布魯氏菌病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

王勤

摘要：對實(shí)驗(yàn)室常用的幾種布魯氏菌病檢測方法進(jìn)行了分析，為實(shí)驗(yàn)室檢測不同動物群體選擇相應(yīng)的診斷方法提供參考。

關(guān)鍵詞：實(shí)驗(yàn)室；布魯氏菌病；檢測方法

中圖分類號：S858 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1007-273X（2018）04-0025-01

布魯氏菌?。ê喎Q布?。┦且环N危害性極大的傳染性人獸共患病，在世界范圍內(nèi)廣泛流行。其主要臨床癥狀為雌性動物流產(chǎn)、生育力下降，雄性動物睪丸炎，甚至不育，給畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的損失。

1 病原學(xué)方法

從疑似感染布病的個體中提取血液或其他樣本，對樣本處理后在選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，如有菌落生長則通過細(xì)菌染色、生化試驗(yàn)等方法鑒別是否為布魯氏菌，該方法準(zhǔn)確性高，但危險性高、操作難度大、分離時間長，對試驗(yàn)環(huán)境要求嚴(yán)格，需在特定試驗(yàn)條件下進(jìn)行。

2 PCR技術(shù)

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展和普及，可通過 PCR、熒光定量PCR以及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）等技術(shù)對布病進(jìn)行診斷。其中PCR技術(shù)具有特異性高、靈敏度好、操作較簡單等優(yōu)點(diǎn)，可用于鑒別不同種屬的布魯氏菌。熒光定量PCR 技術(shù)相較于傳統(tǒng) PCR 技術(shù)具有靈敏度高、高通量和方便快捷等優(yōu)勢，但由于其引物和探針設(shè)計(jì)較為困難，且限制較多，對專業(yè)技術(shù)有較高要求。LAMP可用于對奶、組織等樣本的檢測，具有操作方便、可視性強(qiáng)、特異性高和試驗(yàn)條件要求低等優(yōu)點(diǎn)，其靈敏性可達(dá)10 pg/反應(yīng)，且可以在普通水浴下完成反應(yīng)，適于基層檢測使用。但是LAMP存在多重?cái)U(kuò)增較為困難，樣本污染等問題，且對引物設(shè)計(jì)要求很高限制了該技術(shù)的進(jìn)一步使用。

3 血清學(xué)檢測方法

3.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）

BRPT是在平板上將30 μL抗原與30 μL血清樣品混合，4 min內(nèi)觀察是否出現(xiàn)凝集來判定陰陽性，該法使用方便、結(jié)果判定簡單、價格低廉，適用于各種家畜布病的田間篩選，在國際上廣泛應(yīng)用，但是特異性較差，易出現(xiàn)假陽性。

3.2 試管凝集試驗(yàn)（SAT）

SAT定量是所有試驗(yàn)中最準(zhǔn)確的，所以一直作為確診試驗(yàn)使用，曾經(jīng)在國際上得到了廣泛應(yīng)用。近年，由于快速凝集試驗(yàn)和ELISA等檢測技術(shù)的發(fā)展，對比研究發(fā)現(xiàn)SAT的敏感性和特異性比其他常用方法低。在發(fā)達(dá)國家，布病的血清學(xué)檢測方法基本已淘汰了SAT，在國際貿(mào)易中也未將布病SAT列入。

3.3 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）

CFT是公認(rèn)的特異性和敏感性較高的血清學(xué)檢測方法，適用于各種家畜布病的檢測，至今在國際貿(mào)易中仍是重要的診斷方法。CFT在試驗(yàn)過程中需要對溶血素、補(bǔ)體、抗原等多個組分進(jìn)行標(biāo)定，操作十分繁瑣，需經(jīng)驗(yàn)豐富的人員進(jìn)行組分準(zhǔn)確滴定、試劑保存和結(jié)果判斷等，因此該法在實(shí)際檢測過程中難以得到推廣，僅在相關(guān)科研機(jī)構(gòu)和稀有動物檢疫確診中使用。

3.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA 技術(shù)具有成熟穩(wěn)定、方便快捷、特異性敏感性高、高通量等優(yōu)點(diǎn)且其對相關(guān)試驗(yàn)人員要求較低，適合臨床樣本的快速檢測。目前有iELISA 與cELISA兩種方法用于布病診斷，其中iELISA具有高度敏感性，但不能用于檢測自然病原株誘導(dǎo)產(chǎn)生的布病抗體，因此僅用作對免疫接種過的牛進(jìn)行篩選，并非確認(rèn)；cELISA 具有比iELISA更高的特異性，可用于排除牛布魯氏菌接種產(chǎn)生的抗體反應(yīng)。

3.5 熒光偏振試驗(yàn)（FPA）

FPA是一種定量免疫分析技術(shù)，已經(jīng)用于北美和歐洲的布病根除計(jì)劃，是OIE 規(guī)定的國際貿(mào)易指定方法，其原理和ELISA相似，但操作簡便，用時更短。大量的研究結(jié)果表明，在布病的抗體檢測方法中，熒光偏振的特異性和敏感性比較高。但是，該方法試劑盒昂貴，且需要在專門儀器內(nèi)使用，限制了該方法的推廣。

3.6 膠體金試驗(yàn)

國內(nèi)學(xué)者初步建立了檢測布病抗體的膠體金方法，其敏感性和特異性均達(dá)到了90%以上。膠體金試驗(yàn)具有方便快捷、敏感性高、結(jié)果易判定等優(yōu)勢，適合臨床快速診斷的需要。但是，現(xiàn)有商品化膠體金試紙條標(biāo)準(zhǔn)參差不齊，符合率和敏感性較差，仍需要進(jìn)一步發(fā)展。

4 細(xì)胞免疫學(xué)檢測方法

目前細(xì)胞免疫學(xué)檢測布病的方法較少報道，原因大致如下：一是細(xì)胞免疫狀態(tài)受多種因素影響，難以找到合適的特異性指標(biāo)進(jìn)行衡量；二是易感動物個體差異較大，容易引起誤差；三是細(xì)胞免疫檢測方法成本更高，操作更復(fù)雜；四是相關(guān)研究仍不成熟，且難度較大。

5 小結(jié)

布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的具有傳染性的人畜共患病，OIE將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。診斷布病的方法有多種，但并非每種方法都適用于所有流行病學(xué)情況，因此，需根據(jù)診斷方法的適應(yīng)性及其優(yōu)缺點(diǎn)，針對不同的動物群體選擇相應(yīng)的診斷方法進(jìn)行檢測。