• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    木質(zhì)纖維素分解復(fù)合菌系的分解特性與細(xì)菌組成多樣性分析

    2017-10-27 14:31何水清艾士奇王建豪
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年16期
    關(guān)鍵詞:分解高通量測序

    何水清 艾士奇 王建豪

    摘要:利用木質(zhì)纖維素分解復(fù)合菌系BYND-8對稻稈進(jìn)行生物處理,研究其分解特性及其細(xì)菌組成多樣性,為應(yīng)用微生物方法處理木質(zhì)纖維素類資源提供理論依據(jù)。通過測定復(fù)合菌系在分解稻稈的過程中木質(zhì)纖維素各成分含量的變化,同時測定分解過程中培養(yǎng)基pH值的變化趨勢,研究其分解特性。運(yùn)用高通量測序技術(shù)對復(fù)合菌系rRNA基因的V3-V4區(qū)進(jìn)行測序,分析其細(xì)菌組成多樣性。結(jié)果表明,復(fù)合菌系BYND-8具有較高的木質(zhì)纖維素分解能力,對培養(yǎng)基的pH值具有自我調(diào)節(jié)能力;在綱、目、科3個分類水平上,分別將復(fù)合菌系中的細(xì)菌分成了73個綱、132個目和226個科,復(fù)合菌系中細(xì)菌在科的分類水平上比較豐富,其中相對量較高、占優(yōu)勢的細(xì)菌為紫單胞菌科(Porphyromonadaceae,1873%)、柄桿菌科(Caulobacteraceae,1203%)和理研菌科(Rikenellaceae,1196%)。木質(zhì)纖維素分解復(fù)合菌系BYND-8具有較高的細(xì)菌組成多樣性。

    關(guān)鍵詞:木質(zhì)纖維素;分解;復(fù)合菌系;高通量測序;多樣性分析;木質(zhì)纖維素分解機(jī)理

    中圖分類號: Q9399;S182文獻(xiàn)標(biāo)志碼:

    文章編號:1002-1302(2017)16-0241-06

    收稿日期:2016-09-20

    基金項目:黑龍江省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃(編號:20141022311);國家科技支撐計劃(編號:2015BAD21B04、2016YFD0800602);黑龍江農(nóng)墾總局科技攻關(guān)項目(編號:HNK125B-11-06A、HNK125B-11-11A、JCTG17-04)。

    作者簡介:何水清(1994—),男,江西寧都人,主要從事農(nóng)業(yè)廢棄物資源化利用與環(huán)境微生物分子生態(tài)學(xué)的研究。E-mail:616022790@qqcom。

    通信作者:王偉東,博士,教授,主要從事農(nóng)業(yè)廢棄物資源化利用與環(huán)境微生物分子生態(tài)學(xué)的研究。E-mail:wwdcyy@126com。

    為了減少化石燃料的過度開采而帶來的環(huán)境污染,木質(zhì)纖維素這一重要的生物質(zhì)資源越來越受到重視。中國是一個農(nóng)業(yè)大國,每年作物秸稈產(chǎn)量約8億t,其中含有大量的木質(zhì)纖維素資源。這些秸稈中約有30%沒有得到資源化利用,大部分被就地焚燒,不僅造成了資源的浪費(fèi),而且引起了嚴(yán)重的環(huán)境污染。近年來,秸稈等木質(zhì)纖維素類廢棄物資源化利用越來越受到政府和科研工作者的重視,其中高效、環(huán)保、廉價的生物處理法被日益采用[3]。崔宗均等從堆肥樣品中富集篩選、馴化得到1組可高效穩(wěn)定分解木質(zhì)纖維素的復(fù)合菌系MC1[4-5];趙聽等得到了能分解小麥秸稈的復(fù)合菌群FWD1,小麥秸稈的分解率達(dá)到7692%;劉長莉篩選馴化出復(fù)合菌系NSC-7,稻稈的分解率達(dá)447%。同樣也有分解木質(zhì)纖維素的單菌與復(fù)合菌系分解能力比較的研究報道,張曉倫等從垃圾堆腐物中分離得到了3株具有較強(qiáng)纖維素分解能力的真菌,發(fā)現(xiàn)由2種不同菌株組成的混合菌系比任何單一菌株的纖維素分解能力強(qiáng),CMC酶活性是單一菌株的15倍[8];陳耀寧等將1株黃孢原毛平革菌和1株歧皺青霉混合培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)木質(zhì)纖維素的分解率較單一菌株大大提高[9];溫雪等將2株具有較強(qiáng)木質(zhì)纖維素分解能力的菌株與2株無分解能力的菌株進(jìn)行組合,發(fā)現(xiàn)組合菌群的纖維素分解能力較單獨的菌株分解能力穩(wěn)定而高效[10]。Kato 等通過對復(fù)合系MC1中關(guān)鍵菌株的重新組合發(fā)現(xiàn)其纖維素的分解能力高于單一菌株[11]。單一菌株對木質(zhì)纖維素的分解能力遠(yuǎn)不及多種菌株協(xié)同作用[12-13]。因此,利用微生物復(fù)合菌系各菌株之間的協(xié)同作用來高效穩(wěn)定地分解木質(zhì)纖維素并分析其分解機(jī)理具有重要意義。

    本研究以實驗室構(gòu)建的中溫木質(zhì)纖維素分解復(fù)合菌系BYND-8為研究對象,運(yùn)用高通量測序技術(shù)分析其細(xì)菌組成多樣性,為復(fù)合菌系分解木質(zhì)纖維素的機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

    1材料與方法

    11培養(yǎng)條件

    纖維素蛋白胨培養(yǎng)基(PCS):蛋白胨50 g,NaCl 50 g,CaCO3 20 g,酵母粉10 g,木質(zhì)纖維素(稻稈)50 g,蒸餾水1 L,pH自然,1×105 Pa滅菌15 min,按培養(yǎng)基體積的10%接種,30 ℃靜止培養(yǎng)。

    稻稈預(yù)處理方法:將稻稈剪切成5 cm的小段,用1%的NaOH溶液浸泡24 h,然后用自來水沖洗稻稈,再用鹽酸(1 mol/L)浸泡,之后用自來水沖洗并浸泡12 h,至pH值為70左右,105 ℃烘干至恒重備用。

    12復(fù)合菌系的篩選

    把旺盛產(chǎn)沼氣的培養(yǎng)液10 mL接種到裝有90 mL PCS培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi),提前放入濾紙條作為分解的外觀指標(biāo),將05 g經(jīng)預(yù)處理的稻稈作為碳源,30 ℃靜止培養(yǎng)。當(dāng)濾紙條完全分解、稻稈軟化時,按體積10%的接種量接種到同樣的培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。在繼代培養(yǎng)過程中,留下分解能力強(qiáng)的培養(yǎng)物,淘汰失去分解能力的培養(yǎng)物。如果培養(yǎng)物分解能力下降,則把不同的培養(yǎng)物相互組配,繼續(xù)傳代培養(yǎng)。保留分解能力高效且穩(wěn)定的培養(yǎng)物,用作后續(xù)研究。

    13復(fù)合菌系中稻稈及其木質(zhì)素、纖維素、半纖維素分解率的變化

    取三角瓶,將10 g稻稈加入90 mL PCS培養(yǎng)基中,按體積比接種10%的復(fù)合菌系,30 ℃靜止培養(yǎng)。將培養(yǎng)0、1、2、3、4、5、6、7 d的稻稈分別取出,每天取3瓶,5 000 r/min離心,棄上清,為消除菌體用硝酸和鹽酸的混合溶液沖洗稻稈,離心,用清水沖洗,離心,105 ℃烘干至恒重后稱質(zhì)量,計算每瓶稻稈的失重量和分解率[14],最后計算平均值。烘干后的稻稈經(jīng)粉碎過篩后用于測定木質(zhì)素、纖維素和半纖維素的含量。在纖維素分析儀(美國ANKOM220)上,用改良的范式洗滌法測定木質(zhì)素、纖維素和半纖維素的含量[15],計算分解率。

    14復(fù)合菌系pH值的動態(tài)變化

    141復(fù)合菌系pH值的變化

    100 mL三角瓶內(nèi)分裝 90 mL PCS培養(yǎng)基,按體積比接種10%的復(fù)合菌系,30 ℃靜止培養(yǎng)。每天按時取3瓶復(fù)合菌系,用pH計(日本HORIBA)測定其pH值,連續(xù)測定10 d。

    142不同的起始pH值對復(fù)合菌系培養(yǎng)基pH值的影響

    將PCS培養(yǎng)液的初始pH值分別調(diào)至4、5、6、7、8、9、10,按體積比接種10%的復(fù)合菌系,30 ℃靜止培養(yǎng)。每天按時取3瓶復(fù)合菌系,用pH計(日本HORIBA)測定其pH值,連續(xù)測定 7 d。

    15復(fù)合菌系的高通量測序

    151獲取測序樣品

    取稻稈分解能力旺盛階段(接種培養(yǎng)5 d)的液態(tài)培養(yǎng)物和稻稈表面的微生物。

    培養(yǎng)基中微生物的獲取方法:取適量培養(yǎng)基 12 000 r/min 離心10 min可得到菌體。

    稻稈表面微生物的獲取方法:取適量復(fù)合菌系處理5 d的稻稈,加入適量PBS緩沖液,150~200 r/min振蕩30~60 min,超聲5 min,再150~200 r/min振蕩30~60 min。取上清液加入到50 mL離心管中,120 00 r/min離心10 min得菌體。

    將所得培養(yǎng)基中的微生物和稻稈表面的微生物混合備用。

    152提取總DNA

    取適量所得的菌體,用氯化芐法提取其總DNA[16]。所提取的總DNA要保證濃度大于10 ng/μL,總量超過500 ng,D260 nm/280 nm在18~22之間。瓊脂糖凝膠電泳主帶清晰。

    15316s rDNA基因V3-V4區(qū)PCR擴(kuò)增及測序

    提取樣品總DNA后,根據(jù)細(xì)菌V3-V4區(qū)設(shè)計得到引物,合并引物接頭,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對其產(chǎn)物進(jìn)行純化、定量及均一化,最后形成測序文庫。對構(gòu)建好的文庫進(jìn)行質(zhì)檢,質(zhì)檢合格的文庫用Illumina MiSeq PE300進(jìn)行測序。

    154細(xì)菌多樣性數(shù)據(jù)分析

    對序列進(jìn)行聚類,將相似性超過97%的序列劃分到同一個OTU(operational taxonomic units)。按眾數(shù)原則對序列進(jìn)行物種注釋。統(tǒng)計樣品在各個分類水平上的構(gòu)成,用餅圖進(jìn)行可視化。對統(tǒng)計樣品中在綱、目、科分類水平上的菌群作聚類,用相同顏色表示該分類水平所含的OTU序列豐度的相對高低。

    2結(jié)果與分析

    21復(fù)合菌系中稻稈及其木質(zhì)素、纖維素、半纖維素分解率的變化

    經(jīng)過連續(xù)的傳代培養(yǎng),已構(gòu)建出具有高效穩(wěn)定分解木質(zhì)纖維素能力的復(fù)合菌系BYND-8。經(jīng)前期的試驗驗證,復(fù)合菌系經(jīng)傳代培養(yǎng)和保存后,菌種組成和功能都已達(dá)到穩(wěn)定。在復(fù)合菌系培養(yǎng)過程中,可明顯觀察到濾紙分解,稻稈軟化成細(xì)絲狀。

    稻稈和稻稈中木質(zhì)素、纖維素、半纖維素的分解率的變化結(jié)果如圖1所示。在培養(yǎng)的前4 d秸稈被旺盛分解,4 d后分解能力減弱基本不再分解。在培養(yǎng)4 d時分解率達(dá)到最高值,稻稈和稻稈中木質(zhì)素、纖維素、半纖維素的分解率分別為392%、540%、317%、480%。稻稈經(jīng)過復(fù)合菌系處理7 d后,稻稈和稻稈中木質(zhì)素、纖維素、半纖維素的分解率分別為490%、555%、407%、536%。

    22復(fù)合菌系培養(yǎng)體系pH值的動態(tài)變化

    221復(fù)合菌系分解稻稈過程中培養(yǎng)體系pH值的變化

    由圖2可知,在培養(yǎng)的前4 d,培養(yǎng)基的pH值呈下降趨勢,到培養(yǎng)4 d時,pH值降到最低,從起始的74降到63。從培養(yǎng)5 d開始,培養(yǎng)基的pH值開始回升,到培養(yǎng)7 d時,培養(yǎng)基的pH值回升到70左右,并保持相對穩(wěn)定狀態(tài),一直到培養(yǎng) 10 d,培養(yǎng)基的pH值保持在72左右,與培養(yǎng)基的起始pH值相差不大。

    222不同的起始pH值條件下復(fù)合菌系培養(yǎng)基pH值的變化

    由表1可知,當(dāng)培養(yǎng)基的初始pH值為4時,接種復(fù)合菌系1 d后培養(yǎng)基的pH值上升至61,直至接種7 d時,培養(yǎng)基的pH值一直保持在61左右。當(dāng)培養(yǎng)基的初始pH值為5和6時,接種復(fù)合菌系1 d后培養(yǎng)基的pH值分別上升至62和65,分別在培養(yǎng)5、4 d時pH值達(dá)到最低值,但是到培養(yǎng) 6 d 時培養(yǎng)基的pH值回升到61并保持相對穩(wěn)定。當(dāng)培養(yǎng)基的初始pH值為7和8時,接種復(fù)合菌系1 d后培養(yǎng)基的pH值明顯下降,到培養(yǎng)4 d時培養(yǎng)基的pH值達(dá)到最低值,分別為62、63,到接種后6 d,培養(yǎng)基的pH值回升到70左右并保持相對穩(wěn)定狀態(tài)。當(dāng)培養(yǎng)基的初始pH值為9和10時,接種復(fù)合菌系1 d后培養(yǎng)基的pH值呈現(xiàn)明顯下降,且一直維持這一下降趨勢,到接種后7 d時,培養(yǎng)基的pH值分別達(dá)到63、60左右。

    在研究不同的起始pH值條件下復(fù)合菌系培養(yǎng)基pH值變化的同時,對不同的起始pH值條件下稻稈的分解率進(jìn)行了試驗。由圖3可知,當(dāng)pH值在40~100范圍內(nèi)時,稻稈都會發(fā)生分解,但是復(fù)合菌系對稻稈的分解程度各不相同。當(dāng)pH值為80時,稻稈的分解率最高,可達(dá)到535%;其次是[CM(25]當(dāng)pH值為70時,稻稈的分解率為518%;當(dāng)pH值為4和100時,稻稈的分解率則明顯下降。

    綜合以上結(jié)果可知,在培養(yǎng)基的起始pH值為4~10時,復(fù)合菌系的pH值隨著稻稈的分解而自動調(diào)節(jié),最終的pH值都保持在6~7之間,接近中性。在木質(zhì)纖維素分解的旺盛時期,培養(yǎng)基的pH值均可降到最低值。當(dāng)木質(zhì)纖維素分解完成后,培養(yǎng)基的pH值均可自動回升。當(dāng)培養(yǎng)基的初始pH值為4~10時,稻稈呈現(xiàn)不同的分解狀態(tài),分解率各不相同,而適宜復(fù)合菌系分解稻稈的初始pH值接近中性,培養(yǎng)基過酸過堿都不適宜復(fù)合菌系分解稻稈。

    23復(fù)合菌系的細(xì)菌組成多樣性

    對復(fù)合菌系進(jìn)行16s rDNA擴(kuò)增子高通量測序,將復(fù)合菌系在微生物的綱、目、科3個分類水平給出分類。復(fù)合菌系在微生物分類單元綱的水平上的物種相對豐度統(tǒng)計結(jié)果如圖4所示。

    復(fù)合菌系的細(xì)菌組成在綱的水平上包含73個綱的細(xì)菌,其物種相對豐度高于100%的可分類菌綱共有13個,包括擬桿菌綱(Bacteroidia)、鞘脂桿菌綱(Sphingobacteriia)、α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)、梭菌綱(Clostridia)、纖維黏網(wǎng)菌綱(Cytophagia)、螺旋體綱(Spirochaetes)、互養(yǎng)菌綱(Synergistia)、黃桿菌綱(Flavobacteria)、ε-變形菌綱(Epsilonproteobacteria)、黏膠球形菌綱(Lentisphaeria)、γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)、β-變形菌綱(Betaproteobacteria)和未培養(yǎng)細(xì)菌,其物種相對豐度分別為3675%、1600%、1284%、789%、581%、344%、307%、277%、253%、195%、148%、141%、107%。

    復(fù)合菌系在微生物分類單元目的水平上的物種相對豐度統(tǒng)計結(jié)果如圖5所示。

    復(fù)合菌系的細(xì)菌組成在目的水平上包含132個目的細(xì)菌,其物種相對豐度高于100%的可分類菌目共有9個,包括擬桿菌目(Bacteroidales)、鞘脂桿菌目(Sphingobacteriales)、柄桿菌目(Caulobacterales)、梭菌目(Clostridiales)、嗜纖維菌目(Cytophagales)、螺旋體目(Spirochaetales)、Synergistales、黃桿菌目(Flavobacteriales)、彎曲菌目(Campylobacterales),其物種相對豐度分別為3816%、1661%、1197%、818%、602%、357%、319%、287%、263%。

    復(fù)合菌系在微生物分類單元科的水平上的物種相對豐度統(tǒng)計結(jié)果如圖6所示。

    對復(fù)合菌系進(jìn)行高通量測序后發(fā)現(xiàn)細(xì)菌的組成在科的水平上比較豐富。復(fù)合菌系的細(xì)菌組成在科的水平上包含226個科的細(xì)菌,其物種相對豐度高于100%的可分類菌科共有14個,包括紫單胞菌科(Porphyromonadaceae)、柄桿菌科(Caulobacteraceae)、理研菌科(Rikenellaceae)、?;疲∕arinilabiaceae)、嗜纖維菌科(Cytophagaceae)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、互養(yǎng)菌科(Synergistaceae)、彎曲菌科(Campylobacteraceae)、螺旋體科(Spirochaetaceae)、黃桿菌科(Flavobacteriaceae)、Christensenellaceae和3個未培養(yǎng)的細(xì)菌,其物種相對豐度分別為1873%、1203%、1196%、733%、603%、371%、323%、266%、258%、219%、123%,3個未培養(yǎng)的細(xì)菌相對豐度共占了1628%。復(fù)合菌系中相對豐度低于1%的可分類菌科共有212個,由于這些細(xì)菌在復(fù)合菌系中的相對豐度極小,共占復(fù)合菌系的1205%。

    3討論

    利用限制性培養(yǎng)技術(shù)從產(chǎn)沼氣旺盛的沼液中篩選具有分解木質(zhì)纖維素分解能力的復(fù)合菌系BYND-8,用稻稈的分解率作為指標(biāo),培養(yǎng)7 d后,稻稈及稻稈中木質(zhì)素、纖維素和半纖[CM(25]維素的分解率分別為490%、555%、407%、536%。雖[CM)]

    然與已報道的復(fù)合菌系相比其木質(zhì)纖維素能力相對較低[2,4,7,11,14],但BYND-8與它們的篩選樣品來源不同,是從沼氣發(fā)酵體系中篩選得到,沼氣發(fā)酵體系是厭氧環(huán)境,在此也證明不同的培養(yǎng)條件對于纖維素分解能力影響較大。該復(fù)合菌系可能應(yīng)用于將來的以稻稈為原料的沼氣發(fā)酵的預(yù)處理。

    通過復(fù)合菌系在分解稻稈過程中pH值變化趨勢、調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的不同起始pH值復(fù)合菌系對稻稈的分解率來看,復(fù)合菌系可以自我調(diào)節(jié)培養(yǎng)環(huán)境的pH值,這充分體現(xiàn)了該復(fù)合菌系較純培養(yǎng)菌株分解木質(zhì)纖維素的優(yōu)勢所在。崔宗均等構(gòu)建的木質(zhì)纖維素分解復(fù)合菌系的pH值隨著培養(yǎng)時間先下降后升高最后趨于穩(wěn)定并與初始pH值較一致[4,17],這與本研究的結(jié)果相吻合。復(fù)合菌系培養(yǎng)體系的pH值對于木質(zhì)纖維素的分解具有明顯的影響。

    不同菌株協(xié)同作用可高效穩(wěn)定地分解木質(zhì)纖維素,宋亞彬曾通過傳統(tǒng)的平板分離法和變性梯度凝膠電泳法分析了復(fù)合菌系的菌種組成多樣性,她發(fā)現(xiàn)復(fù)合菌系的微生物組成主要分為腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、產(chǎn)堿桿菌科(Alcaligenaceae)、黃單胞菌科(Xanthomonadaceae)、芽孢桿菌科(Bacillaceae)和一個未知的菌科[18]。但是通過對復(fù)合菌系進(jìn)行16S rDNA擴(kuò)增子高通量測序,分析復(fù)合菌系的細(xì)菌組成及多樣性,發(fā)現(xiàn)高通量測序技術(shù)與傳統(tǒng)的分子生物學(xué)手段相比,更加全面、準(zhǔn)確,它將復(fù)合菌系在科的分類水平上分成226個科的細(xì)菌,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)的多樣性分析方法。而且通過高通量測序分析可知,腸桿菌科、產(chǎn)堿桿菌科、黃單胞菌科、芽孢桿菌科的相對豐度分別為011%、086%、006%、0008%,遠(yuǎn)低于高通量測序得到的優(yōu)勢菌株。說明傳統(tǒng)的分析方法存在一定的局限性,不能表征復(fù)合菌系涵蓋的全部微生物。而高通量測序可以揭示不同種類的細(xì)菌在木質(zhì)纖維素分解過程中的功能,分析不同菌種之間存在的協(xié)同關(guān)系。通過對復(fù)合菌系進(jìn)行高通量測序,可以得到復(fù)合菌系中相對量較高的占優(yōu)勢的菌株,進(jìn)而可以揭示分解木質(zhì)纖維素的功能菌。紫單胞菌科屬于擬桿菌門,適宜在中溫厭氧條件下生長,能發(fā)酵多種單糖和二糖,產(chǎn)生有機(jī)酸,如丙酸、乙酸和少量丁酸等[19],曾在石油烴污染土壤及肥育豬后腸分離得到,參與了烴類的厭氧降解及纖維降解[20-21]。蘇增建等從石油污染土壤樣品中得到以石油烴為唯一生長碳源的細(xì)菌菌株,研究了其石油降解能力,結(jié)果表明柄桿菌具有一定的石油降解能力[22],推測柄桿菌在復(fù)合菌系中起到分解木質(zhì)纖維素中長鏈烷烴的作用。高鳳芹對馴化后的瘤胃液和傳統(tǒng)的沼液進(jìn)行高通量測序分析,結(jié)果表明瘤胃液的細(xì)菌主要分布在瘤胃球菌科、理研菌科等,而沼液中含量大于8%的細(xì)菌群落只有理研菌科和瘤胃球菌科,發(fā)揮了高效降解纖維素和甲烷生成的功能[23]。而本研究復(fù)合菌系正是從產(chǎn)沼氣旺盛的沼液中富集篩選得到,理研菌科與瘤胃菌科同樣起到分解木質(zhì)纖維素的作用。瘤胃菌科適合厭氧生長,部分細(xì)菌可氫化不飽和脂肪酸,有的能分解芳香族化合物、肉桂酸和巴豆酸酯[24]。嗜纖維菌科能溶解植物纖維及水解纖維素[25]。黃桿菌科專性需氧。螺旋體科也具有專一性降解半纖維素的作用[26]。互養(yǎng)菌科的細(xì)菌屬于厭氧發(fā)酵菌,可以利用有機(jī)酸發(fā)酵產(chǎn)生乙酸,利于菌系的對烴的降解[27]。在對復(fù)合菌系中優(yōu)勢菌株的分析后發(fā)現(xiàn),分解木質(zhì)纖維素的細(xì)菌在分解木質(zhì)纖維素時,產(chǎn)生了大量的有機(jī)酸,由于有機(jī)酸的積累導(dǎo)致復(fù)合菌系在分解木質(zhì)纖維素旺盛時期pH值降到最低。在這些優(yōu)勢菌中既有好氧細(xì)菌又有厭氧細(xì)菌,而起木質(zhì)纖維素分解作用的主要都是厭氧細(xì)菌,好氧細(xì)菌的存在是將整個體系創(chuàng)造成無氧環(huán)境,進(jìn)而厭氧纖維素分解細(xì)菌發(fā)揮作用。正是由于復(fù)合菌系具有較高的微生物組成多樣性,才使得復(fù)合菌系具有較高的分解木質(zhì)纖維素的能力。

    4結(jié)論

    木質(zhì)纖維素分解復(fù)合菌系BYND-8具有高效穩(wěn)定的分解能力,初始培養(yǎng)基接近中性時其分解效果最好。復(fù)合菌系BYND-8中細(xì)菌在科的分類水平上相對量較高,占優(yōu)勢的細(xì)菌為紫單胞菌科(Porphyromonadaceae)、柄桿菌科(Caulobacteraceae)和理研菌科(Rikenellaceae),主要參與木質(zhì)纖維素的分解。本研究為進(jìn)一步研究復(fù)合菌系協(xié)同分解木質(zhì)纖維素的機(jī)理奠定理論基礎(chǔ)。

    參考文獻(xiàn):

    Jnsson L J,Martin C Pretreatment of lignocellulose:formation of inhibitory by-products and strategies for minimizing their effects[J] Bioresource Technology,2016,199:103-112

    溫博婷,袁旭峰,華彬彬,等 纖維素分解菌系WSD-5常溫產(chǎn)酶高溫糖化小麥秸稈研究[J] 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2014,19(2):36-42

    [3]Venkatesh C,Pradeep V An overview of key pretreatment processes employed for bioconversion of lignocellulosic biomass into biofuels and value added products[J] Biotech,2013,3(5):415-431

    [4]崔宗均,李美丹,樸哲,等 一組高效穩(wěn)定纖維素分解菌復(fù)合系MC1的篩選及功能[J] 環(huán)境科學(xué),2002,23(3):36-39

    [5]Guo P,Wang X F,Zhu W B,et al Degradation of corn stalk by the composite microbial system of MC1[J] Journal of Environmental Sciences,2008,20(1):109-114

    [6]趙聽,張凱煜,谷潔,等 復(fù)合菌群FWD1的木質(zhì)纖維素降解特性及其微生物多樣性研究[J] 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報,2015,34(8):1582-1588

    [7]劉長莉 木質(zhì)纖維素分解復(fù)合菌群NSC-7菌種組成及種間協(xié)作機(jī)理[D] 哈爾濱:東北林業(yè)大學(xué),2008

    [8]張曉倫,劉旭,饒澤昌 高效纖維素分解菌混合培養(yǎng)及其降解能力[J] 南昌大學(xué)學(xué)報:理科版,2005,29(5):500-502

    [9]陳耀寧,曾光明,喻曼,等 與黃孢原毛平革菌協(xié)同降解稻草的混合菌篩選[J] 中國環(huán)境科學(xué),2007,27(2):189-193

    [10]溫雪,付博銳,王彥杰,等 纖維素分解復(fù)合菌系WSC-9中厭氧細(xì)菌的分離[J] 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2013,44(2):47-52

    [11]Kato S,Haruta S,Cui Z J,et al Stable coexistence of five bacterial strains as a cellulose degrading community[J] Applied and Environmental Microbiology,2005,71(11):7099-7106

    [12]Yan L,Gao Y M,Wang Y J,et al Diversity of a mesophilic lignocellulolytic microbial consortium which is useful for enhancement of biogas production[J] Bioresource Technology,2012,111(5):49-54

    [13]Wang W D,Yan L,Cui Z J,et al Characterization of a microbial consortium capable of degrading lignocellulose[J] Bioresource Technology,2011,102(19):9321-9324

    [14]王偉東,崔宗均,??×?,等 一組木質(zhì)纖維素分解菌復(fù)合系的篩選及培養(yǎng)條件對分解活性的影響[J] 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2004,9(5):7-11,44

    [15]何江,毛忠貴,張慶華,等 高效木薯渣分解復(fù)合菌群RXS的構(gòu)建及其發(fā)酵特性研究[J] 環(huán)境科學(xué),2012,33(3):1020-1027

    [16]Zhu H,Qu F,Zhu L H Isolation of genomic DNAs from plants,fungi and bacteria using benzyl chloride[J] Nucleic Acids Research,1993,21(22):5279-5280

    [17]王偉東,王小芬,劉長莉,等 木質(zhì)纖維素分解菌復(fù)合系WSC-6分解稻稈過程中的產(chǎn)物及pH動態(tài)[J] 環(huán)境科學(xué),2008,29(1):219-224

    [18]宋亞彬 中溫木質(zhì)纖維素降解復(fù)合菌系及其對沼氣產(chǎn)量的影響[D] 大慶:黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué),2009

    [19]王學(xué)華,黃俊,宋吟玲,等 高效水解酸化UASB活性污泥的菌群結(jié)構(gòu)分析[J] 環(huán)境科學(xué)學(xué)報,2014,34(11):2779-2784

    [20]張文靜 烴類厭氧降解過程中互營細(xì)菌的分布特征和系統(tǒng)發(fā)育研究[D] 北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2011

    [21]馮平 肥育豬對不同類型纖維消化適應(yīng)性及其后腸發(fā)酵與微生物菌群變化研究[D] 北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2013

    [22]蘇增建,李敏,鄺春蘭 熱帶地區(qū)石油污染土壤中降解菌的篩選[J] 安全與環(huán)境學(xué)報,2008,8(1):86-88

    [23]高鳳芹 柳枝稷發(fā)酵產(chǎn)甲烷過程中纖維素降解機(jī)制及微生物多樣性變化[D] 北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué),2015

    [24]王繼文,王立志,閆天海,等 山羊瘤胃與糞便微生物多樣性[J] 動物營養(yǎng)學(xué)報,2015,27(8):2559-2571

    [25]布坎南,吉本斯 伯杰細(xì)菌鑒定手冊[M] 8版北京:科學(xué)出版社,1984:116-117

    [26]張翔飛 活性干酵母對肉牛瘤胃發(fā)酵、纖維降解及微生物菌群的影響[D] 雅安:四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2014

    [27]周蕾 厭氧烴降解產(chǎn)甲垸菌系的組成及其代謝產(chǎn)物的特征[D] 上海:華東理工大學(xué),2012

    猜你喜歡
    分解高通量測序
    《中國近現(xiàn)代史綱要》研究性學(xué)習(xí)課堂模式分解
    国产白丝娇喘喷水9色精品| 五月开心婷婷网| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲精品视频女| 大码成人一级视频| 婷婷色综合www| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国内精品宾馆在线| 黄片无遮挡物在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 国产黄频视频在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚州av有码| 大码成人一级视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 青青草视频在线视频观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 99久久精品国产国产毛片| 51国产日韩欧美| 晚上一个人看的免费电影| 久久久a久久爽久久v久久| 赤兔流量卡办理| 亚洲欧美日韩东京热| 国产av码专区亚洲av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 婷婷色综合大香蕉| 色哟哟·www| 男女国产视频网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲av免费高清在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产永久视频网站| 国产亚洲最大av| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 婷婷色综合www| 亚洲人成网站在线播| 人妻 亚洲 视频| 成人毛片60女人毛片免费| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲国产色片| 免费看不卡的av| 国产乱人视频| 18禁在线播放成人免费| 18禁动态无遮挡网站| 搞女人的毛片| 99热国产这里只有精品6| 99九九线精品视频在线观看视频| 欧美3d第一页| 欧美日本视频| 只有这里有精品99| 超碰av人人做人人爽久久| 久久久久精品性色| 亚洲欧美成人精品一区二区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 最近中文字幕高清免费大全6| 免费看av在线观看网站| 亚洲色图av天堂| 欧美bdsm另类| 成人无遮挡网站| av线在线观看网站| 免费av不卡在线播放| 一区二区av电影网| 免费观看的影片在线观看| 在线观看人妻少妇| 亚洲精品aⅴ在线观看| 在线观看三级黄色| 最近2019中文字幕mv第一页| a级一级毛片免费在线观看| 国产永久视频网站| 校园人妻丝袜中文字幕| 免费看日本二区| 国产毛片在线视频| 精华霜和精华液先用哪个| 嫩草影院新地址| 极品教师在线视频| 亚洲成色77777| 国产伦精品一区二区三区视频9| 大片免费播放器 马上看| 高清毛片免费看| 人体艺术视频欧美日本| 国产一区亚洲一区在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久精品国产自在天天线| 亚洲精品久久午夜乱码| 别揉我奶头 嗯啊视频| 免费av不卡在线播放| 99久久中文字幕三级久久日本| 精品久久久精品久久久| 99热这里只有是精品50| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲国产日韩一区二区| 日韩一本色道免费dvd| 欧美日韩视频精品一区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲精品亚洲一区二区| 日本午夜av视频| 精品一区二区免费观看| 国产色爽女视频免费观看| 在线观看人妻少妇| 国产精品人妻久久久久久| 我的老师免费观看完整版| 亚洲精品,欧美精品| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲精品成人久久久久久| 欧美zozozo另类| 别揉我奶头 嗯啊视频| 高清午夜精品一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| 色视频www国产| 欧美+日韩+精品| av国产免费在线观看| 好男人视频免费观看在线| 97在线人人人人妻| 在线观看av片永久免费下载| 精品少妇久久久久久888优播| 特大巨黑吊av在线直播| 国产黄片美女视频| 亚洲欧洲日产国产| 美女视频免费永久观看网站| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲av.av天堂| 亚洲av免费高清在线观看| 久久久精品免费免费高清| 婷婷色麻豆天堂久久| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 联通29元200g的流量卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产一区亚洲一区在线观看| 在线免费十八禁| 久久这里有精品视频免费| freevideosex欧美| 一级二级三级毛片免费看| 如何舔出高潮| 国产精品一区二区性色av| 精品一区在线观看国产| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 嫩草影院入口| 免费少妇av软件| 2022亚洲国产成人精品| 精品久久久久久久末码| 秋霞伦理黄片| 精品久久久久久电影网| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 色5月婷婷丁香| 看非洲黑人一级黄片| 毛片一级片免费看久久久久| 日韩一区二区视频免费看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 性插视频无遮挡在线免费观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 七月丁香在线播放| 午夜激情福利司机影院| 白带黄色成豆腐渣| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲国产色片| .国产精品久久| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲成人久久爱视频| 日韩国内少妇激情av| 国产成人91sexporn| 国产精品熟女久久久久浪| 成人一区二区视频在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 久久99热6这里只有精品| 成人美女网站在线观看视频| 精品人妻视频免费看| 免费观看无遮挡的男女| 青春草视频在线免费观看| 精品人妻视频免费看| 亚洲国产最新在线播放| 免费看不卡的av| 草草在线视频免费看| 在现免费观看毛片| 九草在线视频观看| 亚洲精品色激情综合| 人妻系列 视频| 看免费成人av毛片| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 成年版毛片免费区| 国产亚洲最大av| 国产91av在线免费观看| 午夜福利在线在线| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产在线男女| 七月丁香在线播放| 嘟嘟电影网在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 搡老乐熟女国产| 99热这里只有精品一区| 午夜福利高清视频| 国产免费视频播放在线视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 中文欧美无线码| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产精品国产av在线观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 秋霞在线观看毛片| 亚洲国产高清在线一区二区三| 深爱激情五月婷婷| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 只有这里有精品99| 亚洲精品日本国产第一区| 特级一级黄色大片| 2018国产大陆天天弄谢| 伊人久久国产一区二区| 日韩欧美精品v在线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产淫语在线视频| 欧美bdsm另类| 韩国高清视频一区二区三区| 国产av码专区亚洲av| 激情 狠狠 欧美| 丝瓜视频免费看黄片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产av国产精品国产| 黄色欧美视频在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲欧美清纯卡通| 国产成人一区二区在线| 久久久久久久午夜电影| 日本三级黄在线观看| 亚洲精品视频女| 一级毛片我不卡| 熟女av电影| 七月丁香在线播放| 午夜精品国产一区二区电影 | 久久久久九九精品影院| 亚洲国产日韩一区二区| 99九九线精品视频在线观看视频| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲av.av天堂| 国产成人aa在线观看| 色网站视频免费| 亚洲av福利一区| 亚洲人成网站在线播| 国产黄色免费在线视频| 国产人妻一区二区三区在| 欧美激情久久久久久爽电影| 成人特级av手机在线观看| 99热这里只有精品一区| 久久国产乱子免费精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 日本-黄色视频高清免费观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 少妇人妻久久综合中文| 欧美成人精品欧美一级黄| 日本熟妇午夜| 各种免费的搞黄视频| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲精品一二三| 久久精品国产自在天天线| 日本欧美国产在线视频| 亚洲国产精品999| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲精品第二区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 嫩草影院精品99| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久久精品久久久久真实原创| 男人狂女人下面高潮的视频| 在线观看av片永久免费下载| 麻豆成人午夜福利视频| 身体一侧抽搐| 婷婷色综合www| 精品酒店卫生间| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲高清免费不卡视频| 成年版毛片免费区| 观看美女的网站| 可以在线观看毛片的网站| av免费在线看不卡| 亚洲av在线观看美女高潮| 2021天堂中文幕一二区在线观| 丝袜脚勾引网站| 国产成人福利小说| 亚洲人成网站高清观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲真实伦在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 欧美日韩综合久久久久久| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 精品一区二区三卡| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲久久久久久中文字幕| av播播在线观看一区| 国产淫片久久久久久久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 91狼人影院| 亚洲欧洲日产国产| 国产伦精品一区二区三区四那| av免费在线看不卡| videos熟女内射| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 99热这里只有精品一区| 久久久久精品久久久久真实原创| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 2022亚洲国产成人精品| 免费在线观看成人毛片| 久久精品人妻少妇| 2021少妇久久久久久久久久久| 老司机影院毛片| 国产免费视频播放在线视频| 白带黄色成豆腐渣| 天天躁日日操中文字幕| 成年版毛片免费区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 舔av片在线| 波多野结衣巨乳人妻| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 高清在线视频一区二区三区| 高清日韩中文字幕在线| 国产日韩欧美亚洲二区| 日韩伦理黄色片| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久99蜜桃精品久久| 国产成人aa在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 一级毛片我不卡| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲国产最新在线播放| 欧美区成人在线视频| 久久韩国三级中文字幕| 波野结衣二区三区在线| 性色avwww在线观看| 波野结衣二区三区在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 黄色日韩在线| 插阴视频在线观看视频| 99久久九九国产精品国产免费| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 国产视频首页在线观看| 18+在线观看网站| 国产男女内射视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲最大成人av| 日韩一区二区视频免费看| 2018国产大陆天天弄谢| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 精品久久国产蜜桃| 国产伦精品一区二区三区四那| 日韩av免费高清视频| 免费人成在线观看视频色| 亚洲av免费在线观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲av成人精品一二三区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久精品国产自在天天线| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲怡红院男人天堂| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲国产av新网站| 九九爱精品视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| av线在线观看网站| 亚洲av男天堂| 国产色婷婷99| 麻豆国产97在线/欧美| 秋霞伦理黄片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 一本色道久久久久久精品综合| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 精品一区二区免费观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久久久久久久大av| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 精品久久久久久电影网| 日本一本二区三区精品| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产午夜精品一二区理论片| 嫩草影院精品99| 亚洲国产精品999| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 特级一级黄色大片| 国产av国产精品国产| 99久久九九国产精品国产免费| 一个人观看的视频www高清免费观看| 黄色一级大片看看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美xxⅹ黑人| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 婷婷色麻豆天堂久久| 99热全是精品| 亚洲欧美日韩无卡精品| 香蕉精品网在线| 视频区图区小说| 欧美成人午夜免费资源| 国产成年人精品一区二区| 亚洲av成人精品一区久久| 午夜激情久久久久久久| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产精品精品国产色婷婷| 搞女人的毛片| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 欧美日韩综合久久久久久| 毛片女人毛片| 男的添女的下面高潮视频| 国产中年淑女户外野战色| 国产黄色免费在线视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 草草在线视频免费看| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品午夜福利在线看| 国产欧美日韩精品一区二区| 搡老乐熟女国产| 精品少妇黑人巨大在线播放| 午夜福利视频精品| 国产成人精品久久久久久| 亚洲精品日本国产第一区| 久久久亚洲精品成人影院| 国产视频内射| 日韩中字成人| 极品少妇高潮喷水抽搐| 午夜激情久久久久久久| 久久亚洲国产成人精品v| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲色图av天堂| 男插女下体视频免费在线播放| 永久网站在线| 少妇人妻精品综合一区二区| 91aial.com中文字幕在线观看| 如何舔出高潮| 97超视频在线观看视频| 秋霞伦理黄片| 久久99热这里只频精品6学生| 色综合色国产| 日本一二三区视频观看| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 一本色道久久久久久精品综合| 久久久久久国产a免费观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久综合国产亚洲精品| 十八禁网站网址无遮挡 | 嫩草影院新地址| 亚洲经典国产精华液单| 99久国产av精品国产电影| 男女边摸边吃奶| 美女高潮的动态| 看非洲黑人一级黄片| 国产大屁股一区二区在线视频| 日韩av免费高清视频| 久久亚洲国产成人精品v| 69av精品久久久久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲成人久久爱视频| 日韩欧美精品v在线| 久久精品国产a三级三级三级| 中国三级夫妇交换| 久久久精品免费免费高清| 视频中文字幕在线观看| 色网站视频免费| 久久久久精品性色| 哪个播放器可以免费观看大片| 高清在线视频一区二区三区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲av免费在线观看| 人人妻人人看人人澡| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美激情久久久久久爽电影| 免费观看的影片在线观看| 亚洲精品视频女| 亚洲国产成人一精品久久久| 大码成人一级视频| 高清视频免费观看一区二区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 成人毛片60女人毛片免费| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品av视频在线免费观看| tube8黄色片| 日韩强制内射视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 男人狂女人下面高潮的视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 精品熟女少妇av免费看| 国产在视频线精品| 永久网站在线| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产老妇女一区| 五月天丁香电影| 黄片无遮挡物在线观看| 国产综合懂色| 综合色av麻豆| 成年版毛片免费区| 乱系列少妇在线播放| 欧美日韩精品成人综合77777| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久久精品欧美日韩精品| 波野结衣二区三区在线| 97精品久久久久久久久久精品| 最新中文字幕久久久久| 亚洲三级黄色毛片| 天美传媒精品一区二区| 国产成人精品久久久久久| 欧美丝袜亚洲另类| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲在线观看片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 99视频精品全部免费 在线| 少妇熟女欧美另类| 亚洲美女视频黄频| 赤兔流量卡办理| 久久6这里有精品| 天堂中文最新版在线下载 | 在线观看av片永久免费下载| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 五月玫瑰六月丁香| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 亚洲国产欧美在线一区| 一个人看视频在线观看www免费| 免费观看的影片在线观看| av播播在线观看一区| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久影院123| 老司机影院毛片| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 精品久久国产蜜桃| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 熟女人妻精品中文字幕| 久久精品国产自在天天线| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久久久久久精品精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 啦啦啦啦在线视频资源| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产毛片在线视频| 国产精品熟女久久久久浪| 哪个播放器可以免费观看大片| 成人综合一区亚洲| 国产成人免费无遮挡视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久久久久久国产电影| 一级毛片电影观看| 欧美日韩综合久久久久久| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲av男天堂| 亚洲,欧美,日韩| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美bdsm另类| 少妇的逼水好多| 精品久久久精品久久久| 国产真实伦视频高清在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 超碰av人人做人人爽久久| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品伦人一区二区| 九色成人免费人妻av| 成人亚洲精品一区在线观看 | 亚洲人成网站在线播| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产黄片美女视频| 国产乱来视频区| 99久久中文字幕三级久久日本| 麻豆成人av视频| 毛片女人毛片| 久久精品国产自在天天线| 国产在线男女| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久国产乱子免费精品| av专区在线播放| 毛片一级片免费看久久久久| 国产精品国产三级专区第一集| 真实男女啪啪啪动态图| 久久97久久精品| 亚洲精品视频女| 丝袜喷水一区| 亚洲,一卡二卡三卡| 久久久久久九九精品二区国产| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美丝袜亚洲另类| 国产男人的电影天堂91| 黄色配什么色好看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 99久久中文字幕三级久久日本| 不卡视频在线观看欧美| 日韩 亚洲 欧美在线| 我的女老师完整版在线观看| 特级一级黄色大片| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产精品人妻久久久久久| 日本欧美国产在线视频| 少妇人妻 视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 免费观看av网站的网址| 亚洲精品456在线播放app| 97在线视频观看| 欧美三级亚洲精品| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲最大成人av| 1000部很黄的大片| 丝瓜视频免费看黄片| 少妇裸体淫交视频免费看高清|