Excel工具表對(duì)儀器白細(xì)胞分類及復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行驗(yàn)證

謝婧雯，姜 函，陳 瓊，盛朝凱，李小強(qiáng)

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 400014)

深入了解血液分析儀白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)性能是臨床實(shí)踐的重要工作[1]。為提高儀器白細(xì)胞分類的臨床適用性，本研究根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，將Sysmex XE-2100血液分析儀白細(xì)胞分類結(jié)果與參考方法分類結(jié)果比較，同時(shí)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室自定復(fù)檢規(guī)則的適用性。數(shù)據(jù)分析過程中，利用Excel的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析和作圖功能，制定出一套有高度實(shí)用性的分析工具和散點(diǎn)圖繪制方法，實(shí)現(xiàn)了數(shù)據(jù)分析的程式化和自動(dòng)化，為方法比對(duì)過程提供思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 200份標(biāo)本均為該院接受檢查的兒童血液標(biāo)本，其中100份來自健康體檢兒童，100份來自包含各類白細(xì)胞分類異常的住院患兒，標(biāo)本均采用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝。按照衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T246-2005文件中附表C.1臨床性能研究的標(biāo)本類型要求選擇[2]。所有標(biāo)本來源兒童年齡為0～16歲。

1.2白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 收集標(biāo)本4 h內(nèi)在Sysmex XE-2100 血液分析儀上完成檢測。配套試劑、全血質(zhì)控物及校準(zhǔn)物由Sysmex公司提供。試驗(yàn)前先校準(zhǔn)儀器、完成質(zhì)控。同時(shí)每份標(biāo)本在1 h 內(nèi)推制血片作瑞氏染色、顯微鏡鏡檢。

1.3血涂片的制備及手工分類 每份標(biāo)本按照WS/T246-2005文件制作3張涂片，并手工分類。

1.4性能驗(yàn)證方案

1.4.1性能比較試驗(yàn) 儀器法不準(zhǔn)確度通過2種方法的比較來確定。對(duì)200份標(biāo)本以儀器法測定，分別記錄計(jì)數(shù)結(jié)果和細(xì)胞計(jì)數(shù)量；同時(shí)按照參考方法手工分類計(jì)數(shù)白細(xì)胞；每天測定50份，共分4 d完成。計(jì)算2種方法分類結(jié)果均值和不準(zhǔn)確度，以美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)頒布的H20-A2版標(biāo)準(zhǔn)，判斷儀器結(jié)果是否在95%CI內(nèi)[3]。

1.4.2復(fù)檢規(guī)則的有效性評(píng)估 復(fù)檢的目的是不漏檢形態(tài)學(xué)異常改變，以防導(dǎo)致臨床漏診、誤診[4]。以人工分類計(jì)數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估XE-2100儀器對(duì)白細(xì)胞分類結(jié)果檢出的有效性，以及儀器報(bào)警系統(tǒng)功能有效性和復(fù)檢規(guī)則適用性，利用Laboman分析軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。國際血液學(xué)復(fù)檢專家組提供了41條報(bào)警規(guī)則，本研究實(shí)際選用其中23條規(guī)則。復(fù)查內(nèi)容包括3系數(shù)量、形態(tài)、大小，以及染色性異常、異型淋巴細(xì)胞、原始細(xì)胞、聚集和寄生蟲等。手工涂片陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)包括：原始細(xì)胞≥1%，晚幼?！?%，早中幼粒細(xì)胞細(xì)胞≥1%，有核紅細(xì)胞(NRBC)≥1%，異常淋巴細(xì)胞>2%等[5]。

1.5Excel工具表制作

1.5.1數(shù)據(jù)收集 根據(jù)不準(zhǔn)確度的計(jì)算公式，計(jì)算不確定度[3]。其中需要參與計(jì)算的變量包括參考方法中血涂片A和B計(jì)數(shù)結(jié)果(XA和XB)和細(xì)胞總數(shù)nr，儀器法計(jì)數(shù)的兩次分類結(jié)果(YC和YD)和計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)nt，分別填入Excel表中。

1.5.2數(shù)據(jù)分析與作圖 在Excel2007表中，設(shè)定公式自動(dòng)計(jì)算不確定度，包括xi均值、yi均值、T/nt、R/nr、SE及95%CI下限和上限，并設(shè)定條件格式判斷單一數(shù)據(jù)是否合格。

為更直觀地觀察分類結(jié)果的可接受性，將數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)作圖。在Excel2007中，插入XY散點(diǎn)圖，以參考方法計(jì)數(shù)結(jié)果為X軸，儀器法測定結(jié)果為Y軸。分別設(shè)置3個(gè)系列，X值均為參考方法計(jì)數(shù)結(jié)果，系列1的Y為參考方法結(jié)果95%CI下限值，系列2的Y為參考方法結(jié)果95%CI上限值，系列3為儀器法測定結(jié)果均值。系列1和系列2數(shù)據(jù)畫趨勢線，系列3以散點(diǎn)圖顯示儀器法分類結(jié)果，最后得到單一種類白細(xì)胞分類比較試驗(yàn)散點(diǎn)圖。分別作中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及分類計(jì)數(shù)比例>5%嗜酸性粒細(xì)胞分類結(jié)果圖。

2 結(jié) 果

2.1白細(xì)胞分類儀器法與參考方法結(jié)果符合率比較 見表1。

表1 XE2100儀器白細(xì)胞分類與人工鏡檢分類符合率(n=200)

2.2Excel工具表 利用公式和Excel計(jì)算功能，通過對(duì)單元格的逐個(gè)填寫，得到1張可以自動(dòng)計(jì)算和判斷白細(xì)胞分類性能驗(yàn)證資料和結(jié)果的Excel工具表。在使用該表時(shí)，只需要按照單元格計(jì)算要求填入對(duì)應(yīng)的計(jì)數(shù)結(jié)果，就可以快速判斷結(jié)果。

注：A表示中性粒細(xì)胞比較試驗(yàn)散點(diǎn)圖；B表示淋巴細(xì)胞比較試驗(yàn)散點(diǎn)圖；C表示單核細(xì)胞比較試驗(yàn)散點(diǎn)圖；D表示嗜酸細(xì)胞比較試驗(yàn)散點(diǎn)圖

圖1白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果比較試驗(yàn)散點(diǎn)圖

2.3判斷數(shù)據(jù)符合性的比較試驗(yàn)散點(diǎn)圖 通過1.5.2中所述的繪圖方式，得到血液分析儀的各種細(xì)胞分類結(jié)果與參考方法結(jié)果的比較試驗(yàn)散點(diǎn)圖，通過圖形，可以直觀地看到符合數(shù)據(jù)在可信區(qū)間內(nèi)，而不符合數(shù)據(jù)分布于2條范圍趨勢線外側(cè)。見圖1。

2.4儀器復(fù)檢規(guī)則有效性評(píng)估 儀器法與人工鏡檢法相比，靈敏度為95.0%，特異度為56.4%，陽性預(yù)測值為68.1%，陰性預(yù)測值為91.9%，總有效率為75.5%，假陽性率為22.0%，假陰性率為2.5%；提示推片率達(dá)69.0%。觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則報(bào)警提示的原因分布，異常淋巴細(xì)胞和未成熟粒細(xì)胞比例分別占40.8%和8.9%，列前2位。見表2。

表2 儀器報(bào)警提示與人工鏡檢細(xì)胞形態(tài)的情況統(tǒng)計(jì)(n，n=200)

3 討 論

隨著血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的技術(shù)不斷更新，血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)儀也越來越先進(jìn)，大大降低了檢驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。然而，各類技術(shù)都只是間接反映細(xì)胞特征，得出的結(jié)論當(dāng)然也是間接證據(jù)，只能作為篩查手段，而在機(jī)體處于復(fù)雜的病理情況下，勢必會(huì)有一定的漏檢或誤判概率[6]。不同技術(shù)分類結(jié)果也有一定差異，這在各類臨床分類驗(yàn)證研究中都得到了證實(shí)[7-9]。

本研究發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)室儀器法假陽性率為22%，假陰性率為2.50%，滿足驗(yàn)證要求[10]。但特異度較低，提示兒童推片率(69%)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于文獻(xiàn)報(bào)道的成人推片率[4,11-12]?？赡芤?yàn)閮和w內(nèi)淋巴細(xì)胞較多，且細(xì)胞核染色性偏向幼稚，所以儀器報(bào)警規(guī)則中，異常淋巴細(xì)胞和未成熟粒細(xì)胞比例分別占了40.75%和8.88%，是提示復(fù)檢最多的類型。這也說明儀器對(duì)異常淋巴細(xì)胞和未成熟粒細(xì)胞的分類檢測還存在一定缺陷，有待新的檢測技術(shù)和方法來改善這一狀況。符合率最低的是單核細(xì)胞(86%)，證明儀器對(duì)單核細(xì)胞的自動(dòng)分類效果最差，需要手工分類證實(shí)的很多標(biāo)本都屬于這類細(xì)胞檢查結(jié)果異常標(biāo)本。

既往的血液分析儀的分類性能驗(yàn)證研究多采用手工計(jì)算的方式，標(biāo)準(zhǔn)文件WS/T246-2005中所擬定的方法也是手工登記、計(jì)算不準(zhǔn)確度數(shù)據(jù)，這一工作流程繁瑣而且不直觀。本研究在實(shí)施過程中，充分利用Excel工具表，只需要填入2種方法計(jì)數(shù)的結(jié)果，就可以直接得到對(duì)數(shù)據(jù)合格性的最終判斷，并可直觀地反映到散點(diǎn)圖上，也能直接計(jì)算合格率，并與標(biāo)準(zhǔn)文件比較。這一工具的使用，使得驗(yàn)證分析過程一勞永逸，大大提高了效率和直觀程度，值得在臨床上推廣應(yīng)用。同時(shí)還可利用血液分析儀自帶數(shù)據(jù)分析軟件Labman程序，比較計(jì)算儀器法與人工分類方法的性能特征，設(shè)定和調(diào)整復(fù)檢規(guī)則，在保證分析篩選效能的前提下，降低復(fù)檢率、優(yōu)化臨床工作流程。

參考文獻(xiàn)

[1]楊靜梅，林一民．全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類功能評(píng)價(jià)[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(1)：81-82．

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考方法：WS/T246-2005[S]．北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2005．

[3]National Committee For Clinical Laboratory Standards.Reference leukocyte(WBC) differential count (proportional) and evaluation of instrumental methods-2nd edition:H20-A2[S].Waney,PA,USA:NCCLS，2007．

[4]王秋菊，吳雙，徐淑端，等．血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)在IS015189認(rèn)可中的重要性[J/CD]．臨床檢驗(yàn)雜志(電子版)，2015，4(2)：882-885．

[5]熊立凡，劉成玉．臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M]．4版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2007．

[6]岳波，賀嘉蕾，劉曼嬌，等．BECKMAN-COULTER LH780血液分析儀復(fù)檢規(guī)則的修訂及驗(yàn)證[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2016，31(2)：106-110．

[7]費(fèi)陽，王薇，鐘堃，等．我國白細(xì)胞分類項(xiàng)目參考區(qū)間現(xiàn)狀及與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[J]．WS/T405-2012臨床檢驗(yàn)雜志，2015，33(6)：475-477．

[8]姜華，吳軍錄，戴燕，等．全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀Sysmex XE-2100復(fù)檢規(guī)則的建立及應(yīng)用評(píng)價(jià)[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(2)：132-134．

[9]朱天生．BC-5800全血細(xì)胞分析儀細(xì)胞復(fù)檢規(guī)則的制定及評(píng)價(jià)[J]．內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2017，36(1)：86-87．

[10]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì).2012醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床血液學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明:CNAS-CL43[S]．北京：中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)，2012．

[11]陳亞芳.血細(xì)胞分析復(fù)檢規(guī)則的建立及其應(yīng)用[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36(9)：1297-1298．

[12]薛贏俊,邵華卿.自動(dòng)血細(xì)胞形態(tài)預(yù)分類系統(tǒng)的性能驗(yàn)證方法的探索[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13(A02)：163-166．