德國美利奴羊胎兒期骨骼肌組織學結構發(fā)育特征研究

李雪嬌，劉晨曦，孫亞偉，楊開倫，劉明軍

(1 新疆農業(yè)大學 動物科學學院，新疆 烏魯木齊 830000；2 新疆畜牧科學院 生物技術研究所，新疆 烏魯木齊 830000)

綿羊一直是畜牧業(yè)的主要畜種[1]。羊肉營養(yǎng)價值較高，是人們日常生活中重要的肉品來源之一[2]。隨著養(yǎng)羊業(yè)的快速發(fā)展，人們越來越注重羊肉的品質。影響肉品質的原因很多，骨骼肌肌纖維的組織學結構特征是決定肉品質的關鍵因素之一[3-4]。胎兒期是決定產肉性能的關鍵時期，胎兒期肌纖維的數(shù)量和直徑影響著骨骼肌終生的生長發(fā)育，且肌纖維組成類型和比例也在胎兒期基本形成。目前關于胎兒期骨骼肌肌纖維發(fā)育的相關研究多以豬為主[5-6]，反芻動物較少。胎兒期肌纖維生長發(fā)育能力影響或決定著綿羊的產肉性能，因此弄清綿羊胎兒期骨骼肌肌纖維的組織學發(fā)育性特征，對綿羊產肉性能以及肉品質性能的提高具有重要的科學意義。

家畜肌纖維形成大致可分為2個階段，即初級纖維和二級纖維形成階段。目前國內對于豬骨骼肌的形成及其發(fā)育規(guī)律研究相對較為成熟，豬初級纖維大約從妊娠后32 d開始形成，初級纖維形成后不久(妊娠后35 d左右)開始形成二級纖維，第85天二級纖維開始大量形成，直到妊娠第105天左右所有的肌纖維全部形成，之后肌纖維的數(shù)量保持相對穩(wěn)定，直到成年[7-9]。目前，對綿羊骨骼肌發(fā)育的研究尚比較少，有學者發(fā)現(xiàn)綿羊妊娠后期和出生后的肌肉生長由早期肌纖維數(shù)量增加轉變?yōu)榧±w維體積增大[10]，此時表現(xiàn)為肌纖維直徑和長度增加。除了肌纖維數(shù)量，肌纖維組成類型(Ⅰ型和Ⅱ型纖維)和比例也在胎兒期基本形成，并在胎兒中后期開始發(fā)育。胎兒肌纖維的形成與發(fā)育存在品種差異性，任航行[11]比較了Texel羊和烏珠穆沁羊胎兒中后期發(fā)育模型的差異，發(fā)現(xiàn)骨骼肌組織生長發(fā)育差異具有時段特征。這種發(fā)育模型上的差異有可能是造成產肉性能高低不同的原因。目前對綿羊胎兒期肌纖維形成和分化的大致過程基本清楚，但對于肌纖維類型的發(fā)育模型，初級纖維和二級纖維的數(shù)量、比例變化規(guī)律，以及其與不同肌纖維類型形成的關系等還有待進一步深入研究。

德國美利奴羊是由泊力考斯和英國萊斯特公羊與原產德國的美利奴羊雜交培育而成[12]，具有早熟、生長發(fā)育快、產肉多、繁殖率高以及被毛品質好等優(yōu)良特點。德國美利奴羊周歲母羊平均體質量可達58.67 kg，凈肉率高達36.29%[13]，是一種典型的肉用羊，但其骨骼肌發(fā)育機制尚不清楚。德國美利奴羊產肉性能優(yōu)良，胎兒期肌纖維的生長發(fā)育能力很有可能影響其產肉性狀。鑒于目前對綿羊骨骼肌肌肉發(fā)生機制的認識尚不全面，本研究選取德國美利奴羊胎兒肌纖維發(fā)育的中后期，通過研究肌纖維直徑、數(shù)量、密度和肌纖維類型等組織學結構特征，探究胎兒期骨骼肌組織學生長發(fā)育特征，以期為進一步探究綿羊胎兒骨骼肌發(fā)生機制奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

選擇年齡相近、體況良好、體質量55～60 kg的成年德國美利奴母羊(購自新疆巴州種畜場)，經(jīng)過埋栓同期發(fā)情處理后進行人工授精配種，通過超數(shù)排卵獲得胚胎并移植到身體狀況相同的受體母羊，懷孕母羊均按照國家農業(yè)行業(yè)標準(NY/T 816-2004)的肉羊飼養(yǎng)標準，根據(jù)母羊體質量定時、定量飼喂，其后代為試驗動物即德國美利奴羊胎兒。采樣時間分別為懷孕母羊妊娠的第75天(D75)、第105天(D105)和第135天(D135)，每組采樣個體數(shù)為3只。

1.2 主要試劑

快肌抗體(Monoclonal Anti-Myosin (Skeletal,Fast) antibody produced in mouse)和慢肌抗體(Monoclonal Anti-Myosin (Skeletal,Slow) antibody produced in mouse)，購自Sigma公司；伊紅染液(水溶性)和蘇木素染液(Harris)，購自(臺資)珠海貝索生物技術有限公司；DAB染色液(鏈霉菌-生物素法)免疫組化試劑盒，購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。

1.3 樣品采集及組織切片的制作

在母羊妊娠的第75，105和135天分別進行剖腹產取出胎兒，迅速采集3只胎羊的骨骼肌組織(背最長肌)，液氮凍存，記錄試驗動物羊號、體長、體高、體質量等。所有試驗動物取材部位相同，對胎兒骨骼肌組織進行常規(guī)的石蠟包埋，組織修塊(6 mm×6 mm)后置于自來水中沖洗3 h以上或過夜，用體積分數(shù)50%,70%,80%,85%和90%乙醇依次各浸泡30 min，然后用體積分數(shù)95%乙醇浸泡30 min×2，體積分數(shù)100%乙醇浸泡30 min×2，使組織塊完全脫水；再將組織塊放入二甲苯-無水乙醇溶液(V(二甲苯)∶V(無水乙醇)=1∶1)中浸泡20 min，二甲苯中浸泡10 min×2；經(jīng)過二甲苯透明后，放入60 ℃烘箱中，二甲苯-石蠟溶液(V(二甲苯)∶V(石蠟)=1∶1)浸泡1 h，放入石蠟浸泡1 h×2，最后對組織塊進行包埋[14-15]。

1.4 常規(guī)HE染色

將石蠟包埋好的樣品按照6 μm厚度連續(xù)切片，每個樣品制作6～8張組織切片，65 ℃烘片3 h，冷卻至室溫，用HE染色法[16-18]對切片進行染色。將切片于體積分數(shù)100%二甲苯中浸泡15 min，重復2次，體積分數(shù)100%乙醇-二甲苯溶液(V(體積分數(shù)100%乙醇)∶V(甲苯)=1∶1)浸泡3～5 min，體積分數(shù)100%,95%,80%,70%,50%乙醇各浸泡3 min，用新鮮配制的蘇木素溶液染色8～10 min后，用自來水沖洗3～5 min，置于體積分數(shù)0.5%鹽酸酒精中分色藍化3～5 s后，自來水沖洗3～5 min，再于體積分數(shù)70%,80%,90%乙醇中各浸泡3 min，用體積分數(shù)0.5%伊紅溶液染色浸泡2 min，體積分數(shù)95%乙醇浸泡3 min×2；體積分數(shù)100%乙醇浸泡3 min×2；再將切片放入體積分數(shù)100%乙醇-二甲苯溶液(V(體積分數(shù)100%乙醇)∶V(二甲苯)=1∶1)浸泡3 min，100%二甲苯浸泡5 min×2，用中性樹膠封片。

1.5 肌纖維類型的鑒定

使用粘附載玻片(多聚賴氨酸載玻片)切片，厚度約5 μm，每個樣品切3張組織切片，放入烘箱中加熱2～3 h，冷卻至室溫后進行脫蠟和水化，用PBS溶液沖洗3 min，重復3次進行抗原修復。將切片浸入枸櫞酸緩沖液，微波中火(98～100 ℃)加熱至沸騰，冷卻5 min，重復2次；用PBS溶液沖洗3 min，重復3次；加內源性過氧化物酶阻斷劑孵育10 min，用PBS溶液沖洗3 min，重復3次；加非特異染色阻斷劑孵育10 min，用PBS溶液沖洗3 min，重復3次；分別加快肌抗體 (M4276，Sigma)和慢肌抗體(M8421，Sigma)4 ℃孵育過夜，用PBS溶液沖洗3 min，重復3次；加生物素標記的羊抗小鼠/兔IgG聚合物孵育10 min，用PBS溶液沖洗3 min，重復3次；加鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶孵育10 min，用PBS溶液沖洗3 min，重復3次；加DAB顯色液孵育5 min，自來水沖洗后加蘇木素體細胞染色液孵育30 s，PBS溶液沖洗反藍，梯度乙醇脫水，二甲苯透明后用中性樹膠和蓋玻片封片[19-20]。

1.6 分析方法

用Olympus DP2-BSW圖像采集系統(tǒng)取10×40倍放大的圖像，每個樣本取5張切片進行分析，每個樣品選取不重復、不缺失的10個視野。用圖像分析軟件(Imgae)進行數(shù)據(jù)的測量，統(tǒng)計單位面積肌纖維的數(shù)量、直徑和面積。肌纖維數(shù)量為每個視野面積內單根肌纖維總數(shù)量的平均值，肌纖維直徑為每個視野面積內肌纖維直徑的平均值，肌纖維密度值為每個視野中肌纖維數(shù)量除以視野面積所得的平均值。用圖像分析軟件統(tǒng)計視野面積內快肌和慢肌數(shù)量。所測量數(shù)據(jù)用SPSS進行統(tǒng)計與分析，統(tǒng)計結果以“平均值±標準差”表示，同時對所得試驗數(shù)據(jù)進行方差分析。

2 結果與分析

2.1 德國美利奴胎羊的發(fā)育情況

德國美利奴羊D75～D135胎兒體尺性狀如表1所示。由表1可以看出，在妊娠的第75～135天，德國美利奴羊胎兒各項體尺指標均在不斷增加。隨著懷孕母羊妊娠時間的增加，胎兒體質量增加，體長和體高增長，體尺性狀均呈現(xiàn)上升趨勢。妊娠75～105 d胎兒體質量呈近5倍增長，體長、體高呈近2倍增長，妊娠105～135 d胎兒體質量呈3.5倍增長，體長、體高的增長趨勢相對緩慢。

表1 德國美利奴羊胎兒期體尺性狀Table 1 German Merino sheep fetal body traits

2.2 德國美利奴羊胎兒期肌纖維組織學結構特征

采用常規(guī)HE染色法對德國美利奴羊胎兒背最長肌進行組織切片分析，結果如圖1所示。由圖1可以看出，德國美利奴羊胎兒背最長肌細胞核被蘇木素著色為藍紫色，細胞質、間質以及纖維類物質均被伊紅著色為不同程度的紅色。D75胎兒骨骼肌可見中空管狀的初級肌纖維典型結構，圍繞在初級肌纖維的四周，形成了數(shù)量眾多的次級肌纖維，此時肌纖維仍在不斷形成。D105和D135胎兒骨骼肌切片未見初級肌纖維結構，而均呈現(xiàn)為次級肌纖維結構。表明在妊娠105 d之前，初級肌纖維已經(jīng)與次級肌纖維融合，肌纖維的形成已經(jīng)完成。妊娠135 d時，視野內單根肌纖維面積明顯增大，且肌間脂肪含量逐漸降低，肌纖維直徑顯著增粗，且排列緊密。

A.D75；B.D105；C.D135圖1 德國美利奴羊胎兒期不同發(fā)育時期背最長肌的HE染色觀察(10×40)Fig.1 German Merino sheep fetus at different developmental stages of longissimus muscle HE staining result(10×40)

單位面積肌纖維數(shù)量、直徑是肌纖維組織結構最重要的2個特征。本研究針對德國美利奴羊胎兒的背最長肌組織，統(tǒng)計分析了單位面積肌纖維數(shù)量、直徑和單位面積，結果如表2所示。由表2可以看出，D75胎兒單位面積肌纖維數(shù)量較少，為(310.23±77.15) 根；D105胎兒單位面積肌纖維數(shù)量最大，為(369.41±72.64) 根，D135胎兒單位面積肌纖維數(shù)量為(301.80±41.76) 根，低于D105胎兒?？梢姡瑥腄75至D105，單位面積肌纖維數(shù)量逐漸增加，于D105時單位面積肌纖維數(shù)量達到最高，但肌纖維數(shù)量在3個時期間無統(tǒng)計學差異。從D75至D135肌纖維直徑逐漸增大，胎兒肌纖維直徑由(1.80±0.26) μm發(fā)育至(2.91±0.25) μm，單位面積肌纖維直徑增粗了1.6倍，且D75至D105胎兒肌纖維直徑的增長幅度較為平緩，D105至D135胎兒肌纖維直徑的增長幅度顯著增大。肌纖維面積隨發(fā)育階段呈現(xiàn)遞增趨勢，而肌纖維密度隨發(fā)育階段呈現(xiàn)先高后低的變化趨勢，D105時期胎兒單位面積肌纖維密度最大，達6.82根/μm2。

表2 德國美利奴羊胎兒期單位面積肌纖維數(shù)量、直徑的統(tǒng)計結果Table 2 The statistical results of quantity,Germany Merino sheep fetal unit area of muscle fiber diameter

注：“*”表示該時期與其他時期相比差異顯著(P<0.05)。

Note: The“*”stand for the period is significant compared with other periods(P<0.05).

2.3 德國美利奴羊胎兒期肌纖維類型的變化規(guī)律

使用快肌抗體 (M4276，Sigma)和慢肌抗體(M8421，Sigma)，通過DAB染色液(鏈霉菌-生物素法)免疫組化方法對德國美利奴羊胎兒不同發(fā)育時期背最長肌進行染色，結果如圖2所示。由圖2可以看出，DAB染色液會使相應抗原出現(xiàn)區(qū)域沉淀，使相應抗原存在處顯示淺黃色、棕黃色或是褐色，蘇木素體細胞染色液可將細胞核染至淺藍色。D75胎兒單位面積快肌數(shù)量較少而慢肌數(shù)量較多，中空的初級纖維結構均為慢肌，圍繞在初級纖維四周的次級纖維為快肌。D105和D135胎兒單位面積快肌數(shù)量明顯增加，而慢肌數(shù)量逐漸減少。

用圖像分析軟件統(tǒng)計單位面積快、慢肌數(shù)量，結果如表3所示。由表3可以看出，單位面積德國美利奴羊D75胎兒骨骼肌褐色快肌數(shù)量較少，為(178.86±5.22) 根;D105胎兒快肌數(shù)量最多，為(323.75±6.13)根;D135胎兒快肌數(shù)量為(281.86±5.64) 根，低于D105胎兒快肌數(shù)量，總體上來看，快肌數(shù)量隨胎齡增大呈先增加后減少趨勢。與快肌數(shù)量的變化不同，胎兒單位面積慢肌數(shù)量隨胎齡增加而逐漸減少，D75時最多，為(83.4±5.36)根， D135時慢肌數(shù)量最少，為(23.9±3.45) 根。德國美利奴羊胎兒不同發(fā)育階段相比，骨骼肌快、慢肌數(shù)量的差異均達極顯著水平(P<0.01)。從肌纖維密度來看，D105時期單位面積快肌密度最大，達5.97 根/μm2，D75時期單位面積慢肌密度最大，為1.54根/μm2。

A.D75(快肌)；B.D105(快肌)；C.D135(快肌)；D.D75(慢肌)；E.D105(慢肌)；F.D135(慢肌)A.D75 (Fast muscle);B.D105 (Fast muscle);C.D135 (Fast muscle);D.D75 (Slow muscle);E.D105 (Slow muscle);F.D135 (Slow muscle)圖2 德國美利奴羊胎兒期不同發(fā)育時期背最長肌快慢肌免疫組化染色結果(10×40)Fig.2 German Merino sheep fetus at different developmental stages of longissimus muscle skeletal muscles immunohistochemical staining results(10×40)

胎齡Gestationalage快肌數(shù)量/根Numberoffastmuscle慢肌數(shù)量/根Numberofslowmuscle快肌密度/(根·μm-2)Fastmuscledensity慢肌密度/(根·μm-2)SlowmuscledensityD75178.86±5.22**83.4±5.36**3.301.54D105323.75±6.13**61.5±20.64**5.971.13D135281.86±5.64**23.9±3.45**5.200.44

注：“**”表示該時期與其他時期相比差異極顯著(P<0.01)。

Note:The“**”stand for the period is very significant compared with other periods(P<0.01).

3 討 論

國內外對家畜肌纖維組織學特性的研究大多以出生后為主，且相關研究最早見于肉牛。如Crouse[21]1972年首次研究了牛肉肌纖維的組織學結構特征。之后Cornforth等[22]發(fā)現(xiàn)，牛肉肌纖維橫截面積隨日齡的增加而增加，Cassens等[23]發(fā)現(xiàn)，肌纖維越細則肌纖維密度就越大，且肌肉橫截面紋理呈天鵝絨狀則表示肉品質優(yōu)良。秦寧等[24]對長白山野豬和東北民豬骨骼肌組織學特性的研究發(fā)現(xiàn)，豬肌纖維直徑與密度呈顯著負相關。總的來看，目前對家畜胎兒不同發(fā)育階段肌纖維生長發(fā)育的數(shù)據(jù)結果尚較為缺乏。

中國農業(yè)科學院任航行[11]比較了特克塞爾(Texel)和烏珠穆沁綿羊不同發(fā)育階段胎兒骨骼肌的組織細胞學特征，發(fā)現(xiàn)多個與肌肉發(fā)生及生肌細胞增殖相關的基因在胎兒特定發(fā)育期的表達差異顯著，并且發(fā)現(xiàn)Texel在D85階段數(shù)目上有明顯增加，而烏珠穆沁綿羊肌纖維數(shù)則在D105時明顯增加。劉衛(wèi)娟[25]研究發(fā)現(xiàn)，隨著懷孕母羊妊娠時間的增加，胎兒體質量、體長、體高逐漸增加，肌纖維的直徑呈遞增趨勢，相應的肌纖維密度也發(fā)生了變化。本研究結果顯示，德國美利奴羊胎兒肌纖維數(shù)量在D105階段達到峰值，骨骼肌中期發(fā)育主要以肌纖維數(shù)量的增加為主，到D105左右肌纖維數(shù)量基本恒定，而胎兒骨骼肌后期發(fā)育主要以肌纖維面積的增大為主，且發(fā)育至后期胎兒肌纖維排列緊致，肌間脂肪含量較少。

根據(jù)肌肉收縮功能的不同，可將肌纖維類型分為慢收縮?、裥秃涂焓湛s?、蛐蚚23,26]，Ⅱ型肌纖維又可分為快速氧化型(ⅡA型)、快速酵解型(ⅡB型)和中間型肌纖維(ⅡX型)3類[24-25]。Ⅰ型肌纖維收縮較慢且持久，其中與肌纖維收縮能力相關的ATP酶活性較低。ⅡB型肌纖維由于其ATP酶活性較高, 因此其收縮快而短[28]。ⅡX型肌纖維收縮能力和代謝特性均處于ⅡA型和ⅡB型肌纖維之間[29-30]。肌纖維類型與肉品質息息相關[31]，氧化性肌纖維(Ⅰ型肌纖維)比例較高時，肉品質嫩度優(yōu)良，而PSE肉和瘦肉率等與ⅡB型肌纖維含量有關[32]。因此，肌纖維類型的研究不僅具有分子學意義，而且對肉品質的改良也起著重要指導作用。本研究通過免疫組化分析，結果發(fā)現(xiàn)中空的初級纖維結構均為慢肌，次級纖維大多數(shù)以快肌為主。D75時胎兒次級纖維成倍圍繞在初級纖維四周，發(fā)育后期胎兒骨骼肌快肌纖維數(shù)量逐漸增加，慢肌纖維數(shù)量隨胎齡的增加而逐漸減少，發(fā)育至D135慢肌數(shù)量極少。肌纖維類型的變化規(guī)律表現(xiàn)為：快肌數(shù)量整體呈先增加后降低趨勢，而慢肌數(shù)量呈逐漸下降趨勢。

綜上所述，本研究探究了德國美利奴羊胎兒骨骼肌組織學結構以及肌纖維類型的變化規(guī)律，確定了德國美利奴羊胎兒妊娠的第105天是肌纖維從肌增生到肌肥大的關鍵時間窗口，肌纖維類型早期發(fā)育主要以慢肌(Ⅰ型肌纖維)為主，后期發(fā)育主要以快肌(Ⅱ型肌纖維)為主。本研究為進一步探究綿羊胎兒骨骼肌發(fā)生機制奠定了基礎，并為提高綿羊產肉量和肉品質性能研究提供了理論依據(jù)。

[參考文獻]

[1] 蔣小懷.新疆養(yǎng)羊業(yè)生產形勢分析與發(fā)展對策研究 [J].草食家畜,2014(2):1-5.

Jiang X H.Study on the production situation and development countermeasures of Xinjiang sheep industry [J].Grass-Feeding Livestock,2014(2):1-5.

[2] 趙有璋.羊生產學 [M].北京:中國農業(yè)出版社,1993.

Zhao Y Z.Production science of sheep and goat [M].Beijing:China Agriculture Press,1993.

[3] 周金星,畢亞玲,高登惠.肌肉組織學結構及其與肉品品質的關系 [J].山地農業(yè)生物學報,2004,23(5):438-441.

Zhou J X,Bi Y L,Gao D H.The relationship between structure and meat quality and muscle tissue [J].Journal of Mountain Agriculture and Biology,2004,23(5):438-441.

[4] 趙 曉,莫德林,張 悅,等.豬的骨骼肌生長發(fā)育研究進展 [J].生命科學,2011,23(1):37-44.

Zhao X,Mo D L,Zhang Y,et al.Research progress on skeletal muscle growth and development in pigs [J].Chinese Bulletin of Life Sciences,2011,23(1):37-44.

[5] 劉居鵬,單安山,彭濟昌.豬肌纖維發(fā)育及其與肉質的關系 [J].中國飼料,2006(16):11-14.

Liu J P,Shan A S,Peng J C.Development of porcine muscle fiber and its relationship with meat quality [J].China Feed,2006(16):11-14.

[6] 郭云雁,王立賢,程篤學,等.豬肌纖維組織學特性研究進展 [J].中國畜牧獸醫(yī),2007,34(8):49-52.

Guo Y Y,Wang L X,Cheng D X,et al.Research progress on histological characteristics of porcine muscle fibers [J].China Animal Husbandry and Veterinary Medicine,2007,34(8):49-52.

[7] Wilson D A,Baker G J,Pijanowski G J,et al.Composition and morphologic features of the interosseous muscle in Standardbreds and Thoroughbreds [J].Am J Vet Res,1991,52(1):133-139.

[8] Ashmore C R,Addis P B,Doerr L.Development of muscle fibers in the fetal pig [J].J Anim Sci,1973,36(6):1088-1093.

[9] Wigmore P M,Stickland N C.Muscle development in large and small big fetuses [J].Journal of Anatomy,1983,40(137):235-245.

[10] Zhu M J,Ford S P,Nathanielsz P W,et al.Effect of maternal nutrient restriction in sheep on the development of fetal skeletal muscle [J].Biol Reprod,2004,71(6):1968-1973.

[11] 任航行.Texel與烏珠穆沁綿羊妊娠中、后期胎兒骨骼肌基因表達譜及組織學分析 [D].北京:中國農業(yè)科學院,2010.

Ren H X.Texel and ujumqin sheep in late pregnancy, fetal skeletal muscle profiles of gene expression and histological analysis [D].Beijing:Chinese Academy of Agricultural Sciences,2010.

[12] 陳曉濤,章煥然,陳偉德.德國美利奴羊在新疆的應用前景 [J].草食家畜,2003(1):9-10.

Chen X T,Zhang H R,Chen W D.The German Merino sheep application in Xinjiang [J].Grass-Feeding Livestock,2003(1):9-10.

[13] 蔣烈戈,李勇忠,景亞平,等.德國美利奴羊與中國美利奴羊主要生產性能比較 [J].中國草食動物科學,2013,33(6):78-79.

Jiang L G,Li Y Z,Jing Y P,et al.The German Merino sheep and Chinese Merino sheep production performance comparison [J].China Herbivores Science,2013,33(6):78-79.

[14] 陳 璐,馬恒輝,金邦莖.骨骼肌組織石蠟制片技術的改進 [J].臨床與實驗病理學雜志,2008,24(2):233-234.

Chen L,Ma H H,Jin B J.Improvement of paraffin sectioning technique for skeletal muscle tissue [J].Chinese Journal of Clinical and Experimental Pathology,2008,24(2):233-234.

[15] 李 艷,高友晶,張 喜,等.細胞石蠟包埋切片技術的應用 [J].江漢大學學報(自然科學版),2011,39(1):72-74.

Li Y,Gao Y J,Zhang X,et al.Application of cell paraffin embedded section technique [J].Journal of Jianghan University (Natural Science Edition),2011,39(1):72-74.

[16] 王 巧.HE染色方法在臨床病理診斷中的應用 [J].臨床合理用藥雜志,2014(32):118-119.

Wang Q.Application of HE staining method in clinical pathological diagnosis [J].Journal of Clinical Rational Drug Use,2014(32):118-119.

[17] 張 敏.HE染色在臨床病理診斷中的應用 [J].齊齊哈爾醫(yī)學院學報,2011,35(4):552-553.

Zhang M.Clinical application of HE staining in clinical pathological diagnosis [J].Journal of Qiqihar University of Medicine,2011,35(4):552-553.

[18] 劉增輝.病理染色技術 [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:14.

Liu Z H.Pathological staining technique [M].Beijing:People Health Publishing House,2001:14.

[19] 吳秉銓,劉彥仿.免疫組化學病理診斷 [M].北京:北京科學技術出版社,2007.

Wu B Q,Liu Y F.Immunohistochemical pathological diagnosis [M].Beijing:Beijing Science and Technology Press,2007.

[20] 張衛(wèi)琴.免疫組化技術在病理診斷中的應用 [J].安徽醫(yī)藥,2012,16(11):1700-1702.

Zhang W Q.Application of immunohistochemical technique in pathological diagnosis [J].Anhui Medical and Pharmaceutical Journal,2012,16(11):1700-1702.

[21] Crouse H R.Palatability of individual muscles from bovine leg steaks as related to chemical and histologocal traits [J].J Food Sci,1972,37:282-287.

[22] Cornforth D P,Hecker A L,Cramger D A,et al.Maturity and its relationship to muscle characteristics of cattle [J].Journal of Animal Science,1980,50:75-80.

[23] Cassens R G,Rymkiewicz J,Szeremeta J,et al.The importance of myofiber type [J].Food Microstructure,1984,3:1-7.

[24] 秦 寧,徐日福,張樹敏,等.長白山野豬和東北民豬骨骼肌組織學特性比較 [J].吉林農業(yè)大學學報,2012,34(3):343-347.

Qin N,Xu R F,Zhang S M,et al.Comparison of histological characteristics of skeletal muscle between Changbai Mountain wild boar and Northeast China pig [J].Journal of Jilin Agricultural University,2012,34(3):343-347.

[25] 劉衛(wèi)娟.幾種肉羊肌肉組織學形狀和理化性狀的研究 [D].河北保定:河北農業(yè)大學,2009.

Liu W J.Several studies of the shape and physical-chemical properties of the muscle groups were studied [D].Baoding,Hebei:Agricultural University of Hebei,2009.

[26] Ausoni S,Gorza L,Schiaffino S,et al.Expression of myosin heavy chain isoforms in stimulated fast and slow rat muscles [J].The Journal of Neuroscience,1990,10:153-160.

[27] 楊飛云.豬骨骼肌肌纖維類型分布及轉化的分子機理研究 [D].四川雅安:四川農業(yè)大學,2008.

Yang F Y.Study on the distribution and transformation of muscle fiber types in porcine skeletal muscle [D].Ya’an,Sichuan:Sichuan Agricultural University,2008.

[28] 高儒松,程志斌,楊正華.肌纖維類型與豬肉品質的關系 [J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36(4):191-195.

Gao R S,Cheng Z B,Yang Z H.Relationship between muscle fiber types and pork quality [J].China Animal Husbandry and Veterinary Medicine,2009,36(4):191-195.

[29] 羅 軍.肌肉纖維特性研究進展 [J].黃牛雜志,1989,5(4):36-40.

Luo J.Research progress of muscle fiber characteristics [J].Journal of Yellow Cattle Science,1989,5(4):36-40.

[30] 楊飛云,陳代文,黃金秀,等.豬背最長肌肌纖維類型的發(fā)育性變化及品種與營養(yǎng)影響特點 [J].畜牧獸醫(yī)學報,2008,39(12):1701-1708.

Yang F Y,Chen D W,Huang J X,et al.The developmental changes of muscle fiber types in longissimus dorsi muscle of pigs and the characteristics of the variety and nutrition [J].Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences,2008,39(12):1701-1708.

[31] 楊曉靜,趙茹茜,陳 杰，等.豬背最長肌肌纖維類型的發(fā)育性變化及其品種和性別特點 [J].中國獸醫(yī)學報,2005,25(1):89-94.

Yang X J,Zhao R Q,Chen J,et al.Developmental changes of muscle fiber types and characteristics of breed and sex of longissimus dorsi muscle in pigs [J].Chinese Journal of Veterinary Science,2005,25(1):89-94.

[32] Engel W K.The essentiality of histo and cytochemical studies in the investigation of meuromuscular disease [J].Neurology,1962,12:778-784.