• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    康復(fù)新液對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5纖維化模型的干預(yù)作用

    2018-06-12 03:09:44徐秋穎劉偉偉王寶家馬秀英高永翔
    關(guān)鍵詞:新液肺纖維化纖維細(xì)胞

    徐秋穎,劉偉偉,王寶家,馬秀英,高永翔*

    (1.成都中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,四川 成都 610075;2.藥用美洲大蠊四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川 成都 610000)

    肺纖維化(pulmonary fibrosis)發(fā)生于許多不同病因引發(fā)的肺間質(zhì)疾病,生理特點(diǎn)表現(xiàn)為肺泡持續(xù)性損傷、成纖維細(xì)胞(fibroblast)增殖及大量細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)沉積,從而導(dǎo)致肺組織反復(fù)破壞、修復(fù),最終造成肺組織中的大量膠原沉積[1].康復(fù)新液是由美洲大蠊(PeriplanetaamericanaL.)干燥蟲(chóng)體的乙醇提取物制成的溶液,其主要成分包括氨基酸(17種以上,包含人體必需氨基酸)、多肽(抗菌肽、咽側(cè)體抑制神經(jīng)肽、焦激肽等)、多糖(硫酸黏多糖等)、核苷(次黃嘌呤、尿嘧啶等)及油脂等[2].《神農(nóng)本草經(jīng)》記載其“味咸、寒,生川澤,治血癖癥堅(jiān)、寒熱,破積聚,喉咽痹,內(nèi)寒無(wú)子”.康復(fù)新液可“通利血脈,養(yǎng)陰生肌”,內(nèi)服可治消化道出血與潰瘍等,外用可療金瘡、外傷等,具有改善黏膜創(chuàng)面微循環(huán)、加速機(jī)體病損組織修復(fù)再生、增強(qiáng)免疫力等功能.已有研究顯示康復(fù)新液可以改善實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎,治療小兒手足口病、帶狀皰疹、干癥、頭頸部惡性腫瘤等[3].隨著臨床使用康復(fù)新液的范圍不斷擴(kuò)大,其更多藥效有待挖掘,而目前尚無(wú)關(guān)于其應(yīng)用于肺纖維化治療的報(bào)道.

    在肺纖維化的進(jìn)程中,許多因子參與調(diào)控,其中最重要的是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor,TGF)-β1[4-5],它可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的遷移、增殖及其向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,加速ECM的過(guò)度分泌,逐漸以纖維組織取代正常的肺組織,對(duì)肺功能造成不可逆的破壞.結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)是TGF-β1誘導(dǎo)的早期基因表達(dá)產(chǎn)物,在病理狀態(tài)下,纖維化組織中CTGF的表達(dá)量會(huì)明顯增加[6].這個(gè)過(guò)程中肌成纖維細(xì)胞會(huì)表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)這種獨(dú)特的分子[7],而α-SMA增多可明顯增強(qiáng)肌成纖維細(xì)胞的遷移及收縮能力,進(jìn)而增強(qiáng)ECM的合成和分泌.ECM的主要成分是纖維連接蛋白(fibronectin,FN)和層黏連蛋白(laminin,LN),其中FN可以誘導(dǎo)膠原的形成,從而導(dǎo)致臟器的纖維化[8].FN、LN及膠原的合成增多、降解減少會(huì)導(dǎo)致ECM的過(guò)度積聚,進(jìn)而導(dǎo)致纖維化.肺纖維化時(shí)還會(huì)出現(xiàn)基底膜增厚,這主要與FN和Ⅰ型膠原蛋白(CollagenⅠ)表達(dá)明顯增加有關(guān)[9].本研究選取α-SMA、LN、FN、CTGF、CollagenⅠ、Ⅲ型膠原蛋白(CollagenⅢ)這6種反映肺纖維化程度的因子,作為檢測(cè)康復(fù)新液對(duì)肺纖維化是否有效的客觀(guān)指標(biāo).通過(guò)肺纖維化中的關(guān)鍵因子TGF-β1誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞(human fetal lung fibroblast)MRC-5細(xì)胞系,構(gòu)建細(xì)胞纖維化模型.驗(yàn)證此模型成功后,運(yùn)用CCK-8(cell counting kit-8)法檢測(cè)康復(fù)新液對(duì)MRC-5細(xì)胞的毒性,得出康復(fù)新液對(duì)MRC-5細(xì)胞的最高不致死給藥濃度.進(jìn)而使用此安全濃度干預(yù)TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞纖維化,從而在細(xì)胞層面實(shí)現(xiàn)康復(fù)新液治療肺纖維化的有效性驗(yàn)證,旨在擴(kuò)大中成藥康復(fù)新液的適應(yīng)范圍,從干預(yù)肺纖維化的角度對(duì)其進(jìn)行二次開(kāi)發(fā).

    1 材料與方法

    1.1 細(xì)胞系

    MRC-5細(xì)胞來(lái)源于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù),使用MEM(minimum essential medium)培養(yǎng)基(Gibco,41500034),添加10%(體積分?jǐn)?shù))胎牛血清(Gibco,10099-141),于37 ℃、5%(體積分?jǐn)?shù))二氧化碳的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),5~7 d傳代,按1瓶細(xì)胞傳2~3瓶的比例進(jìn)行.

    1.2 試劑及耗材

    實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)試劑Realtime PCR Master Mix(QPK-201)、反轉(zhuǎn)錄試劑ReverTra Ace?qPCR RT Master Mix(FSQ-201)購(gòu)自ToYoBo公司,RNA抽提試劑TRIzolTMPlus RNA Purification Kit(12183555)購(gòu)自Invitrogen公司.地塞米松(Dexamethasone,DXM;5 mg/mL,02138)購(gòu)自西南藥業(yè)股份有限公司.LN抗體(ab11575)、FN抗體(ab2413)、α-SMA抗體(ab124964)購(gòu)自Abcam公司,CTGF抗體(86641)購(gòu)自CST公司,CollagenⅠ抗體(14695-1-AP)購(gòu)自Proteintech公司,CollagenⅢ抗體(OM275892)購(gòu)自O(shè)mnimabs公司,內(nèi)標(biāo)甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)抗體(200306-7E4)、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗鼠(511103)與羊抗兔(511203)二抗購(gòu)自Zen-bioscience公司.無(wú)水乙醇、三氯甲烷、異丙醇等均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?所用耗材均購(gòu)自生工生物工程(上海)股份有限公司,為一次性無(wú)RNA酶耗材.

    1.3 主要設(shè)備和儀器

    qRT-PCR儀(CFX96,Bio-Rad公司)、離心機(jī)(5415D,Eppendorf公司)、微量分光光度計(jì)(NanoDrop 2000,Thermo Fisher公司)、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(Multiskan Spectrum,Thermo Fisher公司),高速冷凍離心機(jī)(Legend Microfuge 22R Centrifuge,Thermo Fisher公司).

    1.4 引 物

    本研究中所使用的引物由成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司合成,序列見(jiàn)表1.

    表1 引物及其序列

    1.5 MRC-5細(xì)胞纖維化模型的建立與檢測(cè)

    MRC-5細(xì)胞接種24 h后加入TGF-β1(10 ng/mL)進(jìn)行誘導(dǎo)[10],分別在0,48與72 h取樣;使用TRIzolTMPlus RNA Purification Kit進(jìn)行RNA抽提,測(cè)定RNA濃度及純度,并用反轉(zhuǎn)錄試劑ReverTra Ace?qPCR RT Master Mix按照1 μg/10 μL體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄;之后以GAPDH為內(nèi)參,于qRT-PCR儀檢測(cè)α-SMA、LN、FN、CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ的mRNA表達(dá)水平.20 μL反應(yīng)體系:SYBR(2×)10 μL,上、下游引物各0.8 μL,cDNA模板2 μL,無(wú)核酸酶水6.4 μL.反應(yīng)程序:95 ℃預(yù)變性30 s;95 ℃變性 5 s,60 ℃退火延伸30 s,40個(gè)循環(huán).以2-ΔΔCt法進(jìn)行mRNA相對(duì)表達(dá)水平的分析.

    1.6 CCK-8法檢測(cè)

    在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中按照每孔細(xì)胞數(shù)104接種,24 h后分別加入10倍、20倍、40倍、80倍、160倍及320倍稀釋的康復(fù)新液(使用完全培養(yǎng)基稀釋),同時(shí)設(shè)置不加藥對(duì)照;培養(yǎng)72 h后加入1/10培養(yǎng)基體積的CCK-8試劑,繼續(xù)培養(yǎng)1 h,采用酶標(biāo)儀記錄450 nm的吸光度,繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn).

    1.7 康復(fù)新液干預(yù)

    *p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,下同.圖1 TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞纖維化模型中纖維化指標(biāo)的mRNA相對(duì)表達(dá)水平Fig.1 Relative mRNA expression levels of fibrosis indexes in the MRC-5 cell fibrosis model induced by TGF-β1

    在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中按照每孔細(xì)胞數(shù)105接種,細(xì)胞貼壁后加入10 ng/mL的TGF-β1進(jìn)行纖維化誘導(dǎo),24 h后加入最高不致死給藥濃度的康復(fù)新液進(jìn)行干預(yù);在干預(yù)24,48與72 h時(shí)取樣,用于qRT-PCR與蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blotting,WB)檢測(cè),同時(shí)設(shè)置DXM(50 μg/mL)陽(yáng)性對(duì)照組,處理72 h后取樣.分別檢測(cè)α-SMA、LN、FN、CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ及GAPDH(內(nèi)參)的表達(dá)量.qRT-PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)程序參照1.5小節(jié)步驟.WB操作如下:使用磷酸鹽緩沖液(PBS)輕輕洗滌細(xì)胞樣品3次,加入含蛋白酶抑制劑的RIPA(radio immunoprecipitation assay)裂解液,4 ℃裂解20 min,12 000 r/min離心5 min后收取上清;BCA(bicinchoninic acid)法測(cè)定蛋白濃度,十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離條帶,濕轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯膜,5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))牛血清白蛋白封閉1 h后加入一抗,4 ℃孵育過(guò)夜;含0.5%(體積分?jǐn)?shù))吐溫-20的Tris-鹽酸緩沖液(TBST)洗滌3次后加入HRP標(biāo)記二抗,37 ℃孵育1 h后用TBST洗滌3次;加入增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物發(fā)光液,于化學(xué)發(fā)光成像儀下拍照.

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié)果與分析

    2.1 TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞纖維化模型檢測(cè)

    以10 ng/mL TGF-β1處理MRC-5細(xì)胞,通過(guò)qRT-PCR分別檢測(cè)0,48,72 h后α-SMA、LN、FN、CTGF、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ這6個(gè)特異性纖維化指標(biāo)的mRNA相對(duì)表達(dá)水平,結(jié)果如圖1所示:FN、CTGF、CollagenⅢ的mRNA相對(duì)表達(dá)水平在48 h出現(xiàn)顯著升高,α-SMA、LN、CollagenⅠ的mRNA相對(duì)表達(dá)水平則在72 h出現(xiàn)顯著升高,可見(jiàn)MRC-5細(xì)胞在TGF-β1誘導(dǎo)下48 h時(shí)出現(xiàn)纖維化,72 h時(shí)纖維化充分,呈現(xiàn)出一定的時(shí)間依賴(lài)性,說(shuō)明72 h時(shí)此模型誘導(dǎo)成功.

    2.2 康復(fù)新液對(duì)MRC-5細(xì)胞的毒性檢測(cè)

    1.空白對(duì)照;2.TGF-β1誘導(dǎo)模型;3~5.康復(fù)新液干預(yù)24,48,72 h;6.DXM陽(yáng)性對(duì)照(下同).圖3 康復(fù)新液干預(yù)不同時(shí)間后TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5纖維化細(xì)胞模型中纖維化指標(biāo)的mRNA表達(dá)水平Fig.3 Relative mRNA expression levels of fibrosis indexes after Kangfuxin liquid treatment on the MRC-5 cell fibrosis model for different time

    通過(guò)CCK-8法檢測(cè)不同稀釋倍數(shù)的康復(fù)新液對(duì)MRC-5細(xì)胞的毒性,結(jié)果見(jiàn)圖2:MRC-5細(xì)胞在10~40倍稀釋的康復(fù)新液作用下增殖受強(qiáng)烈抑制,在80倍稀釋的康復(fù)新液作用下有明顯增殖,160倍及以上稀釋的康復(fù)新液作用下與空白對(duì)照基本一致.由此可見(jiàn)最高不致死給藥濃度為80倍稀釋,因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)中使用80倍稀釋作為康復(fù)新液的處理濃度.

    圖2 CCK-8法檢測(cè)康復(fù)新液對(duì)MRC-5細(xì)胞的毒性Fig.2 Toxic effects of Kangfuxin liquid on MRC-5 cells by CCK-8 assay

    2.3 康復(fù)新液對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞纖維化模型的干預(yù)

    以80倍稀釋的康復(fù)新液干預(yù)TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞纖維化模型,干預(yù)時(shí)間分別為24,48和72 h,通過(guò)qRT-PCR儀檢測(cè)6個(gè)特異性纖維化指標(biāo)的mRNA相對(duì)表達(dá)水平,比較干預(yù)不同時(shí)間的效果差別,結(jié)果如圖3所示:空白對(duì)照組和TGF-β1誘導(dǎo)模型組比較有顯著差異;康復(fù)新液干預(yù)組與TGF-β1誘導(dǎo)模型組比較,干預(yù)24 h時(shí)mRNA相對(duì)表達(dá)水平均出現(xiàn)顯著下調(diào);康復(fù)新液干預(yù)組72 h時(shí)與DXM陽(yáng)性對(duì)照組相比,α-SMA和FN的mRNA相對(duì)表達(dá)無(wú)顯著差異,其他纖維化指標(biāo)的mRNA相對(duì)表達(dá)水平顯著高于DXM陽(yáng)性對(duì)照組,但也顯著低于TGF-β1誘導(dǎo)模型組.上述結(jié)果表明80倍稀釋的康復(fù)新液可以有效降低TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞纖維化模型中纖維化指標(biāo)的mRNA表達(dá)水平.

    進(jìn)而通過(guò)WB方法檢測(cè)康復(fù)新液干預(yù)不同時(shí)間后TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞纖維化模型中上述6個(gè)特異性纖維化指標(biāo)的蛋白表達(dá)水平,結(jié)果如圖4所示:TGF-β1誘導(dǎo)模型組和空白對(duì)照組相比,各蛋白表達(dá)水平均上調(diào),說(shuō)明造模成功;康復(fù)新液干預(yù)組與TGF-β1誘導(dǎo)模型組相比,α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ蛋白表達(dá)水平在24~72 h持續(xù)降低,LN、FN和CTGF蛋白表達(dá)水平在48 h出現(xiàn)明顯降低;康復(fù)新液干預(yù)組與DXM陽(yáng)性對(duì)照組相比,72 h時(shí)康復(fù)新液干預(yù)組中α-SMA、LN、FN和CollagenⅢ蛋白表達(dá)水平略高,CTGF和CollagenⅠ蛋白表達(dá)水平相當(dāng).所得結(jié)果與qRT-PCR儀檢測(cè)的趨勢(shì)基本一致,表明康復(fù)新液干預(yù)可以有效降低這些纖維化指標(biāo)的蛋白表達(dá)水平.

    圖4 康復(fù)新液干預(yù)不同時(shí)間后TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞纖維化模型中纖維化指標(biāo)的蛋白表達(dá)水平Fig.4 Relative protein expression levels of fibrosis indexes after Kangfuxin liquid treatment on the MRC-5 cell fibrosis model for different time

    3 討 論

    在世界范圍內(nèi),組織器官纖維化是許多疾病致殘、致死的主要原因.有關(guān)統(tǒng)計(jì)表明,特發(fā)性肺纖維化的患者從疾病診斷到死亡的時(shí)間僅2~5年,5年生存率僅20%[11].臨床上這類(lèi)患者大都會(huì)使用糖皮質(zhì)激素治療,但是糖皮質(zhì)激素只對(duì)1/3的患者有一定的療效,并且長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素會(huì)出現(xiàn)很多不良反應(yīng),如庫(kù)欣綜合征、機(jī)體免疫力下降、傷口難愈合等[12].雖然2014年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)已批準(zhǔn)肺纖維化的藥物吡非尼酮(pirfenidone)和尼達(dá)尼布(nintedanib)用于臨床,但這兩種藥物只能延緩疾病進(jìn)程,對(duì)肺纖維化并沒(méi)有實(shí)質(zhì)的治療作用,加之進(jìn)口藥品價(jià)格不菲,難以被患者接受,臨床上使用的安全及有效性仍需要更多的數(shù)據(jù)支持[13].目前國(guó)際公認(rèn)的最有效治療方式是肺移植,但是肺移植存在肺供體少、手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)大、技術(shù)要求高、價(jià)格昂貴等缺點(diǎn),很難在肺纖維化的治療中廣泛選用.因此,拓展新的治療措施并在臨床上推廣有重要的意義.

    肺纖維化的形成過(guò)程中,成纖維細(xì)胞在TGF-β1的刺激作用下被激活并轉(zhuǎn)化成肌成纖維細(xì)胞.而肌成纖維細(xì)胞的胞漿豐富,能夠分泌膠原的同時(shí)還具有收縮功能,具備成纖維細(xì)胞和平滑肌的雙重特性,是造成ECM異常沉積的主要細(xì)胞[14].因此肺成纖維細(xì)胞不斷增殖并向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化是肺纖維化發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵所在.

    本研究成功構(gòu)建了TGF-β1誘導(dǎo)的MRC-5細(xì)胞纖維化模型,經(jīng)檢測(cè)纖維化特征性因子α-SMA、LN、FN、CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ在建模中的mRNA表達(dá)水平均有所上調(diào).以80倍稀釋的康復(fù)新液干預(yù)此模型后,上述指標(biāo)因子的mRNA和蛋白表達(dá)水平均有所下調(diào),表明康復(fù)新液對(duì)MRC-5細(xì)胞纖維化模型可起到有效的干預(yù)作用,效果與DXM相當(dāng),為抗纖維化的藥物開(kāi)發(fā)提供了新的思路和方向.但本研究也存在一定的局限性,即本研究中MRC-5細(xì)胞來(lái)源于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù),經(jīng)過(guò)多次培養(yǎng)后細(xì)胞的增殖及可誘導(dǎo)性都有所下降,因此臨床上康復(fù)新液用于肺纖維化患者的效果還有待進(jìn)一步驗(yàn)證.

    [1] 徐慧蓉,馬小兵,王獻(xiàn)華.肺纖維化相關(guān)因子研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2011,38(10):1953-1955.

    [2] 李奇娟,王戰(zhàn)國(guó),劉巧,等.美洲大蠊研究現(xiàn)狀及其研究中關(guān)鍵問(wèn)題分析與展望[J/OL].中國(guó)中藥雜志,2018.[2018-02-10].https:∥www.cnki.net/kcms/doi/10.19540/j.cnki.cjcmm.20180201.009.

    [3] 陳新,王洪,張艷萍.康復(fù)新液的最新臨床應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2016,6(17):89-96.

    [4] THIERY J P,ACLOQUE H,HUANG R Y,et al.Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease[J].Cell,2009,139(5):871-890.

    [5] RADISKY D C,LEVY D D,LITTLEPAGE L E,et al.Rac1b and reactive oxygen species mediate MMP-3-induced EMT and genomic instability[J].Nature,2005,436(47):123-127.

    [6] 劉森炎,錢(qián)一欣,卞蓉蓉,等.結(jié)締組織生長(zhǎng)因子通過(guò)上調(diào)腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶和Ⅲ型膠原蛋白促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化[J].上海醫(yī)學(xué),2017,40(3):173-178.

    [7] 滕立霞,于俊生.升降散對(duì)系膜增生性腎小球腎炎大鼠腎組織CTGF及α-SMA表達(dá)的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2011,29(6):1358-1360.

    [8] 陳春宇,陳志強(qiáng).化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠腎組織纖維連接蛋白和層粘連蛋白的影響[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2015,27:2134-2137.

    [9] 郭治,吳金香.IL-33/ST2激活人肺成纖維細(xì)胞表達(dá)纖維黏連蛋白Ⅰ和Ⅰ型膠原蛋白參與哮喘氣道重塑[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2014,30(9):975-979.

    [10] 朱錦東.?;切苋パ跄懰峋徑廪D(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1誘導(dǎo)的MRC-5纖維化表型[D].北京:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2015:12-23.

    [11] 潘有祿,黃文海,沈正榮.肺纖維化發(fā)生機(jī)制及治療研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2012,47(23):1873-1876.

    [12] 周艷.基于“疏通肺絡(luò)法”研究艾灸對(duì)肺纖維化大鼠上皮細(xì)胞-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化機(jī)制的影響[D].成都:成都中醫(yī)藥大學(xué),2015:1.

    [13] 陳茹萱.中藥紅景天成分對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞纖維化表型的干預(yù) [D].北京:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2016:8.

    [14] 程飚,付小兵,盛志勇,等.瘢痕組織中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J].中國(guó)病理生理雜志,2002,18(11):1333-1336.

    猜你喜歡
    新液肺纖維化纖維細(xì)胞
    我國(guó)研究人員探索肺纖維化治療新策略
    中老年保健(2022年2期)2022-11-25 23:46:31
    遺傳性T淋巴細(xì)胞免疫缺陷在百草枯所致肺纖維化中的作用
    Tiger17促進(jìn)口腔黏膜成纖維細(xì)胞的增殖和遷移
    滇南小耳豬膽道成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定
    康復(fù)新液治療口腔正畸慢性牙齦炎的臨床療效
    特發(fā)性肺纖維化合并肺癌
    康復(fù)新液HPLC指紋圖譜建立及6種成分測(cè)定
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:23
    胃癌組織中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4的表達(dá)及臨床意義
    沙利度胺治療肺纖維化新進(jìn)展
    兩種制備大鼠胚胎成纖維細(xì)胞的方法比較
    aaaaa片日本免费| 亚洲在线自拍视频| 精品国产国语对白av| 曰老女人黄片| 日韩精品免费视频一区二区三区| 嫩草影院精品99| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 一区二区三区高清视频在线| 亚洲精品美女久久av网站| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 自线自在国产av| 1024香蕉在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 久久这里只有精品19| 欧美一级a爱片免费观看看 | 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 中文字幕高清在线视频| 国产野战对白在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 午夜久久久在线观看| 搞女人的毛片| 亚洲国产精品sss在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 中文字幕人妻熟女乱码| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲中文字幕日韩| 99热只有精品国产| 麻豆成人午夜福利视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| 悠悠久久av| 国产精品久久久人人做人人爽| 成人亚洲精品一区在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 母亲3免费完整高清在线观看| 日本a在线网址| 亚洲黑人精品在线| 一级片免费观看大全| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品色激情综合| 久久精品影院6| 视频区欧美日本亚洲| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美黑人巨大hd| 成人手机av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 给我免费播放毛片高清在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 色综合婷婷激情| 亚洲第一青青草原| 亚洲,欧美精品.| 91麻豆精品激情在线观看国产| 香蕉av资源在线| 国产一区二区激情短视频| 制服丝袜大香蕉在线| 国产成人精品无人区| 国产单亲对白刺激| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久亚洲精品不卡| 久久九九热精品免费| 久久久久久久久免费视频了| 日本免费一区二区三区高清不卡| av在线天堂中文字幕| 国产97色在线日韩免费| 午夜激情av网站| 国产av一区二区精品久久| 欧美黑人巨大hd| 伦理电影免费视频| 一区二区三区高清视频在线| 日韩欧美免费精品| 99久久综合精品五月天人人| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 精品国产美女av久久久久小说| 视频在线观看一区二区三区| 脱女人内裤的视频| 久久久国产欧美日韩av| 69av精品久久久久久| 美女扒开内裤让男人捅视频| 婷婷亚洲欧美| 男女床上黄色一级片免费看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产真实乱freesex| 久久青草综合色| 亚洲专区中文字幕在线| 黄频高清免费视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲精品中文字幕在线视频| 免费高清在线观看日韩| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产伦一二天堂av在线观看| 在线观看舔阴道视频| 久久中文字幕一级| 1024香蕉在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲,欧美精品.| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产一区二区在线av高清观看| 淫秽高清视频在线观看| av在线天堂中文字幕| 亚洲一码二码三码区别大吗| 桃红色精品国产亚洲av| 99在线视频只有这里精品首页| 精品一区二区三区四区五区乱码| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 午夜成年电影在线免费观看| 久久伊人香网站| 国产高清videossex| 中文字幕最新亚洲高清| 免费观看精品视频网站| 中文亚洲av片在线观看爽| 午夜福利欧美成人| 丝袜美腿诱惑在线| 人人妻人人澡人人看| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲午夜理论影院| 中文字幕精品免费在线观看视频| 美女国产高潮福利片在线看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| www日本在线高清视频| 亚洲中文字幕日韩| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产av一区二区精品久久| 在线观看免费日韩欧美大片| netflix在线观看网站| 国产在线观看jvid| 国产精华一区二区三区| 国产激情偷乱视频一区二区| 精品久久久久久,| 亚洲黑人精品在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 极品教师在线免费播放| 国产av又大| 欧美中文日本在线观看视频| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产精品久久久人人做人人爽| 欧美zozozo另类| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久精品国产综合久久久| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产不卡一卡二| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲国产精品成人综合色| e午夜精品久久久久久久| 99国产精品一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三| 在线观看日韩欧美| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产一卡二卡三卡精品| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 精品高清国产在线一区| 欧美日韩精品网址| 精品欧美国产一区二区三| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 最新美女视频免费是黄的| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 老汉色∧v一级毛片| 一二三四社区在线视频社区8| 国产视频内射| 亚洲中文字幕日韩| 51午夜福利影视在线观看| 精品久久久久久久久久久久久 | av视频在线观看入口| 一边摸一边抽搐一进一小说| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 午夜福利高清视频| 国产av一区二区精品久久| 哪里可以看免费的av片| 日韩av在线大香蕉| 一本综合久久免费| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 91老司机精品| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 99在线人妻在线中文字幕| 午夜亚洲福利在线播放| 丝袜人妻中文字幕| 国产高清videossex| 国产精品99久久99久久久不卡| av欧美777| 母亲3免费完整高清在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美一区二区精品小视频在线| 一区二区日韩欧美中文字幕| 久久精品国产亚洲av高清一级| 免费在线观看亚洲国产| 精品一区二区三区av网在线观看| 少妇 在线观看| av欧美777| videosex国产| av福利片在线| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲av成人一区二区三| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产一卡二卡三卡精品| 最近在线观看免费完整版| 国产精品亚洲美女久久久| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲欧美精品综合久久99| 999久久久精品免费观看国产| 欧美日韩乱码在线| 久久草成人影院| 亚洲成人免费电影在线观看| 免费观看人在逋| 一本精品99久久精品77| 亚洲第一av免费看| 美女 人体艺术 gogo| 手机成人av网站| 美女高潮到喷水免费观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 午夜视频精品福利| 日韩大码丰满熟妇| 韩国av一区二区三区四区| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲男人的天堂狠狠| 好男人电影高清在线观看| 夜夜爽天天搞| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲欧美精品综合久久99| 悠悠久久av| 夜夜爽天天搞| 国产精品乱码一区二三区的特点| 成人亚洲精品一区在线观看| 看免费av毛片| 亚洲,欧美精品.| 久久草成人影院| 成人av一区二区三区在线看| 又大又爽又粗| 成年版毛片免费区| a级毛片a级免费在线| 欧美大码av| 国产成人系列免费观看| 免费在线观看亚洲国产| 久久久久久九九精品二区国产 | 老司机福利观看| 999久久久国产精品视频| 中国美女看黄片| netflix在线观看网站| 岛国视频午夜一区免费看| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 日本熟妇午夜| 久久久久久九九精品二区国产 | 亚洲av成人av| 这个男人来自地球电影免费观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 男男h啪啪无遮挡| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 久久婷婷成人综合色麻豆| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日韩国内少妇激情av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 人人澡人人妻人| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 久久久国产成人精品二区| 久久久久久人人人人人| 久久午夜亚洲精品久久| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲五月天丁香| 中文资源天堂在线| 波多野结衣高清作品| 色尼玛亚洲综合影院| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲三区欧美一区| 色播亚洲综合网| av电影中文网址| 久久香蕉国产精品| 国内精品久久久久精免费| 草草在线视频免费看| www国产在线视频色| 嫩草影视91久久| 久久性视频一级片| 麻豆成人av在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 真人做人爱边吃奶动态| av有码第一页| 可以在线观看毛片的网站| 丰满的人妻完整版| √禁漫天堂资源中文www| 欧美av亚洲av综合av国产av| 在线av久久热| 久久久国产欧美日韩av| e午夜精品久久久久久久| 18禁观看日本| 久99久视频精品免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av超薄肉色丝袜交足视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久久国产精品麻豆| 免费在线观看日本一区| 国产av不卡久久| 精品第一国产精品| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美国产日韩亚洲一区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产成人精品久久二区二区91| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲av成人一区二区三| 村上凉子中文字幕在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 欧美黑人精品巨大| 亚洲成av人片免费观看| 成人国语在线视频| 动漫黄色视频在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日韩免费av在线播放| 母亲3免费完整高清在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频| 成人三级黄色视频| 大香蕉久久成人网| 一级毛片女人18水好多| 麻豆成人av在线观看| 国产三级黄色录像| 91麻豆av在线| 国产午夜福利久久久久久| 91成年电影在线观看| 亚洲avbb在线观看| 日韩欧美 国产精品| 欧美成人性av电影在线观看| 人妻久久中文字幕网| 黑人操中国人逼视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产成人影院久久av| 国产精品永久免费网站| 成人特级黄色片久久久久久久| 免费高清视频大片| 可以在线观看的亚洲视频| 午夜免费鲁丝| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美在线一区亚洲| 在线播放国产精品三级| 亚洲成人久久性| 精品免费久久久久久久清纯| 精品久久蜜臀av无| 女性被躁到高潮视频| 丰满的人妻完整版| 中文字幕人妻熟女乱码| 成人精品一区二区免费| 国产真人三级小视频在线观看| 1024手机看黄色片| 曰老女人黄片| a级毛片a级免费在线| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲精品国产区一区二| 国产伦人伦偷精品视频| 最新美女视频免费是黄的| 男女午夜视频在线观看| 欧美乱妇无乱码| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 午夜福利视频1000在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 久久人人精品亚洲av| a级毛片在线看网站| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产成人系列免费观看| 制服诱惑二区| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲久久久国产精品| 色av中文字幕| 美女午夜性视频免费| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产主播在线观看一区二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产成年人精品一区二区| 黄色a级毛片大全视频| 波多野结衣高清作品| 免费观看精品视频网站| 国产一区二区在线av高清观看| 丁香六月欧美| 听说在线观看完整版免费高清| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 99国产综合亚洲精品| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 欧美zozozo另类| 国产乱人伦免费视频| 国产精品久久视频播放| 亚洲精品在线美女| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产97色在线日韩免费| 男女下面进入的视频免费午夜 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| x7x7x7水蜜桃| 丁香欧美五月| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲精品色激情综合| 高清在线国产一区| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美国产日韩亚洲一区| 精品国产美女av久久久久小说| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 成熟少妇高潮喷水视频| 婷婷六月久久综合丁香| 久久伊人香网站| 国产真人三级小视频在线观看| 性欧美人与动物交配| 久久人人精品亚洲av| 夜夜夜夜夜久久久久| 免费看a级黄色片| e午夜精品久久久久久久| 999久久久国产精品视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 午夜福利高清视频| 99热6这里只有精品| www.自偷自拍.com| e午夜精品久久久久久久| 男人舔女人的私密视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲 欧美一区二区三区| 免费av毛片视频| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲精品国产区一区二| 美女高潮到喷水免费观看| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久中文字幕一级| 色综合欧美亚洲国产小说| 日本五十路高清| 成人手机av| 国产精品亚洲一级av第二区| 老鸭窝网址在线观看| 日韩国内少妇激情av| 免费人成视频x8x8入口观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 色哟哟哟哟哟哟| 1024手机看黄色片| 三级毛片av免费| 日本免费一区二区三区高清不卡| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 日韩免费av在线播放| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产精品乱码一区二三区的特点| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 丰满的人妻完整版| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲专区字幕在线| 一进一出好大好爽视频| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 嫁个100分男人电影在线观看| 成年版毛片免费区| 黄频高清免费视频| 国产高清videossex| 成人av一区二区三区在线看| 69av精品久久久久久| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲av成人av| 久久青草综合色| 欧美性猛交黑人性爽| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 精品无人区乱码1区二区| 男女午夜视频在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美黄色片欧美黄色片| 精品高清国产在线一区| 日本a在线网址| 一级a爱视频在线免费观看| 91国产中文字幕| 欧美一区二区精品小视频在线| 最新在线观看一区二区三区| 久热这里只有精品99| 人人澡人人妻人| videosex国产| 岛国在线观看网站| 在线观看午夜福利视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲人成77777在线视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 香蕉久久夜色| 村上凉子中文字幕在线| 99久久无色码亚洲精品果冻| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 精品久久久久久久末码| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 午夜久久久在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲一区二区三区不卡视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产精华一区二区三区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲九九香蕉| 亚洲午夜理论影院| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲中文日韩欧美视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久国产成人精品二区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 韩国av一区二区三区四区| 男女床上黄色一级片免费看| 美女高潮到喷水免费观看| xxx96com| www.999成人在线观看| 一级毛片高清免费大全| 日韩视频一区二区在线观看| 国产高清videossex| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品久久蜜臀av无| 午夜福利欧美成人| 校园春色视频在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| svipshipincom国产片| 欧美午夜高清在线| 中文字幕最新亚洲高清| 99热只有精品国产| 日日夜夜操网爽| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 无限看片的www在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 一级毛片精品| 久久久精品欧美日韩精品| 精品高清国产在线一区| 久久中文字幕人妻熟女| 国产1区2区3区精品| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 麻豆一二三区av精品| a级毛片a级免费在线| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美zozozo另类| 黄色成人免费大全| 丝袜人妻中文字幕| 中文亚洲av片在线观看爽| 一本久久中文字幕| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av超薄肉色丝袜交足视频| 一级黄色大片毛片| 精品久久久久久久末码| 欧美精品亚洲一区二区| 99国产精品一区二区蜜桃av| av免费在线观看网站| 免费搜索国产男女视频| 看片在线看免费视频| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲国产欧美网| 成人免费观看视频高清| 一级毛片高清免费大全| 久久中文字幕人妻熟女| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久久久久精品吃奶| 欧美精品啪啪一区二区三区| or卡值多少钱| 可以在线观看毛片的网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一级毛片精品| 亚洲精华国产精华精| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 叶爱在线成人免费视频播放| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美丝袜亚洲另类 | 757午夜福利合集在线观看| 一区二区三区精品91| 91成人精品电影| 人人澡人人妻人| 99国产精品一区二区蜜桃av| 日韩精品青青久久久久久| 国产片内射在线| 天天添夜夜摸| 身体一侧抽搐| 中文字幕久久专区| 制服丝袜大香蕉在线| 国产乱人伦免费视频| 日韩高清综合在线| 久久久国产成人精品二区| 国产乱人伦免费视频| 1024视频免费在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 成人一区二区视频在线观看| 长腿黑丝高跟| 国产亚洲精品av在线| 日韩av在线大香蕉| 成人特级黄色片久久久久久久| 麻豆av在线久日| 一区二区三区激情视频| 日韩高清综合在线| 亚洲成人久久性| 人人妻人人澡人人看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产成人欧美在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜 | av电影中文网址| 51午夜福利影视在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 中国美女看黄片| 悠悠久久av| 99热6这里只有精品| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产aⅴ精品一区二区三区波|