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    鮮牛奶中抗生素殘留的原因及常用檢測(cè)方法

    2018-05-14 02:11張麗茹黃新紅張東麗李治玲謝春勝
    現(xiàn)代畜牧科技 2018年1期
    關(guān)鍵詞:鮮牛奶

    張麗茹 黃新紅 張東麗 李治玲 謝春勝

    摘要:抗生素是一種高效的獸藥,在奶牛養(yǎng)殖業(yè)中經(jīng)常用于治療乳房炎等疾病,但如果使用不當(dāng)就會(huì)導(dǎo)致牛奶中殘留過(guò)多。鮮牛奶中殘留抗生素可能會(huì)引起多種不良反應(yīng),其會(huì)造成對(duì)抗生素類藥物的敏感性降低,提高病原菌的耐藥性?,F(xiàn)主要概述鮮牛奶中抗生素殘留的原因以及常用檢測(cè)方法,給大家提供一定參考。

    關(guān)鍵詞:鮮牛奶;抗生素殘留;原因分析;氯化三苯基四氮唑法;免疫受體試驗(yàn)方法

    中圖分類號(hào):S858

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

    文章編號(hào):2095-9737(2018)01-0109-01

    1 原因分析

    新陳代謝和藥物代謝動(dòng)力學(xué)。藥物能夠經(jīng)由不同的被動(dòng)或者主動(dòng)的化學(xué)過(guò)程而轉(zhuǎn)運(yùn)到動(dòng)物體內(nèi),在機(jī)體新陳代謝過(guò)程中,部分藥物能夠表現(xiàn)出治療學(xué)或者產(chǎn)生毒性影響,但其他的卻沒(méi)有。只要開(kāi)始藥物治療,在其通過(guò)不同途徑代謝結(jié)束前,會(huì)持續(xù)向組織間隔擴(kuò)散。因此抗生素采取一般給藥途徑都會(huì)經(jīng)由不同途徑在一定程度上被消除,如奶液、糞便、尿液以及唾液(反芻動(dòng)物中多次被利用的胃液)。另外,藥物的制劑形式在很大程度上影響奶牛體內(nèi)分子的排出,如某些“長(zhǎng)期效應(yīng)”藥物能夠在很長(zhǎng)一段時(shí)間保留在注射部位和器官處,同時(shí)也會(huì)長(zhǎng)時(shí)間對(duì)微生物有效。

    哺乳期乳房處理及殘留物的持續(xù)。奶牛哺乳期發(fā)生乳房炎后主要通過(guò)兩種不同的處理機(jī)制進(jìn)行治療,即物理機(jī)制,是指每次擠奶中機(jī)械的排除;生物機(jī)制,即經(jīng)由空隙進(jìn)入血液中。少數(shù)抗生素本身就具有非常高的擴(kuò)散性,能夠快速越過(guò)如細(xì)胞壁、血管壁等不同的物理障礙,從而進(jìn)入血液循環(huán),再通過(guò)新陳代謝以不同的渠道消除掉,但其還能夠在乳腺組織中積聚,并在葡萄腺、乳房池以及乳頭內(nèi)存留,就會(huì)在擠奶時(shí)經(jīng)由奶液排到體外。通常情況下,牛奶中殘留的抗生素濃度需要2~5天才會(huì)降低到MRL水平。

    干乳期乳房處理。奶牛干乳期需要采取非常特殊的處理方式,這是由于該階段機(jī)體停止產(chǎn)奶,而在最初哺乳期的生理恢復(fù)過(guò)程中,藥物制劑的形式以及自身特性都會(huì)明顯影響干乳期處理。在不擠奶的情況下,有時(shí)奶牛治療后在乳頭中殘留的抗生素可能持續(xù)2個(gè)月之久,最終在第一次擠奶時(shí)就會(huì)經(jīng)由初乳排出。

    2 常用檢測(cè)方法

    氯化三苯基四氮唑法。即TTC法,在我國(guó)作為檢測(cè)鮮牛奶中抗生素殘留的標(biāo)準(zhǔn)方法,其測(cè)定原理是在鮮牛奶中加入菌種(嗜熱鏈球菌),經(jīng)培養(yǎng)后再加入無(wú)色的TTC指示劑,觀察顏色變化。當(dāng)鮮牛奶中存在抗生素時(shí),加入菌種后無(wú)法增殖,此時(shí)就不會(huì)促使TTC指示劑發(fā)生還原反應(yīng),從而依舊呈無(wú)色狀態(tài);當(dāng)鮮牛奶中存在抗生素時(shí),加入菌種后就會(huì)大量生長(zhǎng)繁殖,由于其在新陳代謝過(guò)程中會(huì)生成大量的氫,導(dǎo)致TTC指示劑發(fā)生還原反應(yīng)而生成還原型的TTC,此時(shí)指示劑變成紅色,從而造成樣品也被染成紅色。也就是說(shuō),鮮牛奶顏色沒(méi)有變化判為陽(yáng)性,染成紅色判為陰性。操作時(shí),先活化菌種,即用接種環(huán)取嗜熱鏈球菌菌種在9 mL滅菌脫脂乳中接種,放在36℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行12~15 h培養(yǎng),之后保存在2~5℃冰箱中備用。注意每15天進(jìn)行1次轉(zhuǎn)種。第二步是測(cè)試菌液,即將上述被活化的嗜熱鏈球菌菌種在滅菌脫脂乳中接種,在36℃添加下進(jìn)行15 h培養(yǎng),接著添加相同體積的滅菌脫脂乳,充分混勻即制成稀釋的測(cè)試菌液。第三步是樣品培養(yǎng),即取9 mL樣品裝入18 mm×180 mm的試管內(nèi),注意每份樣品還需要另外設(shè)置一份平行樣。同時(shí),還要再各做l份陽(yáng)性和陰性對(duì)照,其中陰性對(duì)照管添加滅菌脫脂乳9 mL,陽(yáng)性對(duì)照管添加青霉素G參照溶液9 mL。全部試管放在80℃水浴箱中進(jìn)行5 min加熱,經(jīng)過(guò)冷卻低于37℃時(shí)再添加1 mL測(cè)試菌液,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管充分混勻。之后放在36℃水浴箱中進(jìn)行2h培養(yǎng),接著添加3 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的TTC水溶液,使用渦旋混勻器進(jìn)行15 s混合均勻或者振動(dòng)試管混勻。最后再放在36℃水浴箱內(nèi)進(jìn)行30 min培養(yǎng),注意避光,即可觀察顏色變化。若樣品顏色沒(méi)有發(fā)生變化,可繼續(xù)在水浴中進(jìn)行30 min的避光培養(yǎng),然后用于最終觀察。觀察時(shí)要確保迅速,如果長(zhǎng)時(shí)間避光就會(huì)造成干擾。

    免疫受體試驗(yàn)方法。免疫受體檢測(cè)法是ELISA(酶聯(lián)免疫分析法)的一種變換形式,其基本原理是以特定抗生素類群(如β-內(nèi)酞胺類)作為靶子,讓某些部位上固定的廣譜受體(如微生物細(xì)胞)或者特定抗體捕捉。大部分檢測(cè)法都是根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)性原理,使樣品內(nèi)所含的抗生素與內(nèi)置抗生素標(biāo)志物相互競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于廣譜受體或者固定抗體,之后采取沖洗和顯色處理。內(nèi)置抗生素標(biāo)志物同廣譜受體或者固定抗體相互結(jié)合會(huì)形成的一種復(fù)合體,在酶的作用下發(fā)生分解,從而生成發(fā)光物質(zhì)或者有色物質(zhì)。鮮牛奶中殘留的抗生素同廣譜受體或者固定抗體結(jié)合后也會(huì)形成復(fù)合體,但在酶的作用下分解不能夠生成發(fā)光物質(zhì)或者有色物質(zhì)。因此通過(guò)對(duì)光度或者色度進(jìn)行測(cè)定,同時(shí)與參比物進(jìn)行對(duì)照,由此判斷結(jié)果呈陽(yáng)性還是陰性。由于該法根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)性原理,如果最終的反應(yīng)結(jié)果光度越強(qiáng)或者顏色越深就判斷為陰性,反之就判斷為陽(yáng)性。這種檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)是速度快,一般在10 min內(nèi)就能夠得到結(jié)果,但通常只能夠作為定性試驗(yàn),具有很強(qiáng)的特異性,且檢測(cè)費(fèi)用相對(duì)較高。

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