對其后TBA檢測的干擾持續(xù)到第 7 管測試，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），第 8管測試與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05）。 （表 3）

表1 3種不同方法檢測TBA

表2 加入LPS試劑后所測TBA含量

3 討論

目前，全自動生化分析儀在臨床檢驗中廣泛使用，給日常工作帶來了極大的便利[5，6]。但在實際工作中，儀器的攜帶污染現(xiàn)象難以避免[7－9]。資料顯示，攜帶污染是影響全自動生化分析儀準確度、精密度的常見原因之一[10，11]。攜帶污染與不同儀器、試劑成分及項目測定順序、組合以及試劑針、攪拌棒、比色杯是否清潔或損壞均有一定的關系[12]，其中常見原因是試劑間的交叉污染。試劑間的交叉污染常見于試劑中含有下一個檢測所要測定的底物，或含有的某種試劑成分與下一反應的底物有作用，因而直接干擾下一反應的測定結果；另一種原因是該試劑所發(fā)生的反應對下一個項目的反應過程帶來間接的干擾[13－15]。

本文通過實驗發(fā)現(xiàn)LPS的R1和R2試劑對TBA測定有明顯的正干擾，同時還發(fā)現(xiàn)LPS的R1和R2試劑中含有大量的膽汁酸。在7600－110上對LPS先測定，之后行TBA測定時，TBA測定結果表現(xiàn)為假性增高，結果明顯區(qū)別于對照組。同時在對LPS測定后設置特殊清洗再行TBA測定，TBA測定結果仍假性增高，結果也高于對照組。而在7600－020上，由于LPS與TBA試劑分別處于不同的模塊中，所以并不存在LPS對TBA的攜帶污染。實驗結果還表明在LPS檢測后設置特殊清洗并不能完全清洗試劑針上的LPS試劑，這可能與LPS試劑中含有大量的膽汁酸，儀器并不能徹底沖洗干凈有關。

表3 LPS試劑對TBA測定干擾持續(xù)時間

本實驗還表明LPS試劑對TBA測定的影響具有持續(xù)性，未設置特殊清洗，TBA測定的第10管仍存在攜帶污染。即使設置特殊清洗，TBA測定的第7管也存在攜帶污染。這要求實驗室人員在平時的工作中發(fā)現(xiàn)TBA出現(xiàn)異常結果時，要及時考慮攜帶污染的情況，分析之前測定的項目是否包含LPS，并在不同的儀器上復查。

綜上所述，結合TBA測定中，LPS試劑對其結果正干擾影響進行分析，可將被干擾的項目和干擾的項目在不同的模塊中安排，對分析項目的設置必須注意位置，加強防范措施，從根本上保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，為臨床提供客觀真實的診療依據(jù)。

[1]陳亮，馬吉芳，王倩.血清總膽汁酸檢測在肝臟疾病中的臨床意義與檢驗學研究[J].中國醫(yī)藥指南，2016，14(16)：129－130.

[2]朱柏林.血清總膽汁酸、膽堿酯酶和前白蛋白檢測在肝病診斷中應用探析[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2017，35(2)：255－257.

[3]朱武軍，邰飛，邵燕麗，等.循環(huán)酶法測定總膽汁酸試劑交叉污染及預防措施[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2011，32(9)：990－991.

[4]顧光煜，郭群，高磊.肌酐和膽固醇試劑對膽汁酸測定結果的影響[J].臨床檢驗雜志，2005，23(5)：361－362.

[5]鄧述歡.膽固醇對總膽汁酸在自動分析中是否存在交叉污染的探討[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2011，8(5)：604－605.

[6]孫金蓮.試劑交叉污染對血清總膽汁酸測定結果的影響[J].臨床合理用藥雜志，2012，5(28)：133-134.

[7]滕義建.試劑交叉污染對膽汁酸測定結果的影響[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2013，10（4）：510-511.

[8]林海川，梅玉峰.全自動生化分析儀常用試劑間的相互干擾和應對措施[J].醫(yī)學信息：中旬刊，2010，5(12)：3815-3816.

[9]呂偉標，黃倩婷，賈璋林，等.常用生化試劑間交叉污染調查及測試順序的研究[J].海南醫(yī)學，2011，22(6)：100-102.

[10]邱玲，程歆琦，劉茜，等.自動生化分析儀攜帶污染來源檢出及處理[J].醫(yī)學研究雜志，2007，36(6)：64-67.

[11]劉香萍，程明剛，許偉珊，等.甘油三酯試劑與總膽固醇試劑對總膽汁酸測定的干擾[J].中華全科醫(yī)學，2013，11(4)：621-622.

[12]丁雙雙，汪浩，沈霞.HDL-C試劑干擾血清總膽汁酸測定結果的原因分析及對策[J].檢驗醫(yī)學，2011，26(3)：215-216.

[13]謝祺，楊紹敏.總膽汁酸測定交叉污染及防范措施探討[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2014，30(8)：1273-1274.

[14]顧國寶，陳潔，李燕.全自動生化分析儀使用中項目間交叉污染的探討[J].上海醫(yī)學檢驗雜志，2002，17(3)：176-177.

[15]趙中華，朱劍峰.羅氏Modular生化分析儀試劑交叉污染的檢測及排除[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2010，31(4)：402-403.