HPLC法同時(shí)測(cè)定阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素及苯扎氯銨的含量

程紅

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了阿奇霉素滴眼液中苯扎氯銨和阿奇霉素的含量，固定相為：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18液相色譜柱，以乙腈-磷酸鹽緩沖液（取0.05 mol·L-1磷酸氫二鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH至8.2）（60∶40）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；阿奇霉素在0.8～4.0mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；苯扎氯銨在4.0～6.0mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。阿奇霉素和苯扎氯銨的平均回收率分別為99.5%、99.4%，RSD為0.83%（n=6）、0.73%（n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素和苯扎氯銨的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：阿奇霉素滴眼液；阿奇霉素；苯扎氯銨

阿奇霉素是在紅霉素結(jié)構(gòu)上修飾后得到的一種廣譜抗生素。苯扎氯銨（Benzalkonium chloride）化學(xué)名稱為氯化二甲基芐基烴銨，白色蠟狀固體或黃色膠狀體。苯扎氯銨重要的陽(yáng)離子季銨鹽表面活性劑，屬非氧化性殺菌劑，具有廣譜、高效的殺菌滅藻能力，廣泛用于皮膚和手術(shù)器械的消毒，也廣泛用于殺菌、消毒、防腐、去垢、增溶等方面。阿奇霉素滴眼液適用于治療由棒狀桿菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、緩癥鏈球菌組、肺炎鏈球菌的敏感株所引起的細(xì)菌性結(jié)膜炎。本文采用高校液相測(cè)定了阿奇霉素滴眼液中苯扎氯銨和阿奇霉素的含量。

1儀器與試藥

LC-100高效液相色譜系統(tǒng)（西安禾普生物科技有限公司）；ZYYLFS-5000L/D驗(yàn)室廢水處理、醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室廢水處理（四川卓越水處理設(shè)備有限公司）；PH-660高精度實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）；HWP-5實(shí)驗(yàn)室蒸餾水器（鄭州澤銘科技有限公司）；上海721G可見光分光光度計(jì)（上海圣科儀器設(shè)備有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三頻恒溫?cái)?shù)控超聲波清洗器（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；PH-660高精度實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）。阿奇霉素和苯扎氯銨對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。磷酸二氫鈉（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、磷酸（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、磷酸二氫銨（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、甲酸（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、乙腈（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、三乙胺（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、甲醇（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）。

2含量測(cè)定

2.1色譜條件：確定色譜條件如下[1-5]。Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18液相色譜柱；以乙腈-磷酸鹽緩沖液（取0.05 mol·L-1磷酸氫二鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH至8.2）（60∶40）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；流速0.8mL·min-1。

2.2供試品溶液的制備

取阿奇霉素滴眼，精密量取，置10毫升容量瓶?jī)?nèi)，用流動(dòng)相定容，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.3對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取苯扎氯銨和阿奇霉素對(duì)照品20mg、50mg，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為0.8毫克每毫升、1.2毫克每毫升、1.6毫克每毫升、2.0毫克每毫升、2.4毫克每毫升、2.8毫克每毫升、3.2毫克每毫升、3.6毫克每毫升、4.0毫克每毫升的阿奇霉素對(duì)照品溶液，制備濃度為4.0毫克每毫升、4.4毫克每毫升、4.8毫克每毫升、5.2毫克每毫升、5.6毫克每毫升、6.0毫克每毫升的苯扎氯銨對(duì)照品溶液。分別按阿奇霉素、苯扎氯銨的測(cè)定參數(shù)繼續(xù)測(cè)定。以吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，阿奇霉素在0.8～4.0毫克每毫升范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；苯扎氯銨在4.0～6.0毫克每毫升范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

取阿奇霉素和苯扎氯銨對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD分別為0.82%和0.83%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.6重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批阿奇霉素滴眼液樣品6份，測(cè)定含量并計(jì)算樣品的RSD值，RSD值為0.89%，0.79%，結(jié)果表明，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品溶液，分別在0，2，4小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，供試品阿奇霉素和苯扎氯銨峰面積的RSD分別為0.80%和0.72%。結(jié)果表明阿奇霉素和苯扎氯銨至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.8回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，分精密添加一定量的阿奇霉素和苯扎氯銨對(duì)照品，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率分別為99.5%和99.4%，RSD分別為0.83%和0.73%。

2.9樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，三批樣品的阿奇霉素和苯扎氯銨的含量分別為100.1%、99.8%、101.1%；100.3%、100.8%、101.1%。

3討論

分別考察0.01mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（用氫氧化鈉調(diào)節(jié)p H值至6.1）-乙腈（55∶45）；乙腈一水一冰醋酸（15：85：0.1）；乙腈-0.1%甲酸溶液（13∶87）；乙腈-0.05%磷酸二氫鈉-三乙胺-磷酸（50：50：0.01：0.01），甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶10∶15），乙腈-磷酸鹽緩沖液（取0.05 mol·L-1磷酸氫二鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH至8.2）（60∶40），甲醇-0.08%磷酸溶液（25：75），甲醇-0.1%磷酸（70∶30），乙腈-磷酸鹽緩沖液（取0.05 mol·L-1磷酸氫二鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH至8.2）70∶30），水-甲醇-磷酸（10：90：0.01）為流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-磷酸鹽緩沖液（取0.05 mol·L-1磷酸氫二鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH至8.2）（60∶40）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好。

參考文獻(xiàn)：

[1]洪博，郭允，李明銘，李丹，曲龍妹，張?jiān)虑?，趙春杰.阿奇霉素干混懸劑的人體藥動(dòng)學(xué)及生物等效性研究[J].中國(guó)藥房. 2009（08）

[2]姜建國(guó)，張西茹，楊梁，吳如金.高效液相色譜法分離測(cè)定阿奇霉素及其相關(guān)物質(zhì)[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué).2003（05）

[3]劉葆林.微生物法和高效液相色譜法測(cè)定注射用阿奇霉素含量的比較[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2000（05）

[4]劉紅梅，李欣，方光娟.反相高效液相色譜法測(cè)定乳糖酸阿齊霉素注射劑的含量[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2000（03）

[5]潘強(qiáng)，張寧蘇，易大為，王巍，趙曉東.復(fù)方阿奇霉素葡萄糖注射液中阿奇霉素的HPLC測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志.2005（02）