我國部分地區(qū)雞、豬源沙門氏菌血清型與耐藥性比較

李月華，趙建梅，張青青，曲志娜

（中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

沙門氏菌（Salmonella）是腸桿菌科中具有重要公共衛(wèi)生學(xué)意義的人獸共患病原菌，全世界已發(fā)現(xiàn)2 500多種血清型，我國已發(fā)現(xiàn)292種血清型[1]。畜禽感染沙門氏菌后，可引起豬副傷寒、雞白痢、禽傷寒和禽副傷寒等病癥，降低動物的繁殖能力、生產(chǎn)性能及產(chǎn)蛋率等，甚至引起動物死亡，給畜禽養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[2]?？股卦谥委熂?xì)菌引起的疾病方面發(fā)揮了不可替代的作用，但也帶來了細(xì)菌耐藥問題。沙門氏菌就已出現(xiàn)了嚴(yán)重的耐藥及多重耐藥現(xiàn)象，耐藥譜型也在不斷增多[3]。這不僅給沙門氏菌病防治增加了難度，而且人類一旦食用染病的動物源性（主要是雞和豬）食品，可能會感染耐藥沙門氏菌，引發(fā)嚴(yán)重的食品安全問題，對人類生命健康造成威脅[4]。因此，及時監(jiān)控不同血清型畜禽沙門氏菌流行情況及耐藥趨勢變化，對控制沙門氏菌傳播，降低食品安全隱患有著重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 2012—2017年分離自華中、華東、華北和西南地區(qū)6省份的豬場和雞場拭子樣品的283株沙門氏菌和大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC25922），由中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心動物產(chǎn)品安全監(jiān)測室保存。

1.1.2 主要儀器與試劑 渦旋混合儀、恒溫培養(yǎng)箱：購自美國Luminex；生物安全柜：購自美國NUAIRE公司；可見分光光度計：購自上海儀電分析儀器有限公司；沙門氏菌抗血清：購自泰國S&A；胰蛋白大豆胨培養(yǎng)基、細(xì)菌瓊脂粉：購自北京陸橋技術(shù)有限公司；含有青霉素類（氨芐西林）、阿莫西林/克拉維酸、頭孢菌素類（頭孢噻呋）、氨基糖苷類（慶大霉素、大觀霉素）、四環(huán)素類（四環(huán)素、多西環(huán)素）、氯霉素類（氟苯尼考）、磺胺類（磺胺異噁唑、復(fù)方新諾明）、氟喹諾酮類（恩諾沙星、氧氟沙星）、多肽類（黏菌素E）13種藥物的96孔藥敏檢測板：購自上海星佰生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血清型鑒定 參照GB/T 4789.4—2016，采用傳統(tǒng)玻片凝集法，對菌株進(jìn)行血清型鑒定。

1.2.2 藥物敏感試驗(yàn) 根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（CLSI）標(biāo)準(zhǔn)，用微量肉湯稀釋法測定沙門氏菌的藥物敏感性。試驗(yàn)操作參照藥敏檢測板說明書。對供試菌的最小抑菌濃度（MIC）進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取，結(jié)果判定參照CLSI文件標(biāo)準(zhǔn)。測定藥物共9大類13種，包括氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻呋、慶大霉素、大觀霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、氟苯尼考、磺胺異噁唑、復(fù)方新諾明、恩諾沙星、氧氟沙星、黏菌素E。同時用大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC25922）做質(zhì)控對照。

1.2.3 不同血清型的耐藥性特征 以優(yōu)勢血清型腸炎和鼠傷寒沙門氏菌為例進(jìn)行不同血清型對13種藥物的耐藥特征分析。

1.2.4 不同年份分離菌株耐藥情況 統(tǒng)計2012—2017年間，不同年份沙門氏菌分離株對13種藥物的耐藥情況，并將其進(jìn)行比較分析。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析 通過卡方檢驗(yàn)，分析雞、豬源沙門氏菌在優(yōu)勢血清型、耐藥程度和多重耐藥程度等方面的差異。P＞0.05，差異不顯著；P＜0.05，差異顯著；P＜0.01，差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 血清型分型

鑒定出血清型的菌株共有280株，含17種血清型。其中，雞源菌株共有12種血清型，豬源菌株共有9種血清型。有3株雞源菌株未鑒定出血清型。280株沙門氏菌的優(yōu)勢血清型為腸炎（44.64%）、鼠傷寒（22.50%）、嬰兒（9.29%）、印第安納（6.43%）和雞白?。?.07%），共占總數(shù)的88.93%。其中，雞源菌株以腸炎（59.69%）、嬰兒（13.61%）和雞白痢（8.90%）為主，豬源菌株以鼠傷寒（58.43%）、腸炎（12.36%）、印第安納（11.24%）和德爾卑（7.87%）為主。通過卡方檢驗(yàn)，2種來源沙門氏菌的優(yōu)勢血清型差異極顯著（P＜0.01）（圖1、圖2）。

圖1 雞源沙門氏菌血清型分布

圖2 豬源沙門氏菌血清型分布

2.2 藥敏試驗(yàn)

2.2.1 總體耐藥/敏感 283株沙門氏菌對氨芐西林（79.86%）和磺胺甲基異噁唑（79.51%）2種藥物耐藥較嚴(yán)重，其次是多西環(huán)素（65.72%）、四環(huán)素（55.83%）和復(fù)方新諾明（55.48%），對黏菌素E、恩諾沙星和氧氟沙星3種藥物耐藥程度相對較輕，耐藥率在9.54%～15.55%之間。從敏感程度看，有6種藥物的敏感率在50.00%以上，其中最為敏感的藥物是氧氟沙星（80.92%），其次是頭孢噻呋（72.44%）和慶大霉素（67.84%）。氨芐西林、磺胺甲基異噁唑、大觀霉素3種藥物的敏感率在19.79%～28.62%之間，多西環(huán)素（18.02%）敏感程度最低。黏菌素E的耐藥率雖然最低，但敏感率僅為56.18%，有34.28%為中敏菌株（表1）。

2.2.2 MIC分布 選取除阿莫西林/克拉維酸以外的12種藥物（EUCAST無阿莫西林/克拉維酸監(jiān)測數(shù)據(jù)），對本文所分離沙門氏菌的MIC分布與歐盟2017年公布的EUCAST監(jiān)測數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，對氨芐西林、頭孢噻呋、慶大霉素、大觀霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、氟苯尼考、磺胺甲基異噁唑、復(fù)方新諾明、恩諾沙星和氧氟沙星的耐藥菌株大部分分布在高濃度區(qū)域，與EUCAST相比，這11種藥物的MIC分布均有明顯右移現(xiàn)象。選取氨芐西林和磺胺甲基異噁唑作圖（圖3、圖4）。而對耐藥率相對較低的黏菌素E，我國沙門氏菌的MIC分布相比歐盟有左移現(xiàn)象（圖5）。

表1 283株沙門氏菌耐藥/敏感結(jié)果及雞、豬源沙門氏菌耐藥差異分析

圖3 氨芐西林的MIC分布

圖4 磺胺甲基異噁唑的MIC分布

圖5 黏菌素E的MIC分布

2.2.3 雞豬源分離菌株耐藥比較 從耐藥結(jié)果（表1和圖6）來看，豬源菌株比雞源菌株耐藥嚴(yán)重，對氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、慶大霉素、大觀霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、氟苯尼考、磺胺甲基異噁唑、復(fù)方新諾明、恩諾沙星和氧氟沙星11種藥物的耐藥率均高于雞源菌株，僅對頭孢噻呋和黏菌素E的耐藥率低于雞源菌株。經(jīng)過卡方檢驗(yàn)，2種來源的分離菌株對阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻呋、慶大霉素、大觀霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、氟苯尼考、恩諾沙星和氧氟沙星的差異均極顯著（P＜0.01），對黏菌素E的耐藥率差異顯著（P＜0.05），對氨芐西林、磺胺甲基異噁唑和復(fù)方新諾明的耐藥率差異不顯著（P＞0.05）。

圖6 雞豬源分離菌株耐藥結(jié)果比較

2.3 多重耐藥

2.3.1 總體多重耐藥 按藥品大類進(jìn)行多重耐藥統(tǒng)計，283株沙門氏菌中有240株為多重耐藥菌株，多重耐藥率為84.81%（表2）。

表2 283株沙門氏菌多重耐藥情況

2.3.2 雞豬源分離菌株多重耐藥比較 194株雞源菌株中有166株為多重耐藥菌株，多重耐藥率為85.57%，89株豬源菌株中有74株為多重耐藥菌株，多重耐藥率為83.15%，差異不明顯。豬源菌株的高耐問題較為突出，主要集中在5耐以上，占比65.17%，雞源菌株主要集中在5耐以下，5耐以上菌株僅占比40.21%。經(jīng)過卡方檢驗(yàn)，兩者5耐以上的菌株比例差異極顯著（P＜0.01）（表2、圖7）。

圖7 雞豬源分離菌株多重耐藥比較

2.4 不同血清型沙門氏菌的耐藥特征

耐藥結(jié)果表明鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌對13種藥物的耐藥程度有差異（圖8）。其中，腸炎沙門氏菌對黏菌素E的耐藥率為70.89%，而鼠傷寒沙門氏菌對其全部敏感。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，2種血清型沙門氏菌對阿莫西林/克拉維酸、慶大霉素、大觀霉素、四環(huán)素、氟苯尼考、磺胺異噁唑和黏菌素E的耐藥率差異極顯著（P＜0.01），對氨芐西林耐藥率差異顯著（P＜0.05）。

圖8 不同血清型耐藥情況

2.5 不同年份沙門氏菌的耐藥情況

2012——2017年豬禽源沙門氏菌分離株對13種藥物耐藥性比較結(jié)果顯示不同年份之間存在差異（表3）。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻呋、慶大霉素、大觀霉素、四環(huán)素、氟苯尼考、復(fù)方新諾明、恩諾沙星和黏菌素E差異極顯著（P＜0.01）；多西環(huán)素和氧氟沙星差異顯著（P＜0.05）；而磺胺異噁唑沒有顯著性差異。

3 討論

經(jīng)本實(shí)驗(yàn)血清型鑒定的280株沙門氏菌共分為17種血清型，其中優(yōu)勢血清型為腸炎（44.64%）、鼠傷寒（22.50%）、嬰兒（9.29%）、印第安納（6.43%）和雞白?。?.07%）。這與陳健皓等[5]對江蘇省雞、豬源沙門氏菌血清型的研究結(jié)果基本一致，但所占比例存在差異。本研究結(jié)果顯示，雞源沙門氏菌血清型以腸炎（59.69%）、嬰兒（13.61%）和雞白痢（8.90%）為主，豬源菌株血清型以鼠傷寒（58.43%）、腸炎（12.36%）、印第安納（11.24%）和德爾卑（7.87%）為主。經(jīng)過卡方檢驗(yàn)，2種來源的沙門氏菌優(yōu)勢血清型差異極顯著。郝紅珊等[6]在調(diào)查廣西省、廣東省、福建省和上海市超市的雞肉時發(fā)現(xiàn)，沙門氏菌的主導(dǎo)血清型為腸炎（20.20%）、印第安納（15.60%）和湯普遜（10.80%）。龍梅等[7]對四川省的雞肉和雞蛋生產(chǎn)加工過程中的沙門氏菌進(jìn)行血清型鑒定，發(fā)現(xiàn)腸炎沙門氏菌普遍流行（44.10%），其次為德爾卑（19.50%）和鼠傷寒（9.70%）。四川省豬場拭子樣品中沙門氏菌血清型以德爾卑為主（60.26%），其次是鼠傷寒（16.56%）和羅森（6.60%）[8]。哈爾濱市豬直腸樣品中豬霍亂（71.40%）為最主要血清型，其次為豬傷寒（22.90%）和鼠傷寒（5.70%）[9]。上述結(jié)果均表明沙門氏菌血清型受地域和宿主差異影響，且腸炎沙門氏菌主要來源于雞，鼠傷寒沙門氏菌主要來源于豬，這與國內(nèi)外部分報告相似[10-12]。

從耐藥結(jié)果看，沙門氏菌對磺胺類、青霉素類、氨基糖苷類和四環(huán)素類藥物耐藥較為嚴(yán)重，這與劉艷紅等[13]的研究結(jié)果一致。通過與歐盟EUCAST監(jiān)測數(shù)據(jù)比較發(fā)現(xiàn)，我國沙門氏菌對氨芐西林、頭孢噻呋、慶大霉素、大觀霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、氟苯尼考、磺胺甲基異噁唑、復(fù)方新諾明、恩諾沙星和氧氟沙星的MIC分布均有明顯的右移現(xiàn)象，耐藥問題比較突出，這也提示在今后的獸藥研發(fā)、用藥范圍和用藥劑量等方面要進(jìn)行嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范。與雞源菌株相比，豬源菌株的耐藥問題更為嚴(yán)重，對11種抗菌藥物的耐藥率均高于雞源菌株。經(jīng)過卡方檢驗(yàn)，2種來源的分離菌株除了對氨芐西林、磺胺甲基異噁唑和復(fù)方新諾明的耐藥率差異不顯著外，對其他10種藥物的差異均較為顯著，這與宋雪等[14]對吉林、江西和新疆的雞、豬源沙門氏菌耐藥差異結(jié)果基本吻合。腸炎和鼠傷寒沙門氏菌對氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、慶大霉素、大觀霉素、四環(huán)素、氟苯尼考、磺胺甲基異噁唑和黏菌素E的耐藥差異顯著，而且在2012—2017年6省的沙門氏菌分離株對13種藥物的耐藥率除磺胺異噁唑外的12種藥物都存在顯著差異。北京市和陜西省[15]的雞源沙門氏菌對黏菌素的耐藥率最高，其次為磺胺甲基異噁唑、氨芐西林和多西環(huán)素。四川省[8]的豬源沙門氏菌對氨芐西林、奧格門丁、大觀霉素、四環(huán)素和磺胺甲基異噁唑的耐藥率均在91.4%以上。這說明不同來源的沙門氏菌耐藥性呈現(xiàn)區(qū)域性耐藥特點(diǎn)，這可能與當(dāng)?shù)鼐甑牧餍胁W(xué)特征和獸醫(yī)用藥情況有關(guān)。

表3 不同年份沙門氏菌分離株耐藥情況

283株沙門氏菌的多重耐藥率為84.81%，與目前山東、四川和廣西等地的沙門氏菌多重耐藥率持平[8、16-17]。雞源菌株多重耐藥率為85.57%，豬源菌株多重耐藥率為83.15%，差異不明顯。豬源分離菌株的高耐問題較為突出，與雞源菌株在5耐以上的菌株比例差異極顯著，這說明在飼養(yǎng)、預(yù)防和臨床治療上，養(yǎng)豬業(yè)亟需規(guī)范抗菌藥的合理使用，以遏制沙門氏菌耐藥性的發(fā)展。

4 結(jié)論

本研究對2012—2017年間我國部分地區(qū)雞、豬源沙門氏菌進(jìn)行了血清型鑒定和耐藥性比較。結(jié)果表明：腸炎和鼠傷寒分別是我國部分地區(qū)雞、豬源沙門氏菌的優(yōu)勢血清型；沙門氏菌耐藥性與動物來源、血清型和分離年份相關(guān)，且雞、豬源沙門氏菌耐藥情況比歐盟國家嚴(yán)重。本研究結(jié)果揭示了不同動物來源沙門氏菌的流行特征和耐藥情況，為控制沙門氏菌的傳播，降低食品安全隱患，保障消費(fèi)者健康提供了數(shù)據(jù)支撐。

[1] 趙翠，張慶，郭樹源，等. 山東省動物源沙門氏菌MLST和血清分型與分布研究[J]. 中國人獸共患病學(xué)報，2017，33（9）：793-799.

[2] 張璐，張雪偉，袁宗輝，等. 畜禽沙門氏菌病防制研究進(jìn)展[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2017，44（7）：2103-2111.

[3] 王娟，劉鮮鮮，張倩，等. 山東生豬屠宰環(huán)節(jié)沙門氏菌血清型及耐藥性測試[J]. 中國人獸共患病學(xué)報，2017，33（6）：517-521.

[4] 吳荔琴，劉佩怡，伍宏凱，等. 2014—2016年廣州市屠宰場分離沙門氏菌血清學(xué)鑒定和耐藥性分析[J]. 中國獸藥雜志，2017，51（7）：15-20.

[5] 陳健皓. 沙門氏菌快速檢測方法的篩選與應(yīng)用和雞源、豬源菌株MLST分子溯源及耐藥性研究[D]. 揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2017.

[6] 郝宏珊. 八省市雞肉源沙門氏菌污染狀況調(diào)查及其特性研究[D]. 西安：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2012.

[7] 龍梅. 雞肉、雞蛋生產(chǎn)加工過程中沙門氏菌的血清型變化及其對消毒劑耐藥性研究[C]//中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會，美國食品科技學(xué)會. 中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會第十二屆年會暨第八屆中美食品業(yè)高層論壇論文摘要集.北京：中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會，美國食品科技學(xué)會，2015：2.

[8] 岳秀英，葛榮，汪開毓，等. 四川省豬源沙門氏菌及耐藥性變遷調(diào)查[J]. 四川動物，2015，34（5）：707-713.

[9] 加春生，毛澤明，王曉楠，等. 豬沙門氏菌的分離鑒定及其耐藥性分析[J]. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2014，45（8）：49-54.

[10] STEPAN R M，SHERWOOD J S，PETERMANN S R，et al. Molecular and comparative analysis of Salmonella enterica Senftenberg from humans and animals using PFGE，MLST and NARMS[J]. Biomed central microbiology，2011（11）：153.

[11] JING L，CONGMING W，CHENBIN W，et al.Serotype distribution and antibiotic resistance of Salmonella in food-producing animals in Shandong Province of China，2009 and 2012[J]. International journal of food microbiology，2014，180（3）：30-38.

[12] AUTHORITY E F S. The European Union summary report on trends and sources of zooneses，zoonotic agents and food-born outbreaks in 2012[J]. European food safety authority journal，2014，12（2）：96-98.

[13] 劉艷紅. 沙門氏菌和大腸桿菌耐藥性及耐藥基因的研究[D]. 沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.

[14] 宋雪，趙格，劉文化，等. 不同來源沙門氏菌的毒力基因檢測與耐藥性分析[J]. 中國動物檢疫，2017，34（5）：40-46.

[15] 鄒明，魏蕊蕊，張純萍，等. 雞源沙門氏菌的血清型、耐藥性和耐藥機(jī)制調(diào)查[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，2013，21（7）：855-862.

[16] 孫璐，王娟，黃秀梅，等. 肉雞屠宰生產(chǎn)鏈中的沙門氏菌耐藥基因檢測及耐藥相關(guān)性分析[J]. 中國動物檢疫，2017，34（1）：35-39.

[17] 黃福標(biāo)，盧冰霞，劉磊，等. 屠宰豬腸道沙門氏菌的分離鑒定、耐藥性分析及致病性試驗(yàn)[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2012，39（1）：172-177.