少腹逐瘀湯加減方對(duì)寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠干預(yù)的研究

孟桐宇

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧沈陽(yáng) 110032

少腹逐瘀湯出自《醫(yī)林改錯(cuò)》，本書由清代醫(yī)家王清任編寫。其方組成：小茴香七粒炒，干姜二分炒，元胡一錢，沒(méi)藥一錢炒，當(dāng)歸三錢，川芎一錢，官桂一餞，赤芍二錢，蒲黃三錢生，靈脂二錢炒，水煎服。少腹逐瘀湯，此方治少腹積塊疼痛，或有積塊不疼痛，或疼痛而無(wú)積塊，或少腹脹滿，或經(jīng)血見時(shí)，先腰痠少腹脹，或經(jīng)血一月見三、五次，接連不斷，斷而又來(lái)，其色或紫，或黑，或塊，或崩漏兼少腹疼痛，或粉紅兼白帶，皆能治之，效不可盡述[1]。該研究在原方上又進(jìn)行了加減，藥物組成如下小茴香（炒）7粒、干姜（炒）0.6 g、胡索 3 g、沒(méi)藥（研）6 g、當(dāng)歸 9 g、川芎 6 g、官桂 3 g、赤芍6 g、蒲黃 9 g、五靈脂（炒）6 g、丹參 15 g、香附 10 g、烏藥10 g、甘草6 g。為了探討少腹逐瘀湯加減方對(duì)寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠干預(yù)，該文從PGE2及血小板粘附性的指標(biāo)探討少腹逐瘀湯加減方治療寒凝血瘀痛經(jīng)的作用機(jī)制研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用3月齡的SPF級(jí)健康 Wistar雌鼠48只，均200 g左右。所有大鼠均性成熟但未交配。于SPF 級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng)，室內(nèi)溫度(24±1)℃，濕度(50±5)%，光照。使用清潔級(jí)大鼠全營(yíng)養(yǎng)飼料，自由飲用清水。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 少腹逐瘀湯加減方（小茴香（炒）7粒、干姜（炒）0.6 g、胡索 3 g、沒(méi)藥（研）6 g、當(dāng)歸 9 g、川芎6 g、官桂 3 g、赤芍 6 g、蒲黃 9 g、五靈脂（炒）6 g、丹參15 g、香附 10 g、烏藥 10 g、甘草 6 g）

1.1.3 實(shí)驗(yàn)藥物制備少腹逐瘀湯加減方一副共90 g,分別用8倍量蒸餾水高溫煎煮3次，20 min/次。合并3次藥物溶液，過(guò)濾并減壓濃縮到與原藥質(zhì)量1∶1（g：mL）的體積量。依據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》中體表面積折算大鼠每日給藥劑量，將人的臨床用藥劑量換算成大鼠的劑量。經(jīng)計(jì)算少腹逐瘀加減方人臨床用藥1.5 g/kg。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組處理 將處于發(fā)情期的雌性大鼠隨機(jī)分為6組:空白對(duì)照組、模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組（臨床劑量）、中藥高劑量組，陽(yáng)性藥對(duì)照組，每組8只，共48只動(dòng)物。除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠制備寒凝血瘀痛經(jīng)大鼠病證結(jié)合動(dòng)物模型：用0～4℃冰水浸泡大鼠，1 次/d，6 min/次，連續(xù) 35 d，以寒冷刺激誘導(dǎo)形成寒凝血淤癥模型，同時(shí)大鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.03 mg/只/d,使子宮同步化，制造原發(fā)性痛經(jīng)模型。于造模的第15天開始分別給予中藥低劑量組、中藥中劑量組（臨床劑量）、中藥高劑量組少腹逐瘀加減方灌胃；陽(yáng)性藥對(duì)照組以安瑞克布洛芬灌胃；空白對(duì)照組、模型組用等量生理鹽水灌胃，1 次/d，連續(xù) 35 d。

1.2.2 指標(biāo)檢測(cè) ①扭體反應(yīng)：連續(xù)灌胃35 d，最后一日給藥1 h后，各組腹腔注射縮宮素2 U/只，觀察30 min內(nèi)大鼠扭體次數(shù)并計(jì)算扭體潛伏期、扭體次數(shù)抑制率。扭體潛伏期=開始扭體時(shí)間-注射縮宮素時(shí)間；扭體抑制率=（模型組扭體均數(shù)-，給藥組扭體均數(shù)）/模型組扭體均數(shù)×100%。跟據(jù)Schmauss提出的行為學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計(jì)大鼠扭體次數(shù)、大鼠扭體潛伏期時(shí)間（min）及扭體抑制率。②血小板粘附性的指標(biāo)：造模后,各組大鼠均注射10%水合氯醛溶液(0.3 mL/kg)麻醉,采血,將血液置于含肝素或乙二胺四乙酸二鉀 (測(cè)血細(xì)胞比容時(shí))的真空采血管中,混勻,離心,采用全自動(dòng)血流變測(cè)試儀迅速檢測(cè)大鼠的全血黏度。③大鼠血清中PG含量：大鼠腹腔靜脈取血，約5 mL,4℃，2 500 r/min,離心15 min,取上清液，置于-80℃冰箱內(nèi)保存，ELISA試劑盒檢測(cè)血清中PGE2。④大鼠子宮勻漿NO含量：取雙側(cè)子宮以冰凍的生理鹽水洗凈拭干稱重，制成10%的子宮組織勻漿，以 1 800 r/min，低溫離心15 min，取上清液，按NO試劑盒說(shuō)明書的實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

各組數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，用（±s）表示計(jì)量資料，進(jìn)行 t檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

①少腹逐瘀湯加減方對(duì)寒凝血瘀型大鼠扭體反應(yīng)次數(shù)的影響,與空白對(duì)照組相比，其余5組均有扭體反應(yīng)且扭體次數(shù)、扭體評(píng)分明顯增高（P<0.01)，說(shuō)明大鼠痛經(jīng)模型制備成功。與模型組比較，陽(yáng)性藥對(duì)照組、中藥低劑量組、中藥中劑量組（臨床劑量）及中藥高劑量組的扭體潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.05)，扭體次數(shù)明顯減少(P<0.01)，見表 1。

表1 少腹逐瘀湯加減方對(duì)大鼠的扭體反應(yīng)的影響程度（±s）

表1 少腹逐瘀湯加減方對(duì)大鼠的扭體反應(yīng)的影響程度（±s）

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別 潛伏期（min） 扭體次數(shù)（次）空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組30（5.11±1.35）&（10.35±0.66）&*（8.45±1.78）&*（8.96±0.74）&*（8.02±1.33）&*0（6.33±1.03）&（1.50±0.55）&*（2.17±0.75）&*（1.75±0.50）&*（1.75±1.16）&*

②少腹逐瘀湯加減方對(duì)寒凝血瘀型大鼠血小板粘附性的影響,與空白對(duì)照組相比，其余五組的低切值明顯升高（P<0.01)，與模型組相比 ,陽(yáng)性藥對(duì)照組、中藥低劑量組、中藥中劑量組（臨床劑量）及中藥高劑量組在高、低切變率均明顯降低血流變(P<0.05)。見表2。

表2 少腹逐瘀湯加減方對(duì)大鼠血清PGE2含量的影響程度[（±s），pg/mL]

表2 少腹逐瘀湯加減方對(duì)大鼠血清PGE2含量的影響程度[（±s），pg/mL]

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別PGE2空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組0.51±0.61（0.49±0.50）&（0.43±0.116）&*（0.45±0.13）&*（0.48±0.12）&*（0.47±0.15）&*

③少腹逐瘀湯加減方對(duì)寒凝血瘀型大鼠血清中PG含量的影響,模型組PGE2含量最低(P<0.01)。治療后，PGE2含量明顯升高(P<0.05)。見表 3。

表3 少腹逐瘀湯加減方對(duì)全血粘度的影響程度（±s，n=8）

表3 少腹逐瘀湯加減方對(duì)全血粘度的影響程度（±s，n=8）

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別 低切 高切空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組46.61±7.58（22.04±3.24）&（44.61±0.59）&*（39.66±0.56）&*（44.44±8.10）&*（48.02±6.12）&*7.05±1.15（3.86±0.48）&（6.32±1.60）&*（8.81±0.98）&*（7.02±1.63）&*（7.69±1.66）&*

④少腹逐瘀湯加減方對(duì)寒凝血瘀型大鼠子宮勻漿NO含量的影響,大鼠子宮勻漿中NO的含量與模型組相比都有較大的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。NO可表現(xiàn)出致痛和鎮(zhèn)痛雙重角色，增多則其抑制作用而陣痛。見表4。

表4 少腹逐瘀湯加減方對(duì)子宮組織NO含量的影響程度+[（±s），μmol/gprot]

表4 少腹逐瘀湯加減方對(duì)子宮組織NO含量的影響程度+[（±s），μmol/gprot]

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別NO空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組0.19±0.167（0.36±0.356）&（0.39±0.754）&*（0.42±0.128）&*（0.42±0.092）&*（0.51±0.115）&*

⑤少腹逐瘀湯加減方對(duì)寒凝血瘀型大鼠血小板聚集值的影響，與空白對(duì)照組相比，其余5組的PT及APTT增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表5。

表5 少腹逐瘀湯加減方對(duì)凝血四項(xiàng)的影響程度（±s）

表5 少腹逐瘀湯加減方對(duì)凝血四項(xiàng)的影響程度（±s）

注：與空白組比較，&P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別PT animal凝血酶原時(shí)間（動(dòng)物）APTTanimal活化部分凝血活酶時(shí)間 凝血酶時(shí)間空白組模型組西藥組中藥低濃度組中藥中濃度組中藥高濃度組7.83±0.26（7.48±0.22）&（8.28±1.07）&＊（7.60±0.10）&＊（7.78±0.25）&＊（8.16±0.49）&＊18.42±4.24（16.60±0.52）&（39.34±14.52）&＊（21.23±6.37）&＊（17.33±1.38）&＊（18.40±3.16）&＊36.85±2.22（33.48±4.20）&（19.82±6.17）&＊（29.13±7.18）&＊（35.68±1.05）&＊（35.24±4.15）&＊

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分析寒凝血瘀型的痛經(jīng)的病理因素，認(rèn)為血液循環(huán)對(duì)其有著十分重要的影響[2]。研究顯示其主要與血液流變的指標(biāo)變化，微循環(huán)流通不暢以及血流動(dòng)力學(xué)改變等多方面有著密切聯(lián)系[3]。該文運(yùn)用冰水浴的方案構(gòu)造寒凝血瘀型痛經(jīng)的模型，經(jīng)過(guò)一系列的理化測(cè)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)大鼠的全血高切黏度、大鼠的全血低切黏度、大鼠血清中PGF2含量以及大鼠子宮勻漿NO含量等多種數(shù)據(jù)均發(fā)生了改變，這些現(xiàn)象在一定程度上可以展示了臨床上患有寒凝血瘀型痛經(jīng)的女性患者的一些臨床體征。

少腹逐瘀湯在治療寒凝血瘀型的痛經(jīng)十分有效，有研究可以證明少腹逐瘀湯對(duì)機(jī)體的作用機(jī)理及藥理作用[4]。在少腹逐瘀湯的基礎(chǔ)上進(jìn)行了加減，增加了四味藥，丹參、烏藥、香附、甘草。丹參活血祛瘀，通經(jīng)止痛的。香附疏肝理氣、調(diào)經(jīng)止痛，主行血分，功擅理氣開郁；烏藥順氣降逆、散寒止痛，專走氣分，長(zhǎng)于順氣散寒二藥合用，有理氣解郁、散寒止痛之功效。甘草有調(diào)和攻補(bǔ)之藥的功效。增加丹參、烏藥、香附、甘草四味藥，使藥方的散寒止痛及活血祛瘀能力進(jìn)一步增強(qiáng)。

該實(shí)驗(yàn)顯示服用少腹逐瘀湯加減方治療和服用安瑞克布洛芬治療均可使扭體的潛伏期延長(zhǎng)，扭體次數(shù)有均顯著下降，說(shuō)明少腹逐瘀湯加減方和安瑞克布洛芬對(duì)寒凝血瘀型痛經(jīng)均有改善，且能證明少腹逐瘀湯加減方有較好的療效。中藥組低劑量，中藥組中劑量，中藥組高劑量這3種比較中藥組低劑量扭體潛伏期最長(zhǎng)，扭體次數(shù)最少。其次，該實(shí)驗(yàn)中除空白對(duì)照組外血液粘稠度均有增加。但在治療后，采取中藥組和安瑞克布洛芬的血液粘稠度均有降低。此外，PG的含量與痛經(jīng)的形成有著密切的關(guān)系[5]。同時(shí)，PGE2含量的升高同樣可以抑制子宮平滑肌痙攣性收縮的發(fā)生，改善子宮的缺血缺氧的狀態(tài)，最終發(fā)揮止痛的功效。

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