云南龍膽中木脂素苷類成分研究

葉足約，王福生，楊惠云，張 愿

(大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南，大理 671000)

云南龍膽（Gentiana yunnanensis）為龍膽科龍膽屬（GentianaL.）植物，生于山坡草地、路旁、高山草甸、灌叢中及林下，主產(chǎn)于海拔在2300-4400米的西藏東南部、云南、四川和貴州[1]。作為藥用植物，在云南滇西北地區(qū)與滇龍膽混用。龍膽屬植物全世界約400種，我國有247種、41變種。云南共有125種，包括6個(gè)變種，其中絕大部分分布在云南西北部地區(qū)[2]。龍膽屬植物主要含環(huán)烯醚萜和裂環(huán)環(huán)烯醚萜類、三萜類、黃酮類及口山酮類等成分[3]。環(huán)烯醚萜和裂環(huán)環(huán)烯醚萜類成分具有顯著的保肝、利膽、抗炎、解熱、抗病毒等活性，三萜類成分具有抗真菌等活性。黃酮類化合物絕大多數(shù)為異葒草素和異牡荊素的衍生物, 此類化合物具有治療心血管疾病的作用[3]；口山酮類化合物主要以苷的形式存在，絕大多數(shù)來源于該屬植物的地上部分和全草，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有藥理活性[4]。目前未見文獻(xiàn)報(bào)道云南龍膽的化學(xué)成分研究。為了解云南龍膽的活性成分，本實(shí)驗(yàn)對該植物的正丁醇部位進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離鑒定了6個(gè)木脂素苷類成分。分別為：imethoxy-3′-hydroxy-′, 9-diepoxylignan-3-O-β-D-glucopyranoside (1)、SyringaresinoD-glucopyranoside (2)、Dehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucopyranoside (3)、(7S,8R)-Balanophonin-4-O-β-D-glucopyranoside (4)、(7S,8R)-Dehydrodiconiferyl alcohol-9′-O-β-D- glucopyranoside (5)、Lariciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside (6)?；衔锝Y(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1-6的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structures of Compound 1-6

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

云南龍膽采于云南省大理州蒼山花甸壩，經(jīng)大理大學(xué)段寶忠副教授鑒定為龍膽科龍膽屬植物云南龍膽（Gentiana yunnanensisFranch）的全株，植物標(biāo)本（編號：WFS-2016718）存放于大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院王福生教授研究組。

1.2 儀器與試劑

Bruker AM-400型核磁共振儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-2000A (上海亞榮生化儀器廠)；300～400目柱色譜硅膠和GF254薄層硅膠(青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20 (Pharmacia)；ODS（日本YMC公司）；石油醚、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇等試劑為工業(yè)級試劑，均需重蒸后使用。

2 提取與分離方法

云南龍膽干燥全株6 kg，粉碎后用95 %乙醇冷浸提取5次，減壓濃縮得到浸膏；濾渣用50 %乙醇水冷浸提取5次，濃縮得到浸膏；將浸膏合并分散于水，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。取513 g正丁醇部位浸膏，經(jīng)大孔吸附樹脂（AB-8）柱層析，用甲醇-水（0%～100%）梯度洗脫，得到5個(gè)組分Fr. 1～5。Fr. 4（30.8 g）經(jīng)ODS柱層析（甲醇-水），梯度洗脫得到6個(gè)組分Fr. 4-1～4-6。Fr. 4-1（5.8 g）經(jīng)硅膠（氯仿-甲醇）和凝膠（甲醇）柱層析得化合物1（28 mg）和化合物2（10 mg）；Fr. 4-2（3.9 g） 經(jīng)硅膠（氯仿-甲醇）和凝膠（甲醇）柱層析得化合物3（16 mg）和化合物6（11 mg）；Fr. 4-3（2.8 g）經(jīng)硅膠（氯仿-甲醇）和凝膠（甲醇）柱層析得化合物4（10 mg）和化合物5（13 mg）。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

化合物1：白色無定形粉末。(400 MHz,CD3OD)6.99 (1H, d,J=1.7 Hz, H-2), 7.12 (1H, d,J=8.3 Hz, H-5), 6.88 (1H, dd,J=1.7, 8.3 Hz, H-6),4.64 (1H, d,J=2.5 Hz, H-7), 3.08 (1H, m, H-8), 4.20(2H, m, H-9), 6.92 (1H, d,J=1.7 Hz, H-2′), 6.76 (1H,d,J=8.1 Hz, H-5′), 6.75 (1H, dd,J=1.7, 8.1 Hz, H-6′),4.67 (1H, d,J=3.0 Hz, H-7′), 3.08 (1H, m, H-8′), 3.86(2H, m, H-9′), 3.83 (3H, s, 4-OCH3), 3.83 (3H, s,4′-OCH3), 4.86 (1H, d,J=6.7 Hz, Glc-1), 3.48 (1H, m,Glc-2), 3.46 (1H, m, Glc-3), 3.37 (1H, m, Glc-4), 3.38(1H, m, Glc-5), 3.86 (1H, m, Glc-6a), 3.66 (1H, m,Glc-6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 137.37(C-1), 111.53 (C-2), 147.41 (C-3), 150.86 (C-4),117.86 (C-5), 119.75 (C-6), 87.03 (C-7), 55.48 (C-8),72.63 (C-9), 133.70 (C-1′), 110.91 (C-2′), 147.26(C-3′), 149.07 (C-4′), 116.06 (C-5′), 120.02 (C-6′),87.43 (C-7′), 55.30 (C-8′), 72.67 (C-9′), 56.71(4-OCH3), 56.39 (4′-OCH3), 102.73 (Glc-1), 74.85(Glc-2), 77.77 (Glc-3), 71.26 (Glc-4), 78.14 (Glc-5),62.45 (Glc-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物1為 4,4′-Dimethoxy- 3′-hydroxy-7,9′:7′,9-diepoxylignan-3-O-β-D-glucopyranoside。

化合物2：白色無定形粉末。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)6.63 (2H, s, H-2, 6), 4.69 (1H, d,J=4.0 Hz, H-7), 3.10 (1H, m, H-8), 3.88 (1H, m,H-9a), 4.25 (1H, m, H-9b), 6.69 (2H, s, H-2′, 6′), 4.73(1H, d,J=3.8 Hz, H-7′), 3.10 (1H, m, H-8′), 3.88 (1H,m, H-9′a), 4.25 (1H, m, H-9′b), 3.88 (6H, s, 3,5-OCH3), 3.88 (6H, s, 3′, 5′-OCH3), 4.85 (1H, d,J=7.8 Hz, Glc-1), 3.46 (1H, m, Glc-2), 3.18 (1H, m, Glc-3),3.40 (1H, m, Glc-4), 3.40 (1H, m, Glc-5), 3.76 (1H,dd,J=12.0, 2.5 Hz Glc-6a), 3.65 (1H, dd,J=12.0, 5.1 Hz, Glc-6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 133.01(C-1), 104.41 (C-2, 6), 149.28 (C-3, 5), 136.11 (C-4),87.52 (C-7), 55.45 (C-8), 72.81 (C-9), 139.49 (C-1′),104.73 (C-2′, 6′), 154.35 (C-3′, 5′), 135.47 (C-4′),87.12 (C-7′), 55.67 (C-8′), 72.87 (C-9′), 56.77 (3,5-OCH3), 57.04 (3′, 5′-OCH3), 105.27 (Glc-1), 75.65(Glc-2), 78.27 (Glc-3), 71.24 (Glc-4), 77.74 (Glc-5),62.50 (Glc-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為Syringaresinol-4′-O-β-D-glucopyranoside。

化合物3：黃色油狀物。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ: 6.99 (1H, d,J=1.9 Hz, H-2), 7.11 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.88 (1H, dd,J=8.4, 1.9 Hz, H-6),5.54 (1H, d,J=5.9 Hz, H-7), 3.44 (1H, m, H-8), 3.80(2H, m, H-9), 6.92 (2H, d,J=3.1 Hz, H-2′, 6′), 6.50(1H, d,J=15.9 Hz, H-7′), 6.19 (1H, dd,J=15.9, 5.9 Hz,H-8′), 4.16 (2H, dd,J=5.9, 1.5 Hz, H-9′), 3.84 (3H, s,3-OCH3), 4.85 (1H, d,J=7.8 Hz, Glc-1), 3.45 (1H, m,Glc-2), 3.43 (1H, m, Glc-3), 3.36 (1H, m, Glc-4), 3.36(1H, m, Glc-5), 3.82 (1H, m, Glc-6a), 3.64 (1H, m,Glc-6b)；1C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 137.99(C-1), 111.09 (C-2), 150.89 (C-3), 147.63 (C-4),117.89 (C-5), 119.37 (C-6), 88.77 (C-7), 55.35 (C-8),64.90 (C-9), 130.00 (C-1′), 112.02 (C-2′), 145.51(C-3′), 149.15 (C-4′), 132.69 (C-5′), 116.46 (C-6′),131.94 (C-7′), 127.60 (C-8′), 63.84 (C-9′), 56.71(3-OCH3), 102.64 (Glc-1), 74.85 (Glc-2), 77.79(Glc-3), 71.28 (Glc-4), 78.15 (Glc-5), 62.44 (Glc-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為Dehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucopyranoside。

化合物4 ：黃色油狀物。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 7.00 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2), 7.13 (1H, d,J=8.3 Hz, H-5), 6.90 (1H, dd,J=8.3, 2.0 Hz, H-6),5.63 (1H, d,J=6.1 Hz, H-7), 3.51 (1H, m, H-8), 3.84(2H, m, H-9), 7.21 (1H, d,J=1.5 Hz, H-2′), 7.25 (1H,d,J=1.5 Hz, H-6′), 7.59 (1H, d,J=15.9 Hz, H-7′), 6.66(1H, dd,J=15.9, 7.9 Hz, H-8′), 4.86 (1H, d,J=7.8 Hz,Glc-1), 3.46 (1H, m, Glc-2), 3.45 (1H, m, Glc-3), 3.37(1H, m, Glc-4), 3.37 (1H, m, Glc-5), 3.82 (1H, m,Glc-6a), 3.64 (1H, m, Glc-6b)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 137.89 (C-1), 111.15 (C-2), 150.98 (C-3),147.85 (C-4), 117.95 (C-5), 119.41 (C-6), 89.67 (C-7),54.88 (C-8), 64.61 (C-9), 129.77 (C-1′), 114.23 (C-2′),146.05 (C-3′), 152.84 (C-4′), 130.96 (C-5′), 119.97(C-6′), 156.04 (C-7′), 127.18 (C-8′), 196.5 (C-9′),56.79 (3-OCH3), 56.69 (3′-OCH3), 102.63 (Glc-1),74.86 (Glc-2), 77.83 (Glc-3), 71.29 (Glc-4), 78.19(Glc-5), 62.46 (Glc-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物4為(7S,8R)-Balanophonin-4-O-β-D-glucopyranoside。

化合物5：黃色油狀物。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 6.93 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2), 6.75 (1H, d,J=8.1 Hz, H-5), 6.81 (1H, dd,J=8.1, 2.0 Hz, H-6),5.51 (1H, d,J=6.3 Hz, H-7), 3.48 (1H, m, H-8), 3.81(2H, m, H-9), 6.95 (1H, d,J=1.5 Hz, H-2′), 6.97 (1H,d,J=1.5 Hz, H-6′), 6.60 (1H, d,J=15.9 Hz, H-7′), 6.22(1H, dd,J=15.9, 6.7 Hz, H-8′), 4.48 (1H, m, H-9′a),4.29 (1H, m, H-9′b), 4.35 (1H, d,J=7.8 Hz, Glc-1),3.21 (1H, m, Glc-2), 3.27 (1H, m, Glc-3), 3.29 (1H, m,Glc-4), 3.35 (1H, m, Glc-5), 3.84 (1H, m, Glc-6a),3.66 (1H, m, Glc-6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 134.51 (C-1), 110.48 (C-2), 149.10 (C-3), 147.57(C-4), 116.15 (C-5), 119.73 (C-6), 89.35 (C-7), 55.15(C-8), 64.85 (C-9), 132.32 (C-1′), 112.09 (C-2′),145.49 (C-3′), 149.41 (C-4′), 130.31 (C-5′), 116.68(C-6′), 134.24 (C-7′), 124.21 (C-8′), 70.95 (C-9′),56.72 (3-OCH3), 56.35 (3′-OCH3), 103.13 (Glc-1),75.13 (Glc-2), 77.99 (Glc-3), 71.69 (Glc-4), 78.12(Glc-5), 62.81 (Glc-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為(7S,8R)-Dehydrodiconiferyl alcohol-9′-O-β-D-glucopyranoside。

化合物6：白色無定形粉末。1H-NMR (400 MHz,CD3OD)δ: 6.95 (1H, d,J=1.9 Hz, H-2), 7.10 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.84 (1H, dd,J=8.4, 1.9 Hz, H-6),4.79 (1H, d,J=6.4 Hz, H-7), 2.32 (1H, m, H-8), 3.82(1H, m, H-9a), 3.62 (1H, m, H-9b), 6.76 (1H, d,J=1.9 Hz, H-2′), 6.68 (1H, d,J=8.1 Hz, H-5′), 6.60 (1H, dd,J=8.1, 1.9 Hz, H-6′), 2.46 (1H, dd,J=13.4, 11.0 Hz,H-7a′), 2.87 (1H, dd,J=13.4, 4.9 Hz, H-7b′), 2.67 (1H,m, H-8′), 3.97 (2H, dd,J=8.4, 6.5, H-9′), 3.82 (3H, s,4-OCH3), 3.79 (3H, s, 4′-OCH3), 4.85 (1H, d,J=7.9 Hz, Glc-1), 3.46 (1H, m, G-2), 3.44 (1H, m, Glc-3),3.38 (1H, m, Glc-4), 3.37 (1H, m, Glc-5), 3.84 (1H, m,Glc-6a), 3.67 (1H, m, Glc-6b)；13C-NMR (100MHz,CD3OD)δ: 139.44 (C-1), 111.23 (C-2), 150.79 (C-3),147.23 (C-4), 117.83 (C-5), 119.55 (C-6), 83.79 (C-7),54.13 (C-8), 60.45 (C-9), 133.46 (C-1′), 113.32 (C-2′),148.98 (C-3′), 145.79 (C-4′), 116.17 (C-5′), 122.11(C-6′), 33.60 (C-7′), 43.80 (C-8′), 73.64 (C-9′), 102.81(Glc-1), 74.89 (Glc-2), 77.80 (Glc-3), 71.30 (Glc-4),78.17 (Glc-5), 62.47 (Glc-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物6為Lariciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside。

4 小結(jié)

（1）本實(shí)驗(yàn)首次對龍膽屬植物云南龍膽的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)6個(gè)木脂素苷類成分，化合物1和2為雙四氫呋喃類木脂素苷，化合物3-6為苯并呋喃類木脂素苷，它們均首次從該藥用植物中分離得到。

（2）目前龍膽屬植物中僅在滇龍膽中發(fā)現(xiàn)含有木脂素苷類成分[11]。龍膽科假龍膽屬植物尖葉假龍膽（Gentianella acuta）中也有木脂素苷類成分[12]。

（3）苯并呋喃類和雙四氫呋喃類木脂素及其苷類化合物具有抗腫瘤、肝保護(hù)、抗氧化、抗病毒、抗炎以及免疫抑制等生物活性[13-14]。本研究豐富了龍膽屬植物的化學(xué)成分研究，為該藥用植物進(jìn)一步的藥理研究及開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。

[1]《中國植物志》編輯委員會. 中國植物志: 第 62卷[M].北京:科學(xué)出版社, 1977.

[2]賈小嬌,劉慧鵬,張愛玲,等. 云南龍膽科民族植物藥的研究概況[J]. 云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,29(增刊):144-148.

[3]王彩君,王智民,王維皓,等. 龍膽屬植物中的化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J]. 中國中藥雜志, 2009, 34(23):2987-2994.

[4]張劍輝,宋慧君,李淑媛. 雛菊葉龍膽酮對局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用及機(jī)制探討[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào),2005, 21(002): 220-224.

[5]李寧,譚寧華,周俊,等. 大葉仙茅中一個(gè)新的木脂素苷[J].云南植物研究, 2003, 25(6): 711-715.

[6]Wang C Z, Yu D Q. Lignan and acetylenic glycosides form aster auriculatus[J]. Phytochemistry, 2009, 48(4):711-717.

[7]Ye Q H, Zhao W M, Qin G W. Lignans from dendrobium chrysanthum[J]. Journal of Asian Natural Products Research, 2004, 6(1): 39-43.

[8]Tsutomu W, Yoshimi N, Tadataka N. Further constituents from the bark of Tabebuia impetiginosa[J].Phytochemistry, 2005, 66(5): 589-597.

[9]Jiang Z H, Takashi T, Masafumi S, et al. Studies on a Medicinal Parasitic Plant: Lignans from the stems of cynomorium songaricum[J]. Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 2001, 49(8): 1036-1038.

[10]Masataka S, Masao K. Characterization of lariciresinol glucosides from osmanthus asiaticus[J]. Heterocycles,1993, 36(1): 117-120.

[11]Xu M, Yang C R, Zhang Y J. Minor antifungal aromatic glycosides from the roots of gentiana rigescens(Gentianaceae) [J]. Chinese Chemical letters, 2009,20(10): 1215-1217.

[12]王知斌,翟亞東,于瑩,等. 尖葉假龍膽中木脂素類成分的分離與鑒定[J]. 中藥材,2014,37(5): 800-803.

[13]汪秋安,徐雨,余玲敏,等. 苯并呋喃與苯并二氧六環(huán)類新木脂素及其衍生物的合成與生物活性研究[J]. 湖南大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版, 2014, 41(7): 90-96.

[14]王丹,尉捷,許欣然,等. 天然雙四氫呋喃類木脂素化合物的化學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2017,23(8): 226-234.