老年2型糖尿病和冠心病患者高密度脂蛋白與高密度脂蛋白中血清淀粉樣蛋白A含量改變的相關(guān)性

瑪依拉·卡哈爾 哈麗達(dá)·木沙 李雅麗

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830011)

無(wú)論是體內(nèi)研究或是體外實(shí)驗(yàn)均明確高密度脂蛋白(HDL)能夠?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子形成抑制反應(yīng)，因此臨床學(xué)者也將HDL稱之為“血管脂質(zhì)清道夫”，具備抗動(dòng)脈粥樣硬化生理特性〔1,2〕。但目前臨床醫(yī)療對(duì)HDL發(fā)生病理性因素造成HDL結(jié)構(gòu)異常轉(zhuǎn)變后，其是否尚存細(xì)胞表達(dá)黏附分子的抑制效果鮮有研究。血清淀粉樣蛋白(SA)A是炎癥反應(yīng)蛋白特異性指標(biāo)，研究表明SAA不僅參與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變過(guò)程，同時(shí)也能夠?qū)DL形成介導(dǎo)干擾膽固醇的逆轉(zhuǎn)〔3,4〕。為進(jìn)一步明確病理狀態(tài)下HDL與HDL中SAA相關(guān)影響，本文抽選2型糖尿病(T2DM)、冠心病(CHD)老年患者54例，行前瞻對(duì)照研究。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選取新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2016年5月至2017年5月收治的T2DM老年患者54例，年齡61～83〔平均(71.25±2.64)〕歲。根據(jù)患者疾病分組觀察，T2DM組18例，CHD組19例，T2DM+CHD組17例，另抽選15名>60歲健康人員作為健康參考組。

1.2納入、排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①T2DM組符合《中國(guó)2型糖尿病防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕；②CHD組確診符合《冠心病的診斷與治療》〔6〕診斷標(biāo)準(zhǔn)；③動(dòng)脈造影檢測(cè)>50%血管狹窄；④患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并急性冠狀動(dòng)脈綜合征；②確診1型糖尿病者；③肝腎功能異常者；④研究前2 w內(nèi)使用他汀藥物。

1.3基本資料調(diào)查 性別、年齡、疾病史、血糖、血脂等指標(biāo)。

1.4HDL中SAA、 細(xì)胞黏粘附分子(ICAM)-1、血管細(xì)胞黏附分子(VCAM)-1 、人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株(THP)-1 細(xì)胞黏附檢測(cè) ①脂蛋白分離提取：靜脈血離心(2 000 r/min)20 min，取血漿，再行超速離心法分離脂蛋白(提取-分離-透析-過(guò)濾)，二喹啉甲酸(BCA)法檢測(cè)脂蛋白含量。②HDL中SAA檢測(cè)：選用人SAA-ELISA試劑盒檢測(cè)SAA含量。③人腦靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)獲取：正常分娩產(chǎn)婦臍帶取材，膠原酶Ⅰ溶液(0.1%)下消化處理，收集HUVEC，行ECM傳代培養(yǎng)。④HDL中ICAM-1、VCAM-1表達(dá)、THP-1 細(xì)胞黏附檢測(cè)：HUVEC與各組HDL做共孵4 h，增用腫瘤壞死因子(TNF)-α進(jìn)行持續(xù)4 h刺激，利用CD106-FITC 單克隆抗體與抗人CD54-PE標(biāo)記，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ICAM-1、VCAM-1表達(dá)；加入Calcein-AM熒光染色劑標(biāo)記THP-1細(xì)胞，檢測(cè)HDL抑制HUVEC下THP-1 細(xì)胞黏附量。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t及χ2檢驗(yàn)，Logistic線性回歸分析HDL中SAA與HDL生理作用的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1基本病例資料比較 各組年齡、體重指數(shù)(BMI)、性別、總膽固醇(TC)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；各組高血壓、吸煙、三酰甘油(TG)、HDL、空腹血糖(FPG)、低密度脂蛋白(LDL)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2各組HDL中SAA、 ICAM-1、VCAM-1 、THP-1 細(xì)胞黏附量對(duì)比 各組HDL中SAA、ICAM-1比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；VCAM-1表達(dá)檢測(cè)T2DM+CHD組最高，與其他組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，T2DM組與CHD組VCAM-1 表達(dá)略有上升，與健康參考組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；THP-1表達(dá)檢測(cè)中T2DM+CHD組最高，T2DM組與CHD組次之，各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組基本病例資料比較

與T2DM組比較：1)P<0.05；與CHD組比較：2)P<0.05；與T2DM+CHD組比較：3)P<0.05，下表同

表2 各組HDL中SAA、 ICAM-1、VCAM-1 、THP-1 細(xì)胞黏附量比較

2.3HDL中SAA水平與 ICAM-1、VCAM-1、THP-1 細(xì)胞黏附相關(guān)性 多因素線性回歸方程，校正年齡、性別、糖尿病、冠心病、吸煙、血漿TC、TG 水平的影響，分析HDL中SAA水平與 ICAM-1、VCAM-1、THP-1 細(xì)胞黏附相關(guān)性分析證實(shí)，HDL中SAA與 ICAM-1表達(dá)呈正相關(guān)；與THP-1細(xì)胞黏附呈負(fù)相關(guān)；與VCAM-1表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性。見(jiàn)表3。

表3 HDL中SAA水平與 ICAM-1、VCAM-1、THP-1 細(xì)胞黏附相關(guān)性

3 討 論

研究表明，T2DM患者在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及硬化程度方面均較正常人員更高〔7，8〕。Kawano等〔9〕研究通過(guò)調(diào)查明確，T2DM患者α-1HDL、α-2 HDL及pre-α-1 HDL指標(biāo)可發(fā)生異常減少現(xiàn)象，同時(shí)患者α-3 HDL指標(biāo)將異常增多，且這類指標(biāo)均與機(jī)體炎癥因子的活化形成明顯關(guān)聯(lián)性。研究認(rèn)為，HDL因糖尿病病理性改變，造成該物質(zhì)結(jié)構(gòu)異常造成體內(nèi)HDL正常的抗炎機(jī)制反應(yīng)遭受抑制〔10〕，由此推論病理HDL變化將影響HDL的抗炎生理作用。本研究顯示T2DM患者HDL內(nèi)所含 ICAM-1、THP-1等異常改變，將造成HDL抗炎效應(yīng)衰減，并與CHD患者做同比分析也有著明顯差異，表明糖代謝病理改變將造成HDL抗炎效果異常弱化，甚至較CHD更為顯著，提示T2DM患者后期并發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)較高。

CHD可造成HDL所含的纖維蛋白原、補(bǔ)體C3及其他炎性蛋白異常增多，且這類HDL特有的生物結(jié)構(gòu)物質(zhì)將造成HDL所形成的炎性抵抗反應(yīng)削弱〔11～13〕。李勉賢等〔14〕研究明確心肌梗死患者與正常人在HDL-C指標(biāo)并無(wú)明顯差異，不過(guò)深入觀察HDL-P亞型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)亞型太異常將造成HDL對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的抵抗效果弱化，產(chǎn)生HDL逆轉(zhuǎn)反應(yīng)，即反之誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展〔15〕。Ji等〔16〕研究明確，CHD患者HDL內(nèi)血紅蛋白指標(biāo)可出現(xiàn)異常增多跡象，其中HDL與血紅蛋白所形成的緊密連接將造成HDL促炎反應(yīng)。當(dāng)機(jī)體處于炎癥反應(yīng)機(jī)制激活狀態(tài)，其HDL內(nèi)所含蓋的SAA水平也將明顯提高，結(jié)構(gòu)改變的同時(shí)抗炎能力下降〔17〕。范曉方等〔18〕通過(guò)對(duì)CHD及糖尿病患者HDL多種復(fù)雜蛋白物質(zhì)調(diào)查明確，僅伴有SAA指標(biāo)的HDL才能形成強(qiáng)烈的炎癥性因子刺激效應(yīng)，可隨SAA指標(biāo)的增長(zhǎng)，其HDL抗炎作用將隨之削弱，SAA與HDL抗炎呈負(fù)相關(guān)〔19〕。R?cken等〔20〕研究明確，SAA對(duì)HDL干擾機(jī)制主因?yàn)?SAA激活核因子(NF)-κB途徑，造成炎性細(xì)胞因子的快速活化，形成高表達(dá)狀態(tài)。本研究說(shuō)明HDL可受病理性影響造成自身生物抗炎作用削弱。

本研究表明，無(wú)論是T2DM或是CHD，體內(nèi)HDL受病理因素轉(zhuǎn)變可造成HDL原有生物反應(yīng)機(jī)制受限，這一變化不僅僅受患者HDL濃度的影響，同時(shí)亦受HDL結(jié)構(gòu)改變更為顯著；其中當(dāng)屬T2DM患者HDL病理改變較明顯，其SAA含量提高比CHD患者更高，造成HDL抗炎效果較CHD者更差。

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