• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    卷煙加工及儲(chǔ)存過(guò)程中細(xì)菌群落組成及變化研究

    2018-05-14 08:59:43陳興楊瑩李珊輝
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年8期
    關(guān)鍵詞:高通量測(cè)序

    陳興 楊瑩 李珊輝

    摘要[目的]研究卷煙加工及儲(chǔ)存過(guò)程中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)以及多樣性的變化。[方法]采用二代高通量測(cè)序平臺(tái),以云煙(軟珍,R)不同制絲工藝的加工工序及儲(chǔ)存過(guò)程的煙葉表面微生物為研究對(duì)象,對(duì)其進(jìn)行16S rRNA 基因高通量測(cè)序。[結(jié)果] 盡管不同制絲工藝在相同加工工序中微生物群落豐富度不盡相同,但主要高豐富度微生物類群的種類比較一致;此外,煙葉在不同城市的不同儲(chǔ)存時(shí)間下,微生物類群的變化具有類似的趨勢(shì)。[結(jié)論]該研究對(duì)從微生物角度改進(jìn)煙葉制絲工藝具有一定的借鑒意義,同時(shí)表明煙葉的儲(chǔ)存時(shí)間可能是影響微生物后期群落發(fā)生變化的主要因素。

    關(guān)鍵詞制絲工藝;高通量測(cè)序;微生物群落結(jié)構(gòu);煙葉品質(zhì)

    中圖分類號(hào)TS452文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

    A文章編號(hào)0517-6611(2018)08-0015-04

    Effects of Cigarette Processing and Storage Process on Bacterial Community Structure

    CHEN Xing1,YANG Ying1,LI Shanhui2,3 et al(1.Technology Center,China Tobacco Yunnan Industrial Co.,Ltd.,Kunming,Yunnan 650231;2.School of Life Science,Sun YatSen University,Guangzhou ,Guangdong 510275;3.Yunnan Institute of Microbiology,Yunnan University,Kunming ,Yunnan 650091)

    Abstract[Objective]In order to study the changes of bacterial community structure and diversity in cigarette processing and storage process [Method]The two generation highthroughput sequencing platforms were used to study the processing technology of Yunyan tobacco (R) and the surface microorganism of tobacco leaves during storage.The 16S rRNA gene was sequenced by highthroughput sequencing.[Result]Although different technics in the same processing in the process of microbial community richness was not the same,but the main types of high richness microbial communities were consistent.In addition,the results also showed that the storage time of tobacco leaves could be the main factor affecting the changing of microbial community rather than the cities where they storage.[Conclusion]The study has a certain reference significance for improving tobacco processing technology from microorganism angle.Meanwhile,it indicates that the storage time of tobacco leaves may be the main factor that affects the later stage of microbial community.

    Key wordsCigarette processing;Highthroughput sequencing;Microbial community structure;Tobacco quality

    卷煙是用特定的技術(shù)和設(shè)備將煙草原料和輔助材料加工制作成消費(fèi)者可吸食商品的過(guò)程。根據(jù)煙葉原料的性質(zhì),卷煙生產(chǎn)的工藝流程是通過(guò)各種加工方法或設(shè)備逐步把煙葉原料和其他輔助材料制成合格卷煙產(chǎn)品所必須經(jīng)過(guò)的加工制造過(guò)程。該流程包括的主要工藝除制絲外,還包括卷接和包裝。有研究表明,煙葉在生長(zhǎng)和調(diào)制過(guò)程中均有微生物在煙葉上生長(zhǎng),其微生物種類和數(shù)量會(huì)隨著煙葉品種、產(chǎn)地、等級(jí)、調(diào)制方式的不同而存在一定差異。對(duì)于煙葉表面微生物群落的研究始于1933 年,Reid等[1]首次發(fā)現(xiàn)雪茄煙葉表面具有大量的細(xì)菌和霉菌,其主要的細(xì)菌類群是巨大芽孢桿菌,而主要的霉菌類群為曲霉和青霉。Tamayo等[2]從西班牙煙葉中分離出的微生物主要是球菌和芽孢桿菌。謝和等[3]從烤煙中分離到了放線菌、細(xì)菌和霉菌,但未發(fā)現(xiàn)酵母菌。邱立友等[4]的研究發(fā)現(xiàn),烤煙NC89在自然醇化過(guò)程中煙葉表面存在著占有絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的細(xì)菌和數(shù)量較少的霉菌和放線菌。王革等[5]在國(guó)內(nèi)初次從自然發(fā)酵的煙葉上分離到酵母菌。研究結(jié)果均表明,發(fā)酵煙葉表面微生物群落的多樣性較豐富,盡管細(xì)菌、霉菌和酵母菌等均有存在,但以細(xì)菌群落為主,且細(xì)菌中的芽孢桿菌所占的豐富度較高。煙葉品質(zhì)發(fā)生復(fù)雜變化的主要特征是煙葉中化合物的分解與轉(zhuǎn)化,其中影響煙葉香氣和吸味品質(zhì)的重要過(guò)程是將不具備香味特性的大分子物質(zhì),如氨基酸、蛋白質(zhì)、高級(jí)脂肪酸、纖維素、還原性糖和煙堿等化合物,轉(zhuǎn)化為各種揮發(fā)性酸或揮發(fā)性香氣成分的小分子化合物[6]。此過(guò)程中,微生物在煙葉品質(zhì)和口味的改變過(guò)程中發(fā)揮著舉足輕重的作用。然而,對(duì)于煙葉加工及儲(chǔ)存運(yùn)輸過(guò)程煙葉表面微生物多樣性研究較少,這就使得實(shí)際工業(yè)應(yīng)用中缺乏科學(xué)依據(jù)。

    筆者通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù),以卷煙加工及儲(chǔ)存中的不同過(guò)程下的細(xì)菌群落為研究對(duì)象,對(duì)其組成及變化進(jìn)行研究,以期通過(guò)對(duì)烤煙煙葉表面微生物進(jìn)行全面、系統(tǒng)的認(rèn)知,充分了解煙葉品質(zhì)變化過(guò)程中烤煙煙葉表面微生物群落結(jié)構(gòu)的變化,從而認(rèn)知微生物群落變化與煙葉品質(zhì)改變之間的關(guān)系,為煙葉品質(zhì)的調(diào)控和微生物資源的挖掘提供科學(xué)指導(dǎo)。

    1材料與方法

    1.1材料及設(shè)計(jì)

    該試驗(yàn)所用到的云煙(軟珍,代號(hào)R)卷煙由云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司提供。根據(jù)制絲工藝的不同,分為薄板模塊(代號(hào)B)和氣流模塊(代號(hào)Q),所有樣品均來(lái)自這2個(gè)卷煙制絲工藝的各個(gè)加工工序,樣品信息如表1所示。

    表1中原料煙葉(代號(hào)01)是指陳化完成后待加工的片狀煙葉,片狀煙葉經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的陳化過(guò)程被擠壓成塊狀,這個(gè)時(shí)期的煙葉水分含量較少。在松散回潮工序(代號(hào)02)中,煙葉在加入水蒸氣后充分吸收水分而變得松軟,然后通過(guò)機(jī)械的方式把結(jié)成塊狀的煙葉抖散,煙葉充分分散之后開(kāi)始進(jìn)入加料工序。制絲過(guò)程中加料分2次進(jìn)行(一加入口,代號(hào)03;一加出口,代號(hào)04;二加入口,代號(hào)05;二加出口,代號(hào)06),料液的加入使煙葉的耐加工性能和感官品質(zhì)提高。儲(chǔ)存柜的作用是待加料工序完成后,煙葉在儲(chǔ)柜中儲(chǔ)存,使料液和煙葉充分作用。煙葉從櫥柜取出后(代號(hào)07),煙葉經(jīng)過(guò)切絲工序后進(jìn)入烘絲工序。烘絲完成后(代號(hào)08),再經(jīng)過(guò)冷卻后(代號(hào)09),最終進(jìn)入添加香精香料的加香工序。

    研究所用R牌號(hào)卷煙的儲(chǔ)存方式根據(jù)城市的不同和放置時(shí)間的不同進(jìn)行取樣,并以剛剛包裝成型的卷煙產(chǎn)品作為對(duì)照,具體樣品信息如Rcontrol*(對(duì)照),RM01*、RM02*、RM03、RM04、RM05、RW01*、RW02*、RW03、RW04、RW05、RH01、RH02*、RH03、RH04、RH05、RK01、RK02*、RK03、RK04、RK05。樣品制備和采集時(shí)均帶一次性無(wú)菌聚乙烯(PE)手套進(jìn)行操作,取樣完成后,立即用無(wú)菌封口袋包扎密封,放入-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    對(duì)于不同城市放置不同時(shí)間的未拆封卷煙產(chǎn)品樣品分別來(lái)自牡丹江市(代號(hào)M)、烏魯木齊市(代號(hào)W)、??谑校ù?hào)H)和昆明市(代號(hào)K),在各個(gè)城市的放置時(shí)間分別為7 d(代號(hào)01)、30 d(代號(hào)02)、120 d(代號(hào)03)、180 d(代號(hào)04)和360 d(代號(hào)05),“*”代表樣品是由Roche 454 GS FLX+平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序,而其余樣品在Illumina Miseq平臺(tái)下測(cè)序。

    1.2方法

    1.2.1樣品表面微生物的收集及宏基因組DNA的提取。

    參考2009年Zhao等煙葉表面微生物的收集方法[7],根據(jù)煙葉的實(shí)際情況作了部分改良,且所有步驟均保證在無(wú)菌條件下進(jìn)行。DNA的提取采用土壤DNA提取試劑盒(PowerSoil DNA Isolation kit,code:12888-100)對(duì)收集的各個(gè)煙葉表面微生物樣品進(jìn)行DNA提取,提取過(guò)程參照試劑盒的操作說(shuō)明進(jìn)行了相關(guān)優(yōu)化[8]。

    1.2.216S rRNA基因PCR擴(kuò)增及測(cè)序。

    該研究中,所有PCR擴(kuò)增引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司提供。對(duì)于Roche 454 GS FLX+平臺(tái)測(cè)序的樣品,采用融合barcode序列的V6F3引物(5′CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGbarcodeTGCAACGCGAAGAACCTTACC3′)和V8R2引物(5′CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGGCCCGGGAACGTATTCACCG3′)進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系包括:10×PCR buffer 5.0 μL;dNTP(10 mmol/L each) 0.5 μL;Genomic DNA 10 ng;BarPCR primer F(50 μmol/L) 0.5 μL;Primer R (50 μmol/L)0.5 μL;Plantium Taq(5 U/μL) 0.5 μL;ddH2O加至50.0 μL。

    反應(yīng)條件如下所示: 94 ℃、3 min;94 ℃、30 s,45 ℃、20 s,65 ℃、30 s,5個(gè)循環(huán);94 ℃、20 s,55 ℃、20 s,72 ℃、30 s,20個(gè)循環(huán);72 ℃、5 min;10 ℃、 ∞。

    對(duì)于在Illumina Miseq 300PE平臺(tái)測(cè)序的樣品,采用融合barcode序列的引物341F(5′CCTACACGACGCTCTTCCGATCTNbarcodeCCTACGGGNGGCWGCAG3′)和805R(5′GACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCAGACTACHVGGGTATCTAATCC3′)。PCR反應(yīng)體系包括:10×PCR buffer 5.0 μL;dNTP(10 mmol/L each) 0.5 μL;Genomic DNA 10 ng;BarPCR primer F(50 μmol/L)1.0 μL;Primer R (50 μmol/L)1.0 μL;Plantium Taq(5 U/μL)0.5 μL;ddH2O加至50.0 μL。

    反應(yīng)條件如下所示: 94 ℃、30 s;94 ℃、20 s,45 ℃、20 s,65 ℃、60 s,5個(gè)循環(huán);94 ℃、20 s,55 ℃、20 s,72 ℃、20 s,20個(gè)循環(huán);72 ℃、5 min;10 ℃、∞。

    PCR產(chǎn)物檢測(cè)后,采用生工瓊脂糖回收試劑盒(code: SK8131)對(duì)DNA進(jìn)行純化回收,由生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行16S rRNA基因高通量測(cè)序。

    1.2.3數(shù)據(jù)分析。

    該研究中Roche 454 GS FLX+平臺(tái)和Illumina Miseq 300PE平臺(tái)測(cè)序所得的序列主要通過(guò)QIIME[9]軟件來(lái)進(jìn)行分析。采用QIIME中的“split_libraries.py”命令根據(jù)barcode序列對(duì)樣品進(jìn)行區(qū)分,并刪除低質(zhì)量序列:①序列長(zhǎng)度小于200或大于1 000個(gè)堿基;②序列中存在6個(gè)及以上的模糊堿基;③測(cè)序時(shí)Q值的平均值低于25;④序列中存在的單堿基重復(fù)超過(guò)6個(gè);⑤前端的barcode序列有1個(gè)及以上堿基的錯(cuò)配;⑥引物序列有1個(gè)及1個(gè)以上堿基錯(cuò)配。高質(zhì)量序列通過(guò)uclust[10]的方法在97%相似度的水平上對(duì)所有樣品進(jìn)行OTU劃分,并選取代表序列利用blast[11]方法與Greengenes[12]數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),獲得分類學(xué)信息。

    2結(jié)果與分析

    2.1卷煙加工過(guò)程中細(xì)菌群落的結(jié)構(gòu)分析

    2.1.1薄板制絲工藝中細(xì)菌群落的組成及變化。

    在云煙(軟珍)薄板制絲工藝各加工工序樣品(RB01~09)中,共獲得高質(zhì)量序列95 603條,平均每個(gè)樣品包含10 622條有效序列。所有序列共被注釋到了包含12個(gè)已知的菌門在內(nèi)的16個(gè)菌門中(圖1),其中包括以厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)和藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria)為主要豐富度的微生物類群,還包括擬桿菌門(Bacteroidetes)、酸桿菌門(Acidobacteria)、綠彎菌門(Chloroflexi)、異常球菌-棲熱菌門(DeinococcusThermus)、梭桿菌門(Fusobacteria)、硝化螺旋菌門(Nitrospira)、螺旋體門(Spirochaetes)和疣微菌門(Verrucomicrobia),此外,還有3個(gè)分類地位不明確類群(OD1、OP10和TM7)以及未被分類類群(Unclassified bacteria)。在12個(gè)已知門類的微生物類群中,厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)和藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria)的平均序列量分別占到云煙(軟珍)薄板制絲工藝各加工工藝所有樣品細(xì)菌類群的總注釋序列量的59.2%、24.9%、6.5%和8.8%??梢?jiàn),厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)這2個(gè)菌門在煙葉處理過(guò)程的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)組成中為主要優(yōu)勢(shì)類群。對(duì)比薄板制絲工藝不同階段的優(yōu)勢(shì)菌門相對(duì)豐度的變化,結(jié)果表明,隨著薄板制絲工藝加工過(guò)程的不同,細(xì)菌群落的組成豐度也顯著變化,變形菌門(Proteobacteria)、藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria)和放線菌門(Actinobacteria)的相對(duì)豐度大體呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì),而厚壁菌門(Firmicutes)卻呈現(xiàn)出先減少后增加的趨勢(shì)。

    2.1.2氣流制絲工藝中細(xì)菌群落的組成及變化。

    在云煙(軟珍)氣流制絲工藝各加工工序樣品(RQ01~09)中,共獲得高質(zhì)量序列113 995條,平均每個(gè)樣品包含12 666條有效序列。所有序列共被注釋到了包括21個(gè)已知的菌門中(圖2),主要包括優(yōu)勢(shì)門類:變形菌門(Proteobacteria)、藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteria)和擬桿菌門(Bacteroidetes),以及酸桿菌門(Acidobacteria)、綠彎菌門(Chloroflexi)、浮霉菌門(Planctomycetes)、芽單胞菌門(Gemmatimonadetes)、異常球菌-棲熱菌門(DeinococcusThermus)、疣微菌門(Verrucomicrobia)、互養(yǎng)菌門(Synergistetes)、梭桿菌門(Fusobacteria)、軟壁菌門(Tenericutes)、衣原體門(Chlamydiae)、綠菌門(Chlorobi)、纖維桿菌門(Fibrobacteres)、黏膠球形菌門(Lentisphaerae),硝化螺旋菌門(Nitrospira)、螺旋體門(Spirochaetes)和熱袍菌門(Thermotogae),此外還有6個(gè)分類地位不明確類群(TM7、Bacteria_incertae_sedis、BRC1、OD1、OP10和WS3)和未被分類類群(Unclassified bacteria)。和薄板制絲工藝類似,變形菌門(Proteobacteria)、藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)和放線菌門(Actinobacteria)為云煙(軟珍)氣流制絲工藝各加工工序樣品中的主要優(yōu)勢(shì)菌群,分別占總序列數(shù)的46.2%、32.3%、9.9%和8.4%;此外,氣流制絲工藝中擬桿菌門(Bacteroidetes)占總序列量的1.1%。

    2.2不同放置形式下的煙葉表面微生物結(jié)構(gòu)分析

    在不同城市放置不同時(shí)間下的云煙(軟珍)產(chǎn)品(Rcontrol、RM01、RM02、RM03、RM04、RM05、RW01、RW02、RW03、RW04、RW05、RH01、RH02、RH03、RH04、RH05、RK01、RK02、RK03、RK04、RK05)在門一級(jí)水平上,所有序列共被注釋到了24個(gè)門,其中包括以厚壁菌門(Firmicutes)、藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria)和變形菌門(Proteobacteria)為主的優(yōu)勢(shì)菌門,還包括擬桿菌門(Bacteroidetes)、放線菌門(Actinobacteria)、酸桿菌門(Acidobacteria)、嗜熱絲菌門(Caldiserica)、衣原體門(Chlamydiae)、綠彎菌門(Chloroflexi)、脫鐵桿菌門(Deferribacteres)、異常球菌-棲熱菌門(DeinococcusThermus)、纖維桿菌門(Fibrobacteres)、梭桿菌門(Fusobacteria)、芽單胞菌門(Gemmatimonadetes)等。此外,還有4個(gè)分類地位不明確類群(OD1、OP10、TM7和Bacteria_incertae_sedis) 和未被分類類群(Unclassified bacteria)。具體物種相對(duì)豐度如圖3所示。

    3結(jié)論與討論

    高通量測(cè)序技術(shù)是目前微生物多樣性研究應(yīng)用最為廣泛高效的方法[13]。該研究采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)不同制絲工藝的卷煙及其運(yùn)輸過(guò)程中煙葉表面微生物多樣性進(jìn)行研究,每個(gè)樣品平均獲得12 842條高質(zhì)量序列,劃分為21個(gè)已知門類。對(duì)不同制絲工藝及不同運(yùn)輸過(guò)程煙葉表面微生物群落的研究均表明,包括變形菌門(Proteobacteria)、藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes),以及放線菌門(Actinobacteria)在內(nèi)的類群為主要微生物門類。已有研究表明,發(fā)酵煙葉表面微生物多樣性較為豐富,且以細(xì)菌為主,其中芽孢桿菌類群較為豐富,這與該研究所得宏基因組數(shù)據(jù)分析結(jié)果相一致。韓錦峰等[14]研究表明,葉面微生物數(shù)量會(huì)隨著人工發(fā)酵和自然醇化而逐漸減少。雷麗萍等[15]對(duì)煙葉生長(zhǎng)和晾制階段細(xì)菌種群的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了系統(tǒng)研究,發(fā)現(xiàn)白肋煙在晾制過(guò)程中,煙葉干燥速度和相對(duì)濕度與細(xì)菌總量的變化密切相關(guān)。該研究表明,隨著加工工藝的改變和儲(chǔ)存地域及時(shí)間的變化,煙葉表面微生物的類群和豐度不斷發(fā)生變化,但主要類群的種類相對(duì)穩(wěn)定。制絲工藝作為卷煙生產(chǎn)過(guò)程中至關(guān)重要一環(huán),對(duì)其表面微生物群落研究表明,云煙(軟珍)卷煙在薄板和制絲工藝下,各加工工序中煙葉表面細(xì)菌類群的變化具體表現(xiàn)為:不同的制絲工藝中優(yōu)勢(shì)菌群的相對(duì)豐度有明顯差異,主要原因可能與原料煙葉的品質(zhì)不同有關(guān),也充分說(shuō)明了煙草煙葉表面微生物的數(shù)量和種類隨煙葉品種、產(chǎn)地、等級(jí)及加工方式的不同而存在一定差異[14-17]。在同一制絲工藝下,隨著加工工序的不斷進(jìn)行,優(yōu)勢(shì)類群的相對(duì)豐度也在逐漸發(fā)生變化,這可能是不同加工工序的處理導(dǎo)致了外界環(huán)境因子(如溫度和濕度等)的不斷變化,從而影響了煙葉表面細(xì)菌的生理機(jī)能,而不同的微生物類群具有不同的生理適應(yīng)性,因此產(chǎn)生了細(xì)菌優(yōu)勢(shì)類群數(shù)量和種類上的變化,也可能是外界物質(zhì)進(jìn)入后直接與細(xì)菌類群發(fā)生作用而影響其群落結(jié)構(gòu);不同制絲工藝的相同加工工序中優(yōu)勢(shì)菌群相對(duì)豐度同樣具有明顯差異,可能因?yàn)楸“搴蜌饬?種不同的制絲工藝的處理在影響著煙葉表面的群落結(jié)構(gòu),也可能因?yàn)樵蠠熑~自身所攜帶的細(xì)菌類群的種類和數(shù)量就不同,因此導(dǎo)致了這種差異的形成。盡管2種制絲工藝中微生物群落的變化沒(méi)有明顯趨勢(shì),但在二加入口的樣品(RB05和RQ05)中,放線菌類群豐度均明顯增多,這可能是由于隨著松散回潮之后,微生物與外界空氣接觸充足,消耗煙葉中的糖類、纖維素、半纖維素、蛋白質(zhì)等大分子有機(jī)物質(zhì),使得環(huán)境中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)極度下降,而對(duì)環(huán)境適應(yīng)能力較強(qiáng)的放線菌豐度顯著升高。在這個(gè)過(guò)程中,蛋白質(zhì)的消耗可以有效減少因蛋白質(zhì)含量過(guò)多而產(chǎn)生的惡臭味[18];糖類物質(zhì)轉(zhuǎn)化為醇類、脂類、單萜類等小分子化合物可以產(chǎn)生一定香氣[19-23];纖維素的減少可以有效減少煙葉的辛辣和刺激性[24]。因此,在此過(guò)程中很有可能是微生物影響煙葉品質(zhì)(包括口感和氣味)的重要環(huán)節(jié)。根據(jù)不同城市放置時(shí)間的煙葉表面微生物研究表明,除昆明之外,不同城市的煙葉在放置7 d后,微生物類群與對(duì)照的變化基本不大,且隨著時(shí)間的變化,不同城市放置的煙葉表面主要微生物群落豐度的變化大體一直,也就是說(shuō),相對(duì)于時(shí)間因素來(lái)講,空間地理因素可能不是影響煙葉微生物主要類群豐度變化的主要原因。煙葉品質(zhì)的改變,可能隨放置的時(shí)間不同而逐漸改變。

    總之,該研究通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)解析了煙葉在不同制絲工藝加工及儲(chǔ)存過(guò)程中微生物群落結(jié)構(gòu)的變化,發(fā)現(xiàn)在一加出口和二加入口的過(guò)程中可能是與煙葉品質(zhì)相關(guān)的重要階段,為微生物制劑指導(dǎo)煙葉加工工藝提供理論借鑒。此外,研究還表明,在儲(chǔ)存過(guò)程中,煙葉的儲(chǔ)存時(shí)間可能是影響煙葉表面微生物群落變化的主要因素,而其所在地理位置環(huán)境對(duì)煙葉的影響不大。

    參考文獻(xiàn)

    [1]

    REID J J,MCKINSTRY D W,HALEY E E.Studies on the fermentation of tobacco I: Microflora of cured and fermenting cigarleaf tobacco[J].Pennsylvania agricultural experiment station bulletin,1933,356: 1-17.

    [2] TAMAYO A I,CANCHO F G.Microbiology of the fermentation of Spanish tobacco[J].International congress of microbiology,1953,6:48-50.

    [3] 謝和,韓忠禮,趙維娜.微生物發(fā)酵對(duì)烤煙內(nèi)在品質(zhì)的影響[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào),1999,18(4): 227-330.

    [4] 邱立友,趙銘清,岳雪梅.自然發(fā)酵烤煙葉面微生物區(qū)系的分離鑒定[J].煙草科技,2000,33(3): 14-17.

    [5] 王革,馬永凱,王穎琦,等.自然發(fā)酵煙葉的優(yōu)勢(shì)有益菌群分析[J].云南煙草,2003,74(2):27-30.

    [6] 朱大恒,韓錦峰,張愛(ài)萍,等.自然醇化與人工發(fā)酵對(duì)烤煙化學(xué)成分變化的影響比較研究[J].煙草科技,1999,32(1): 3-5.

    [7] 趙銘欽,劉云,李芳芳,等.陳化烤煙葉面優(yōu)勢(shì)菌的篩選鑒定與其增香效應(yīng)[J].生態(tài)和環(huán)境微生物,2009,49(5): 624-630.

    [8] 李珊輝.卷煙加工及儲(chǔ)存過(guò)程中微生物群落結(jié)構(gòu)與其品質(zhì)關(guān)系的研究[D].昆明: 云南大學(xué),2015.

    [9] CAPORASO J G,KUCZYNSKI J,STOMBAUGH J,et al.QIIME allows analysis of highthroughput community sequencing data[J].Nature methods,2010,7(5):335-336.

    [10] EDGAR R C.Search and clustering orders of magnitude faster than BLAST[J].Bioinformatics,2010,26(19):2460-2461.

    [11] ALTSCHUL S F,GISH W,MILLER W,et al.Basic local alignment search tool[J].Journal of molecular biology,1990,215(3):403-410.

    [12] DESANTIS T Z,HUGENHOLTZ P,LARSEN N,et al.Greengenes: Chimerachecked 16S rRNA gene database and workbenchcompatible in ARB[J].Applied & environmental microbiology,2006,72(7):5069-5072.

    [13] SZCZEPANOWSKI R,BEKEL T,GOESMANN A,et al.Insight into the plasmid metagenome of wastewater treatment plant bacteria showing reduced susceptibility to antimicrobial drugs analysed by the 454pyrosequencing technology[J].Journal of biotechnology,2008,136(1/2):54-64.

    猜你喜歡
    高通量測(cè)序
    基于高通量測(cè)序的野生毛葡萄轉(zhuǎn)錄組SSR信息分析
    木質(zhì)纖維素分解復(fù)合菌系的分解特性與細(xì)菌組成多樣性分析
    基于高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)三種太歲樣品細(xì)菌組成的分析
    基于高通量測(cè)序的玄參根部轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究及萜類化合物合成相關(guān)基因的挖掘
    污水處理中壓力變化對(duì)污泥中微生物群落組成的影響研究
    石柱黃連根腐病根際土壤細(xì)菌微生態(tài)研究
    環(huán)狀RNA在疾病發(fā)生中的作用
    川明參輪作對(duì)煙地土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響
    多穗柯轉(zhuǎn)錄組分析及黃酮類化合物合成相關(guān)基因的挖掘
    人參根際真菌群落多樣性及組成的變化
    考比视频在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 天堂8中文在线网| 欧美国产精品一级二级三级| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲精品乱久久久久久| 五月天丁香电影| 免费在线观看日本一区| 精品高清国产在线一区| 国产精品久久久人人做人人爽| 日韩中文字幕欧美一区二区| 又紧又爽又黄一区二区| 一级黄色大片毛片| 亚洲精品在线美女| 男人舔女人的私密视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲视频免费观看视频| 精品高清国产在线一区| 91九色精品人成在线观看| av免费在线观看网站| av片东京热男人的天堂| 亚洲avbb在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成人三级做爰电影| 亚洲视频免费观看视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 精品久久蜜臀av无| 性色av乱码一区二区三区2| 国产伦理片在线播放av一区| 90打野战视频偷拍视频| 久久久久久久精品吃奶| 91国产中文字幕| 99久久国产精品久久久| 伦理电影免费视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 在线观看舔阴道视频| 久热爱精品视频在线9| 999久久久国产精品视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 精品人妻在线不人妻| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久久久久久精品吃奶| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美精品av麻豆av| 超碰97精品在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 色精品久久人妻99蜜桃| 我的亚洲天堂| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 黑丝袜美女国产一区| 青草久久国产| 怎么达到女性高潮| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产免费现黄频在线看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产在视频线精品| 欧美黑人精品巨大| 免费人妻精品一区二区三区视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲精品粉嫩美女一区| 免费不卡黄色视频| a级毛片黄视频| h视频一区二区三区| av网站免费在线观看视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 岛国在线观看网站| 宅男免费午夜| 精品国产乱码久久久久久小说| 中文字幕av电影在线播放| 999久久久国产精品视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 婷婷丁香在线五月| 日本黄色视频三级网站网址 | 90打野战视频偷拍视频| av网站在线播放免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产成人系列免费观看| 18在线观看网站| 人人澡人人妻人| 不卡一级毛片| 国产精品av久久久久免费| 久久久久视频综合| 麻豆乱淫一区二区| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲国产欧美在线一区| 成人特级黄色片久久久久久久 | av网站在线播放免费| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日韩欧美一区视频在线观看| 美女主播在线视频| 国产免费视频播放在线视频| 国产野战对白在线观看| 69av精品久久久久久 | 女人久久www免费人成看片| 热99re8久久精品国产| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 日韩成人在线观看一区二区三区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日本av手机在线免费观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 女人久久www免费人成看片| 两人在一起打扑克的视频| 国产精品久久久久成人av| 国产又色又爽无遮挡免费看| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲午夜理论影院| 考比视频在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 一本久久精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 国产av又大| 夫妻午夜视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久久精品区二区三区| 人妻 亚洲 视频| 91精品三级在线观看| 国产精品 国内视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 成人18禁在线播放| 久久精品国产综合久久久| 欧美日韩亚洲高清精品| av视频免费观看在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 69精品国产乱码久久久| 午夜成年电影在线免费观看| 一本久久精品| 久久人人97超碰香蕉20202| 一进一出好大好爽视频| 满18在线观看网站| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲熟妇熟女久久| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 精品久久久久久久毛片微露脸| 中文字幕色久视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 俄罗斯特黄特色一大片| 多毛熟女@视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 日韩三级视频一区二区三区| 狂野欧美激情性xxxx| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 婷婷成人精品国产| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 三上悠亚av全集在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产成人av激情在线播放| 又紧又爽又黄一区二区| 国产又爽黄色视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲国产av影院在线观看| 一级毛片女人18水好多| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 在线天堂中文资源库| 女人精品久久久久毛片| 一二三四在线观看免费中文在| 99re6热这里在线精品视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久久久网色| 成人亚洲精品一区在线观看| 中文字幕色久视频| 欧美性长视频在线观看| 日本五十路高清| 亚洲第一青青草原| 免费看十八禁软件| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲欧美激情在线| 亚洲,欧美精品.| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 午夜福利视频精品| 国产成人系列免费观看| 亚洲精品自拍成人| 窝窝影院91人妻| 国产野战对白在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久热在线av| 亚洲专区中文字幕在线| 久久中文字幕一级| www.精华液| 欧美成人午夜精品| 国产在线视频一区二区| 免费不卡黄色视频| 精品福利观看| 99re6热这里在线精品视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 午夜福利乱码中文字幕| 久久精品亚洲av国产电影网| 91精品国产国语对白视频| 十八禁高潮呻吟视频| 男女床上黄色一级片免费看| 国产国语露脸激情在线看| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲第一av免费看| 电影成人av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 我要看黄色一级片免费的| 欧美 日韩 精品 国产| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产成人精品在线电影| 久久性视频一级片| 久久久久视频综合| 97人妻天天添夜夜摸| 久热这里只有精品99| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产激情久久老熟女| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲三区欧美一区| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲精品乱久久久久久| 12—13女人毛片做爰片一| 大型av网站在线播放| 亚洲精品av麻豆狂野| 成年动漫av网址| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲熟女毛片儿| 香蕉丝袜av| 黄色a级毛片大全视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久久国产成人免费| 国产老妇伦熟女老妇高清| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产人伦9x9x在线观看| 国产不卡一卡二| 女警被强在线播放| 欧美亚洲日本最大视频资源| 最新的欧美精品一区二区| 在线观看舔阴道视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美国产精品一级二级三级| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美国产精品一级二级三级| 美女午夜性视频免费| bbb黄色大片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 在线观看免费高清a一片| 两个人免费观看高清视频| 国产麻豆69| 热re99久久精品国产66热6| 男女免费视频国产| 一区二区三区乱码不卡18| 精品少妇黑人巨大在线播放| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产在线观看jvid| 亚洲成a人片在线一区二区| 午夜两性在线视频| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产在线免费精品| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产不卡av网站在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产色视频综合| 亚洲一区中文字幕在线| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 怎么达到女性高潮| 深夜精品福利| 多毛熟女@视频| tube8黄色片| 视频区图区小说| 亚洲三区欧美一区| a级毛片在线看网站| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲熟妇熟女久久| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 日韩欧美一区视频在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 新久久久久国产一级毛片| 波多野结衣一区麻豆| 手机成人av网站| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品国内亚洲2022精品成人 | 宅男免费午夜| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美午夜高清在线| 国产精品 欧美亚洲| av线在线观看网站| 日本a在线网址| 国产精品久久电影中文字幕 | 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲精品国产区一区二| 一区二区三区精品91| 97人妻天天添夜夜摸| 一夜夜www| 亚洲国产欧美网| 国产欧美亚洲国产| 欧美久久黑人一区二区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久久久久久大尺度免费视频| a在线观看视频网站| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲欧美一区二区三区久久| 岛国毛片在线播放| 中文字幕av电影在线播放| 高清视频免费观看一区二区| 我的亚洲天堂| 十八禁网站免费在线| 久久影院123| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 亚洲天堂av无毛| 国产日韩欧美视频二区| 嫁个100分男人电影在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产男女超爽视频在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品国产乱子伦一区二区三区| 久久中文看片网| 在线播放国产精品三级| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 狂野欧美激情性xxxx| 新久久久久国产一级毛片| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| av线在线观看网站| av片东京热男人的天堂| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美黄色淫秽网站| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲国产欧美在线一区| 精品视频人人做人人爽| 亚洲欧洲日产国产| 欧美午夜高清在线| 久久久久久久久免费视频了| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久影院123| 蜜桃在线观看..| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 亚洲国产av新网站| 国产在线一区二区三区精| 一进一出抽搐动态| av天堂在线播放| 亚洲人成伊人成综合网2020| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 操美女的视频在线观看| 亚洲美女黄片视频| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 精品一区二区三区四区五区乱码| 男女午夜视频在线观看| 亚洲免费av在线视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产一区二区在线观看av| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产区一区二久久| 亚洲欧美色中文字幕在线| 日韩中文字幕视频在线看片| 在线观看免费视频网站a站| 国产精品免费大片| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久久精品94久久精品| 久久亚洲精品不卡| 亚洲免费av在线视频| 亚洲精品国产区一区二| 性色av乱码一区二区三区2| 午夜免费鲁丝| 亚洲av美国av| 国产精品电影一区二区三区 | 国产欧美日韩综合在线一区二区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 777米奇影视久久| 精品国产一区二区三区四区第35| 夫妻午夜视频| 深夜精品福利| av天堂久久9| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲精华国产精华精| av免费在线观看网站| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 99精品欧美一区二区三区四区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 成人免费观看视频高清| 咕卡用的链子| 满18在线观看网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 午夜福利乱码中文字幕| 十分钟在线观看高清视频www| tube8黄色片| 一级片'在线观看视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 91大片在线观看| 天堂动漫精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品免费久久久久久久清纯 | av欧美777| 久久久精品94久久精品| 十八禁网站免费在线| 91精品国产国语对白视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 久久国产精品男人的天堂亚洲| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲伊人色综图| 在线av久久热| 久久久精品免费免费高清| 最新美女视频免费是黄的| 国产一卡二卡三卡精品| 国产男女内射视频| 无遮挡黄片免费观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 正在播放国产对白刺激| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美日韩福利视频一区二区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产亚洲精品一区二区www | 超色免费av| 免费在线观看影片大全网站| 日本一区二区免费在线视频| 在线观看人妻少妇| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 一级毛片女人18水好多| 日本黄色日本黄色录像| 99九九在线精品视频| 日本a在线网址| 久热爱精品视频在线9| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 12—13女人毛片做爰片一| 日本vs欧美在线观看视频| 男人舔女人的私密视频| 国产色视频综合| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 精品免费久久久久久久清纯 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 男女无遮挡免费网站观看| 一本色道久久久久久精品综合| 三上悠亚av全集在线观看| 两性夫妻黄色片| 女同久久另类99精品国产91| 久久亚洲真实| 一本大道久久a久久精品| 精品久久久久久久毛片微露脸| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 人妻 亚洲 视频| 狂野欧美激情性xxxx| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久国产成人免费| 一区二区三区激情视频| 亚洲精品自拍成人| 无限看片的www在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久精品91无色码中文字幕| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 日韩大片免费观看网站| 精品亚洲成国产av| av天堂久久9| 人妻一区二区av| 中文字幕高清在线视频| 亚洲人成77777在线视频| www日本在线高清视频| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲欧美激情在线| 热99re8久久精品国产| 韩国精品一区二区三区| 国产麻豆69| 一个人免费看片子| 男女高潮啪啪啪动态图| kizo精华| 成人精品一区二区免费| 亚洲av第一区精品v没综合| 手机成人av网站| 视频在线观看一区二区三区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 我要看黄色一级片免费的| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 建设人人有责人人尽责人人享有的| tocl精华| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲成国产人片在线观看| 久久亚洲精品不卡| 久久热在线av| 大陆偷拍与自拍| av不卡在线播放| 亚洲人成电影观看| 精品人妻1区二区| www.熟女人妻精品国产| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 十八禁人妻一区二区| 欧美日韩黄片免| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久久久久久久免费视频了| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 在线播放国产精品三级| 蜜桃在线观看..| 男男h啪啪无遮挡| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 9191精品国产免费久久| 国产免费现黄频在线看| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲人成77777在线视频| 香蕉久久夜色| 国产成人影院久久av| 激情视频va一区二区三区| 久久香蕉激情| 91成人精品电影| 大码成人一级视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 一本大道久久a久久精品| 亚洲一码二码三码区别大吗| av免费在线观看网站| 麻豆国产av国片精品| 在线观看一区二区三区激情| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲第一青青草原| 欧美乱码精品一区二区三区| 又大又爽又粗| 亚洲精品在线观看二区| 国产片内射在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 我要看黄色一级片免费的| 啪啪无遮挡十八禁网站| 免费在线观看影片大全网站| 国产男女内射视频| 91成年电影在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 一级片免费观看大全| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲欧洲日产国产| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 电影成人av| 亚洲精品在线观看二区| 久久国产精品人妻蜜桃| 日本a在线网址| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲欧洲日产国产| 日韩视频一区二区在线观看| 激情视频va一区二区三区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲男人天堂网一区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 99热国产这里只有精品6| 国产高清激情床上av| 亚洲午夜理论影院| 国产精品成人在线| 欧美在线黄色| 丁香六月欧美| 国产黄色免费在线视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 精品国产乱子伦一区二区三区| 欧美精品一区二区大全| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 午夜91福利影院| 男女边摸边吃奶| 日韩免费av在线播放| 成人国产av品久久久| 国产97色在线日韩免费| 国产不卡一卡二| 成人影院久久| 99国产精品免费福利视频| 黄色毛片三级朝国网站| 97人妻天天添夜夜摸| 制服诱惑二区| 午夜福利视频在线观看免费| 欧美大码av| 日韩视频一区二区在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 最黄视频免费看| 搡老岳熟女国产| 黄片播放在线免费| 亚洲九九香蕉| 欧美日韩av久久| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产成人系列免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 露出奶头的视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 美女主播在线视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 黄片播放在线免费| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美成人午夜精品| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品国产av在线观看| 精品高清国产在线一区| 老鸭窝网址在线观看|