輕型復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍患者機體總氧化/抗氧化狀態(tài)的研究

張子川 王鴻雁 陳光 吳仲寅 方會清

[摘要] 目的 比較輕型復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍患者與健康人群的機體總氧化狀態(tài)（TOS）和抗氧化狀態(tài)（TAS）的血清含量，探討TOS和TAS與復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍發(fā)病機制間是否存在相關(guān)性。 方法 選取2015年3月～2016年12月在白求恩國際和平醫(yī)院（以下簡稱“我院”）口腔科確診的97例輕型復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍（MiRAU）患者（觀察組）和同期來我院的102名無MiRAU的健康體檢者（對照組）為研究對象。采用色度法檢測兩組受試者TOS、TAS、丙二醛（MDA）和尿酸（UA）的血清含量，并對兩組受試者的氧化應(yīng)激指數(shù)（OSI）進行比較。 結(jié)果 觀察組TOS和MDA的血清含量以及OSI值均高于對照組，僅TAS的血清含量低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。兩組受試者UA血清含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 機體的氧化應(yīng)激狀態(tài)可能與RAU的發(fā)病機制有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍；總氧化狀態(tài)；總抗氧化狀態(tài)；色度法

[中圖分類號] R781.5 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）04（c）-0110-04

A study of the total serum oxidant/antioxidant status in patients with minor recurrent aphthous ulcer

ZHANG Zichuan1 WANG Hongyan2 CHEN Guang1 WU Zhongyin1 FANG Huiqing1

1.Department of Stomatology， Bethune International Peace Hospital， Hebei Province， Shijiazhuang 050082， China； 2.Hebei Provincial Institute of Medical Information， Hebei Province， Shijiazhuang 050000， China

[Abstract] Objective To investigate the serum content of total oxidant status （TOS） and total antioxidant status （TAS） in patients with minor recurrent aphthous ulcer （MiRAU） and compare them versus healthy individuals， and then to analyze that whether there is a possible relationship between TOS/TAS and the pathogenesis of RAU. Methods Ninety-seven patients having been diagnosed with minor recurrent aphthous ulcer （MiRAU） who presented in the Department of Stomatology of Bethune International Peace Hospital （"our hospital" for short） from March 2015 to December 2016 and 102 healthy persons being taken normal medical examination in our hospital were selected as observation group and control group respectively. The serum content of TOS， TAS， malondialdehyde （MDA） and uric acid （UA） were measured by the colorimetric measurement method， and then the oxidative stress index （OSI） being calculated were compared. Results The serum content of TOS and MDA and the value of OSI in the observation group were all higher than those in the control group， while the serum content of TAS was lower than that of the control group， with statistically significant difference （P < 0.05）. No statistically significant differences were found between the two groups in the serum content of the UA （P > 0.05）. Conclusion The oxidative stress status seems to have certain correlation with the pathogenesis of recurrent aphthous ulcer.

[Key words] Recurrent aphthous ulcer； Total oxidant status； Total antioxidant status； Colorimetric measurement method

復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍（recurrent aphthous ulcer，RAU）是一種常見的病因不明的口腔黏膜疾病，以周期性發(fā)作和燒灼性疼痛為其典型的臨床特點[1-2]。早在1972年，Stanley等依據(jù)潰瘍的大小、深淺及數(shù)目不同，將其分為輕型、重型和皰疹型[3]。其中，輕型復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍（minor recurrent aphthous ulcer，MiRAU）最為常見，約占RAU的80%[3-4]。本課題組前期的研究結(jié)果已證明，MiRAU患者發(fā)病時機體的抗氧化酶類和非酶類分子發(fā)生了變化，但是這并不能夠反映出患者機體的氧化應(yīng)激狀態(tài)[5-6]。因此，本研究通過比較健康人群和MiRAU患者發(fā)病期時機體總氧化狀態(tài)（total oxidant status，TOS）、總抗氧化狀態(tài)（total antioxidant status，TAS）以及丙二醛（malondialdehyde，MDA）和尿酸（uric acid，UA）的血清含量，探討其與RAU發(fā)病機制間是否存在著某種關(guān)聯(lián)性，為預(yù)防和治療RAU提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3月～2016年12月在白求恩國際和平醫(yī)院（以下簡稱“我院”）口腔科確診為MiRAU的患者97例（男42例，女55例）為觀察組，平均年齡（31.38±6.22）歲，所有患者均由同一名口腔黏膜病專業(yè)的主任醫(yī)師確診。以同期我院的健康體檢者102名（男50名，女52名）為對照組，平均年齡為（29.83±5.79）歲。兩組受試者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①MiRAU患者無明顯原因的口腔潰瘍每年發(fā)病至少3次；②所有受試者的血常規(guī)、血凝、血沉、血糖、血脂、肝腎功能、促甲狀腺激素、電解質(zhì)、C反應(yīng)蛋白、球蛋白、白蛋白、葉酸、維生素，以及鈉、鉀、鈣、鐵、磷等檢測結(jié)果均在正常范圍內(nèi)；③3個月內(nèi)未服用維生素類、甾類化合物、免疫調(diào)節(jié)類等藥物；④無吸毒、吸煙、酗酒等不良嗜好。⑤女性受試者均未在月經(jīng)期、懷孕期和哺乳期。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有糖尿病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、冠心病、白塞病、周期性中性粒細(xì)胞減少癥等全身系統(tǒng)性疾病的患者；②患有白斑、紅斑、單純皰疹病毒感染、皰疹性咽峽炎、扁平苔癬、紅斑狼瘡、天皰瘡等口腔黏膜疾病的患者；③口內(nèi)余留牙有銳角銳邊，或存在活動性牙齦炎以及牙周炎的患者。本研究獲得我院臨床研究醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：2014-12-8號），所有受試者均簽署了臨床科研知情同意書。

1.2 研究方法

所有受試者禁食10～12 h后，抽取清晨空腹靜脈血5 mL，置于無任何抗凝血劑的真空管中，在4℃環(huán)境下以3000 r/min的速率離心5 min，離心半徑15 cm，取上層血清液置于-80℃冰箱中保存。以采用分光光度計（Alpha-1106，上海譜元儀器有限公司）對受試者機體的TOS、TAS、MDA和UA血清含量進行檢測，并計算氧化應(yīng)激指標(biāo)（oxidative stress index，OSI）。

依據(jù)商品化MDA和UA檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）中的使用說明書測定受試者體內(nèi)MDA和UA的血清含量，其中MDA的計量單位為nmol/mL，UA的計量單位為mg/L。測定機體TOS血清含量的原理[7]：血清樣本中所含有的氧化劑能夠?qū)嗚F離子（Fe2+）氧化成為鐵離子（Fe3+）。酸性環(huán)境下，F(xiàn)e3+能與二甲苯酚橙發(fā)生化學(xué)反應(yīng)形成有顏色的復(fù)合物。采用分光光度計測量色彩的強度值，據(jù)此計算樣本中該復(fù)合物的濃度和氧化劑的含量。TOS的計量單位為μmol H2O2 Eq/L。測定機體TAS血清含量的原理是基于樣本中的抗氧化劑能夠漂白有顏色的2，2'氨基-二（3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6）銨鹽（ABTS），根據(jù)色彩強度的變化推算抗氧化劑的含量[8]。TAS的計量單位為mmol Trolox Eq/L。OSI是反映機體氧化應(yīng)激狀態(tài)的重要指標(biāo)，其計算公式如下[9]：

OSI=TOS（μmol H2O2 Eq/L）/TAS（mmol Trolox Eq/L）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組TOS和MDA的血清含量以及OSI值均顯著高于對照組，TAS的血清含量顯著低于對照組（P < 0.05）。兩組受試者UA的血清含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

3 討論

RAU是一種常見的周期性發(fā)作的炎癥性口腔黏膜疾病，具有自限性，好發(fā)于唇、頰、舌、口底等部位[1-4]。該病通常始發(fā)于兒童、青少年或30歲以下的年輕人，其中兒童發(fā)病率可高達39%，隨著年齡的增長該病發(fā)病率及嚴(yán)重程度呈減小趨勢[10]。臨床上最常見的是MiRAU，因此本研究中觀察組受試者均為已確診的MiRAU患者。

多年來，國內(nèi)外研究人員進行了大量的實驗，以期能夠發(fā)現(xiàn)RAU的發(fā)病機制與致病因素。盡管研究結(jié)果顯示，局部創(chuàng)傷、吸煙、營養(yǎng)缺乏、病毒或細(xì)菌感染、心理應(yīng)激、激素失調(diào)、遺傳因素、食物或藥物過敏、免疫因素、各種系統(tǒng)性疾病等均可導(dǎo)致RAU[11-12]，但確切病因至今仍不明確。氧化應(yīng)激（oxidative stress，OS）是指當(dāng)機體受到多種因素刺激后，體內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）的含量增多，超過正常的生理范圍，從而破壞了氧化劑與抗氧化劑間正常的動態(tài)平衡，導(dǎo)致細(xì)胞和細(xì)胞外生物大分子（蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等）的結(jié)構(gòu)被修改，繼而其功能受損，最終致使機體進入一種嚴(yán)重的、易受損的應(yīng)激狀態(tài)[5-6]。已有研究表明，過量的ROS可能與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，諸如糖尿病、炎癥、癌癥、心血管疾病、牙周炎、白塞病、紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化癥等[13-19]。

為了預(yù)防過量自由基導(dǎo)致的氧化損傷，機體存在兩類抗氧化防御系統(tǒng)，一類是抗氧化物酶，比如：超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶等；另一類是非酶類抗氧化分子，比如谷胱甘肽，褪黑激素，尿酸，維生素A、B12、C、E等[5-6]。目前，各種自由基和抗氧化物血清含量的測試方法及所需試劑盒均已商品化，但是單獨測量某種或者某幾種物質(zhì)的血清含量，僅能證明所測物的水平，無法反映機體整體的氧化、抗氧化狀態(tài)。已有研究報道，血液或組織樣本中多種抗氧化物酶或抗氧化分子的作用具有累加效果，而檢測TAS的血清含量能夠準(zhǔn)確的反映機體總的抗氧化狀態(tài)[8]。同理，TOS也反映了機體各種氧化物（過氧化氫、脂質(zhì)過氧化氫、活性氧、活性氮等）累積的氧化效果[7]。因此，本研究采用色度法測定MiRAU患者潰瘍發(fā)作時TAS和TOS的血清含量，并將其與健康人群的TAS和TOS含量進行比較，從而整體觀察兩組受試人群的氧化應(yīng)激狀態(tài)。