胃癌患者外周血和腫瘤灶中髓源性抑制細胞表達水平研究

周雅瑩，文錦麗，周繼豪

(深圳市人民醫(yī)院臨床醫(yī)學研究中心，廣東 深圳 518020)

髓源性抑制細胞 （myeloid derived suppressor cells，MDSCs）是一群分化未成熟的髓來源細胞，正常生理狀態(tài)下，該群細胞可分化為巨噬細胞、粒細胞和樹突狀細胞，當受到腫瘤來源的膜型和分泌型生物活性物質(zhì)（Tumor derived factors，TDFs）刺激

時，則可通過多種途徑參與免疫應答反應，引起機體自身的免疫功能下降，進而導致疾病的發(fā)展與惡化[1，2]。目前研究已經(jīng)證實MDSCs的表達改變與乳腺癌、宮頸癌、結腸癌的發(fā)生發(fā)展相關[3－5]。本研究觀察了胃癌患者外周血和腫瘤灶中MDSCs表達的變化，并分析該變化可能的相關因素，現(xiàn)報道如下。

1 研究對象與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月－2017年4月經(jīng)我院確診的胃癌患者26例，其中男性15例，女性11例，平均年齡為59.85±10.88歲。選取2016年5月-2016年12月于我院進行體檢的健康志愿者14例，其中男性8例，女性6例，平均年齡56.14±10.91歲。胃癌患者與健康體檢者在年齡、性別構成上差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 入選標準 ①患者均為首次確診為原發(fā)性胃癌；②患者均行胃癌根治術；③患者術前均未進行放療、化療；④患者均無其他系統(tǒng)腫瘤。

1.3 觀察指標 記錄患者一般資料，包括患者性別、年齡；記錄患者腫瘤大小、有無淋巴結轉移、TNM分期及分化程度。

1.4 實驗方法 于術前、術后4周采集胃癌患者外周靜脈血，采集健康體檢者外周靜脈血，各2ml，于術中采集胃癌患者腫瘤灶組織。血液標本以EDTA-Na2抗凝管保存。所有標本經(jīng)處理后進行流式分析，檢測以HLA-DR－/CD11b+/CD33+為MDSCs的表面標志物的細胞數(shù)量比例?？贵w及紅細胞裂解液選用美國Biolegend公司的鼠抗人HLA-DRECD單克隆抗體、鼠抗人CD33-Cy5單克隆抗體、鼠抗人CD11b-FITC單克隆抗體，PBS磷酸鹽緩沖液為院內(nèi)自制。

1.5 統(tǒng)計方法 將各組數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析，各組數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差 （±s）表示，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，計量數(shù)據(jù)采用t檢驗和方差分析，相關分析采用Pearson相關性分析。以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 胃癌患者術前、術后4周與健康體檢者外周血MDSCs表達 胃癌患者術前外周血HLA-DRCD11b+CD33+MDSCs表達高于健康體檢者外周血的表達，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01），胃癌患者術前外周血HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達高于術后4周外周血的表達，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.05），胃癌患者術后4周外周血HLADR－CD11b+CD33+MDSCs表達高于健康體檢者外周血的表達，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表1。

2.2 胃癌患者腫瘤灶和外周血MDSCs表達 胃癌患者腫瘤灶HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達高于外周血的表達，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），胃癌患者腫瘤灶和外周血HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達成正相關（P＜0.05），見表 2。

2.3 胃癌患者外周血MDSCs表達水平與臨床資料的關系 胃癌患者外周血中HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達與腫瘤TNM分期、有無淋巴轉移、腫瘤分化程度相關（P＜0.05），與患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤深度不相關（P＞0.05），見表 3。

3 討論

胃癌的發(fā)病率位于所有惡性腫瘤的第四位，死亡率列于第二位，是常見的惡性腫瘤。我國每年因胃癌而死亡的人數(shù)占所有由惡性腫瘤引起死亡總人數(shù)的近25%[6]。研究表明，腫瘤的發(fā)展可能與患者自身免疫功能受損有關[7，8]。MDSCs作為與肌體免疫應答和腫瘤免疫逃逸有關的一群細胞，已經(jīng)被證實在眾多腫瘤疾病中起著重要的作用[3-5，9]。因此，本研究以胃癌患者外周血、腫瘤組織和健康體檢者外周血為研究對象，通過流式細胞儀檢測以 HLA-DR－/CD11b+/CD33+為標記的 MDSCs所占比例，分析其表達特點和臨床資料間的關系。

表1 胃癌患者術前、術后4周與健康體檢者外周血MDSCs表達

表2 胃癌患者腫瘤灶與外周血MDSCs表達（±s）

表2 胃癌患者腫瘤灶與外周血MDSCs表達（±s）

?

表3 胃癌患者外周血MDSCs表達水平與臨床資料的關系（±s）

表3 胃癌患者外周血MDSCs表達水平與臨床資料的關系（±s）

分組性別 男女0.0920.927年齡0.1830.856腫瘤直徑0.6200.539分化程度≥60＜60≥5cm＜5cm分化低分化2.4610.018淋巴轉移 有無3.7620.001浸潤深度例數(shù) MDSCs表達水平 t/F值 P值15 11 12 14 14 12 10 16 9 17 13 13 0.9330.357 TNM分期未達深肌層達到深肌層Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅳ期6 8 7 5 3.58±1.94 3.51±1.88 3.48±2.03 3.62±1.87 3.73±2.05 3.22±2.14 2.13±1.01 3.72±1.87 2.08±0.96 3.87±1.24 3.76±2.13 3.13±1.18 2.47±1.87 2.43±1.57 4.44±1.45 5.37±1.18 5.4240.006

本研究結果1表明，胃癌患者術前外周血MDSCs表達高于健康體檢者，且手術后4周的外周血MDSCs表達雖較術前有所降低，但仍高于健康體檢者。這可能與腫瘤組織釋放一系列的腫瘤來源的TDFs刺激MDSCs前體細胞增殖分化為MDSCs有關，與Sinha[10]等的研究結果一致。當手術切除腫瘤灶后，TDFs的釋放隨之減少，MDSCs前體細胞轉化為MDSCs的刺激因素減少，導致MDSCs的表達降低，但仍較體檢健康者高，提示刺激MDSCs增殖轉化因素的存在是有一定時間的，這種免疫受損的狀態(tài)具體需要多久才能恢復正常，尚需進一步研究。

本研究結果2表明，胃癌患者腫瘤灶MDSCs表達高于外周血，且二者呈正相關關系。盡管有眾多研究報道，腫瘤灶中MDSCs表達高于外周血的表達，但同時也有相反的報道。Feng[11]，Sun[12]，Eruslanov[13]等認為在非小細胞肺癌、腸癌、膀胱癌腫瘤灶中MDSCs表達高于外周血，Gros[14]等認為在黑色素瘤患者外周血中MDSCs表達高于腫瘤灶。這可能與腫瘤灶微環(huán)境中刺激MDSCs增殖轉化的因素高于外周血有關，但具體受哪些因素調(diào)節(jié)，及腫瘤灶中微環(huán)境與外周血微環(huán)境的區(qū)別有何不同，仍需要進一步研究。

本研究結果3表明，胃癌患者外周血中MDSCs表達與腫瘤TNM分期、有無淋巴轉移、腫瘤分化程度相關，與患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤深度不相關。胃癌腫瘤TNM分期越高，外周血中MDSCs表達越高，這一結果與Diaz-Montero[15]在乳腺癌中的研究結果相一致，這一結果提示，隨著腫瘤的發(fā)展，越來越多可刺激MDSCs增殖轉化的因素上調(diào)了外周血MDSCs表達，同時由于MDSCs具有抑制腫瘤免疫系統(tǒng)作用，可使患者免疫系統(tǒng)受損，導致腫瘤進一步增殖和轉移，進而印證了外周血中MDSCs表達與淋巴轉移、腫瘤分化程度相關。因此，該結果提示，胃癌患者外周血MDSCs表達可反映出腫瘤發(fā)展情況，可以作為臨床監(jiān)測指標。

綜上所述，胃癌患者外周血HLA-DR－CD11b+CD33+MDSCs表達可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，MDSCs有可能成為評估胃癌預后的指標。關于具體的機制研究還需進一步探討。

[1]Gabrilovich DI，Nagaraj S.Myeloid-derived-suppressor cells as regulators of the immune system[J].Net Rev Immunol，2009，9(3)：162-174.

[2]Talmadge JE，Gabrilovich DI.History of myeloid derived suppressor cells(MDSCs)in the macro-and micro-environment of tumourbearing hosts[J].Nat Rev Cancer，2013，13(10)：739-753.

[3]Alizadeh D，Trad M，Hanke NT，et al.Doxorubicin eliminates myeloid-derived suppressor cells and enhances the efficacy of adoptive T-cell transfer in breast cancer[J].Cancer Res，2014，74(1)：104-118.

[4]Kawano M，Mabuchi S，Matsumoto Y，et al.The significance of GCSF expression and myeloid-derived suppressor cells in the chemoresistance of uterine cervical cancer[J].Sci Rep-uk，2015，5：18217-18217.

[5]Wu P，Wu D，Ni C，et al. γδT17 cells promote the accumulation and expansion of myeloid-derived suppressor cells in human colorectal cancer[J].Immunity，2014，40(5)：785-800.

[6]歐陽騫，陳慧娟，徐芳菲，等.辛伐他汀誘導胃癌BGC-823細胞凋亡的效應研究[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2017，35(6)：842-844.

[7]Lee K，Hwang H，Nam KT.Immune response and the tumor microenvironment：how they communicate to regulate gastric cancer[J].GUT LIVER，2014，8(2)：131-139.

[8]祝仲珍，王占科，傅穎媛.腫瘤患者自體外周血CIK/DC-CIK細胞培養(yǎng)制備技術及臨床應用研究進展 [J].實驗與檢驗醫(yī)學，2015，33(3)：300-303.

[9]朱紅勝，胡紅心，劉萊，等.胃腸道惡性腫瘤患者外周血髓源抑制細胞的檢測[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2013，31(6)：554-555+558.

[10]Sinha P，Okoro C，F(xiàn)oell D，et al.Proinflammatory S100 proteins regulate the accumulation of myeloid-derived suppressor cells[J].J Immunol，2008，181(7)：4666-4675.

[11]Feng PH，Lee KY，Chang YL，et al.CD14+S100A9+monocytic myeloid-derived suppressor cells and their clinical relevance in non-small cell lung cancer[J].AM J Resp Crit Care，2012，186(10)：1025-1036.

[12]Sun HL，Zhou X，Xue YF，et al.Increased frequency and clinical significance of myeloid－derived suppressor cells in human colorectal carcinoma[J].World J Gastroentero：WJG，2012，18(25)：3303－3309.

[13]Eruslanov E，Neuberger M，Daurkin I，et al.Circulating and tumor－infiltrating myeloid cell subsets in patients with bladder cancer[J].Int J Cancer，2012，130(5)：1109－1119.

[14]Gros A，Turcotte S，Wunderlich JR，et al.Myeloid cells obtained from the blood but not from the tumor can suppress T－cell proliferation in patients with melanoma[J].Clin Cancer Res，2012，18(19)：5212－5223.

[15]Diaz－Montero CM，Salem ML，Nishimura MI，et al.Increased circulating myeloid－derived suppressor cells correlate with clinical cancer stage，metastatic tumor burden，and doxorubicin－cyclophosphamide chemotherapy[J].Cancer Immunol Immun，2009，58(1)：49－59.