蠐螬提取物不同途徑給藥對激光誘導鼠眼CNV模型的影響＊

譚涵宇，李建超,2＊＊，彭 俊，文小娟，周亞莎，彭清華＊＊

（1.湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)眼科學重點學科 長沙 410208；2.西安市中醫(yī)醫(yī)院眼科 西安 710001）

年齡相關性黃斑變性（age-related macular degen?eration，AMD），是一種與年齡相關的發(fā)生在黃斑區(qū)視網(wǎng)膜組織退行性病變，隨著年齡的增加逐漸加重，而濕性AMD則是以黃斑部CNV形成為主要病理特征的一種黃斑病變。脈絡膜新生血管（choroidal neovascular?ization，CNV）是包括濕性AMD在內(nèi)的多種眼底疾病引起的發(fā)生在黃斑部脈絡膜的新生血管，可導致反復的出血、滲出以及黃斑水腫，嚴重危害患者的視力。本研究擬在前期研究的基礎上，通過口服、滴眼不同給藥途徑給藥，觀察蠐螬提取物對激光誘導CNV鼠眼模型的干預作用。

1 材料

1.1 實驗動物

成年BN大鼠（Brown Norway，BN）大鼠32只，雄性，體重180-200 g，實驗前排除全身性及眼部疾患，湖南中醫(yī)藥大學實驗動物中心清潔級條件下飼養(yǎng)，許可證號：SYXK（湘）2013-0005。動物由北京微通利華實驗動物有限公司提供，單位許可證號：SCXK（京）2012-0001，動物來源證號：NO.11400700096597。

1.2 實驗藥品

蠐螬提取物：由湖南中醫(yī)藥大學藥學院提供，分別按藥物制劑工藝制成口服、滴眼劑[1]。

1.3 實驗試劑

ANG1一抗兔源性抗體：北京博奧森生物技術有限公司，批號：Bs-0800R，規(guī)格0.1 mL。VEGF一抗兔源性抗體：武漢博士德生物工程有限公司，批號：BA0407，規(guī)格0.1 mL。HTRA1一抗兔源性抗體：北京博奧森生物技術有限公司，批號：Bs-20063R，規(guī)格0.2 mL。PV9000通用型免疫組化染色試劑盒：北京中杉金橋生物技術有限公司，批號：WK151825、K156617J，規(guī)格6 mL。DAB濃縮型顯色試劑盒：北京中杉金橋生物技術有限公司，批號：K157716A，規(guī)格3 mL。

1.4 主要設備及器材

眼底照相機（日本佳能公司生產(chǎn)）,萊特眼底激光治療儀（法國Quantel公司生產(chǎn)）,海德堡眼底熒光造影（FFA）儀（德國Heidelberg公司生產(chǎn)）,海德堡光學相干斷層掃描儀（德國Heidelberg公司生產(chǎn)）

2 方法

2.1 分組及給藥

選用8W齡BN大鼠32只，雄性。隨機分成A、B、C、D四組，分別為：A組：健康空白組（8只）；B組：模型組（8只）；C組：口服組（8只）；D組：滴眼組（8只）。C組予以蠐螬提取物口服劑灌胃，1次/日，O.56 g/100 g/天，D組予以蠐螬提取物局部滴眼，4次/日，A、B、D組每日以生理鹽水2 mL灌胃，A、B、C各組同時予以玻璃酸鈉滴眼液滴眼，4次/日。在造模起分別開始給藥，連續(xù)2W，各組隨機抽取3只動物進行取材檢測，其余動物繼續(xù)給藥，直至實驗結束取材檢測。

2.2 視網(wǎng)膜激光損傷CNV模型的建立

參考楊秀梅，王雨生等提出的方法[2]，并加以改進。B、C、D組大鼠腹腔內(nèi)注射用0.3%戊巴比妥鈉，按每公斤注射45 mg麻醉，用0.5%托比卡胺+0.5%鹽酸去氧腎上腺素點眼散瞳。在裂隙燈下，通過前置鏡鏡用532 nm倍頻Nd：YAG激光(光斑直徑75 Irm，曝光時間100 ms，能量180 mW)，距視盤約1-1.5PD，在視乳頭周圍擊射視網(wǎng)膜，每眼擊射8-10個點，避免直接擊射視網(wǎng)膜血管。光凝后以有小氣泡產(chǎn)生為準，可伴輕響或少量出血，表示已經(jīng)擊破Bruch’S膜。

2.3 眼底彩色照相、眼底血管造影（FFA）及OCT檢查

每只大鼠每只眼激光術前及激光造模術后7、14、21、28d行眼底鏡檢查、眼底彩色照相、眼底血管造影（FFA）及OCT檢查。

2.3.1 眼底彩色照相及熒光素眼底血管造影(FFA)檢查

將大鼠麻醉后擴瞳行眼底照相，之后將20%熒光素鈉用注射用水稀釋成2%熒光素鈉，經(jīng)腹腔注射0.3 mL，海德堡眼底熒光血管造影（FFA）儀記錄造影過程。CNV的形成率根據(jù)FFA熒光滲漏強度積分來判斷。

熒光素滲漏強度判定參考Takehana分級標準[3]，即0級：無熒光滲漏；1級：輕度熒光滲漏；2級：中度熒光滲漏；3級：強熒光滲漏。

熒光滲漏強度積分計算：每個激光斑總積分設為3分，0級計0分；1級計1分；2級計2分；3級計3分。

2.3.2 光學相干斷層掃描術（OCT）檢查

將大鼠腹腔注射麻醉后，擴瞳行OCT檢查，掃描線長度為4 mm，取水平、垂直方向進行掃描，所測圖像進行排列、儲存。

2.4 取材

實驗完畢需要取材的動物6 h后待其體內(nèi)熒光染料大部分被排出后，麻醉大鼠，立即摘取眼球，12點方位縫線標記，沿角鞏膜緣于睫狀體扁平部做一小切口，浸泡在4%的多聚甲醛中固定6 h，常規(guī)脫水，行全層石蠟包埋，切片。

2.5 視網(wǎng)膜各組織細胞層Ang1、VEGF、HTRA1的檢測

促血管生成素1（Ang1）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、絲氨酸蛋白酶（HTRA1）免疫組化檢測：采用PV法：是將二抗抗體分子的單價Fab段與酶聚合在一起，與一抗結合后，直接用底物進行顯色的方法。

在10×10低倍視野下進行全面觀察，尋找視網(wǎng)膜內(nèi)Ang1、VEGF、HTRA1陽性物質(zhì)最豐富區(qū)域(即“熱點”區(qū)，染色顏色最深/或染色面積最多)，然后在10×40中倍視野下選擇5個熱點區(qū)，采用圖形分析系統(tǒng)定量測量各個指標陽性積分光密度，以此表示它們的含量。

2.6 統(tǒng)計方法

圖1 激光光凝術后各組眼底彩色照相組圖

3 結果

3.1 眼底彩色照相

激光光凝造模術后各組BN大鼠，于激光光凝術后、1W、2W、3W、4W在全麻下分別行眼底彩色照相。結果如下圖1。

如圖1所示，各組激光光凝術后，BN大鼠眼底彩色照相可見圍繞視乳頭周圍約1-1.5D可見8-10個灰白色激光斑，邊界清晰可見。于激光光凝術后1W，可見各組激光斑彌散，邊界不清，部分相互融合。術后2W，各組激光斑色澤變淡，部分激光斑消失，部分激光斑出現(xiàn)色素脫失紊亂。術后3W，各組激光斑色澤進一步變淡，部分激光斑消失，部分激光斑色素脫失紊亂，滴眼組明顯可見疤痕形成。術后4W，模型組進一步色素脫失紊亂，口服組及滴眼組均可見色素脫失合并瘢痕形成。

3.2 眼底視網(wǎng)膜血管熒光造影（FFA）情況

激光光凝造模術后各組BN大鼠，于術后、1W、2W、3W、4W在全麻下分別行眼底視網(wǎng)膜血管熒光造影檢查，拍照，觀察并記錄熒光滲漏情況。具體如下圖2：

圖2 激光光凝術后各組眼底視網(wǎng)膜血管熒光造影結果組圖

如圖10所見，A1-A4為空白組眼底視網(wǎng)膜血管熒光造影圖像，A1示造影早期，部分視網(wǎng)膜靜脈仍處于層流期；A2為造影中期，視網(wǎng)膜動靜脈高熒光充盈，亦可見脈絡膜背景熒光；A3為造影中晚期；A4為造影晚期，視網(wǎng)膜動脈血管熒光開始衰退，脈絡膜背景熒光亦減退。B1-B4為模型組激光光凝術后眼底視網(wǎng)膜血管熒光造影圖像；B1為激光光凝術后1W，可見較多熒光滲漏點；B2為激光光凝術后2W，可見眾多熒光滲漏點呈現(xiàn)強熒光，邊界不清；B3為激光光凝術后3W，可見部分熒光滲漏點消退，滲漏較前減退；B4為激光光凝術后4W，可見部分滲漏點消失，出現(xiàn)色素沉著，呈遮蔽性低熒光。C1-C4為口服組激光光凝術后眼底視網(wǎng)膜血管熒光造影圖像；C1為激光光凝術后1W，可見熒光滲漏點，滲漏明顯；C2為激光光凝術后2W，可見熒光滲漏點，滲漏范圍較前減少，滲漏減輕；C3為激光光凝術后3W，可見部分熒光滲漏點消退，滲漏局限；C4為激光光凝術后4W，可見原滲漏點出現(xiàn)熒光著染，呈高熒光。D1-D4為滴眼組激光光凝術后眼底視網(wǎng)膜血管熒光造影圖像；D1為激光光凝術后1W，可見呈斑駁樣熒光滲漏點，有激光斑周圍低熒光環(huán)出現(xiàn)；D2為激光光凝術后2W，可見眾多熒光滲漏點較前明顯減少，滲漏減輕，出現(xiàn)疑似新生血管網(wǎng)，如箭頭所示；D3為激光光凝術后3W，可見原熒光滲漏點呈現(xiàn)熒光著染；D4為激光光凝術后4W，可見原疑似新生血管部位并未出現(xiàn)明顯熒光滲漏，可見側支循環(huán)建立，背景熒光均勻。

表1 各組造模后不同時期CNV形成率（%）

圖3 激光光凝術后各組眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描結果組圖

3.3 蠐螬提取物對CNV的形成率的影響

分別于造模后1W、2W、3W、4W對各組造模大鼠行FFA檢查，記錄各大鼠模型眼熒光滲漏點數(shù)及滲漏強度情況，并根據(jù)各自積分計算CNV的形成率，可以通過FFA檢查時熒光滲漏強度和面積來判斷，熒光滲漏越強，面積越大，也就表示CNV的形成越多。如下表1：

3.4 視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描（OCT）情況

激光光凝造模術后各組BN大鼠，于術后、1W、2W、3W、4W在全麻下分別行眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描檢查，觀察并拍照記錄。具體如下圖3。

模型眼眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描儀拍攝的眼底掃描圖像，激光斑清晰可見；B1-B4模型組激光光凝術后1-4W后眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描圖像；C1-C4分別為口服組激光光凝術后1-4W后眼底視視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描圖像；D1-D4分別為滴眼組激光光凝術后1-4W后眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描圖像。

如圖3所見，A1為空白組正常BN大鼠眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描圖像，A1示視網(wǎng)膜各層結構整齊，清晰可見；A2為BN大鼠激光模型眼眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描儀拍攝的眼底掃描圖像，激光斑清晰可見。B1-B4為模型組激光光凝術后眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描圖像；B1為激光光凝術后1W，可見外核層、外界膜、光感受器細胞層水腫明顯，界限不清；B2為激光光凝術后2W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體增厚，光感受器層斷裂，高反射信號經(jīng)內(nèi)核層向前膨出，突破外叢狀層，達內(nèi)核層；B3為激光光凝術后3W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體下增厚明顯，光感受器層斷裂，高反射信號突破外界膜，外核層變薄，亦可見高反射信號，與外叢狀層相連，內(nèi)核層變厚；B4為激光光凝術后4W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體下明顯增厚的不規(guī)則高反射信號向前突破視網(wǎng)膜各層，視網(wǎng)膜各層結構紊亂。C1-C4為口服組激光光凝術后眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描圖像；C1為激光光凝術后1W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體、光感受器外節(jié)、內(nèi)外核層、內(nèi)外叢狀層、神經(jīng)纖維層各層水腫明顯，界限欠清；C2為激光光凝術后2W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體高信號，明顯增厚、外叢狀層、內(nèi)顆粒層增厚；C3為激光光凝術后3W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體高信號明顯增厚，內(nèi)顆粒層內(nèi)出現(xiàn)高反射信號與外叢狀層相連；C4為激光光凝術后4W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體高信號，略微增厚，內(nèi)界膜可見，內(nèi)顆粒層變薄，外叢狀層、內(nèi)顆粒層增厚。D1-D4為滴眼組激光光凝術后眼底視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描圖像；D1為激光光凝術后1W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體、光感受器外節(jié)、內(nèi)外核層、內(nèi)外叢狀層、神經(jīng)纖維層各層水腫明顯，界限欠清；D2為激光光凝術后2W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體高信號，明顯略增厚、外叢狀層略增厚；D3為激光光凝術后3W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體高信號，視網(wǎng)膜各層結構清晰可辨；D4為激光光凝術后4W，可見視網(wǎng)膜色素上皮/Bruch膜復合體無明顯增厚，內(nèi)顆粒層內(nèi)出現(xiàn)少許高反射信號，視網(wǎng)膜各層結構清晰。

圖4 2W時視網(wǎng)膜組織中Ang1的表達

圖5 4W時視網(wǎng)膜組織中Ang1的表達

3.5 BN大鼠視網(wǎng)膜組織免疫組化檢測結果

3.5.1 蠐螬提取物對視網(wǎng)膜組織Ang1表達的影響

如圖4,5：2W時，正常組視網(wǎng)膜各層細胞漿中Ang1陽性物質(zhì)表達較少，呈淺黃色，視網(wǎng)膜各層組織細胞結構清晰，排列整齊。模型組內(nèi)界膜、神經(jīng)纖維層、內(nèi)外叢狀層、內(nèi)顆粒層以及光感受器內(nèi)節(jié)細胞漿中Ang1陽性物質(zhì)表達明顯增多，呈棕褐色?？诜M和滴眼組各層細胞漿中Ang1陽性物質(zhì)表達程度明顯較模型組減少，呈棕黃色。4W時，四組視網(wǎng)膜各層細胞漿中Ang1陽性物質(zhì)表達程度相似，其中空白組、口服組、滴眼組與2W時表達程度亦相似，呈淺黃色，視網(wǎng)膜各層組織細胞結構清晰，排列整齊，模型組各層細胞漿中Ang1陽性物質(zhì)表達程度較2W時明顯減少，呈棕黃色。

圖6 2W時視網(wǎng)膜組織中HTRA1的表達

圖7 4W時視網(wǎng)膜組織中HTRA1的表達

3.5.2 蠐螬提取物對視網(wǎng)膜組織HTRA1表達的影響

如圖6,7：2W時，四組視網(wǎng)膜各層細胞漿中HTRA1陽性物質(zhì)表達程度相似，且都較弱，呈棕褐色。4W時，正常組、口服組和滴眼組視網(wǎng)膜各層細胞漿中HTRA1陽性物質(zhì)表達較少，呈棕褐色，視網(wǎng)膜各層組織細胞結構清晰，排列整齊。模型組內(nèi)界膜、神經(jīng)纖維層、內(nèi)外叢狀層、內(nèi)顆粒層以及光感受器內(nèi)節(jié)細胞漿中以及玻璃體腔HTRA1陽性物質(zhì)表達呈強陽性，且較2W時明顯增強，呈棕褐色，玻璃體腔亦可見強陽性表達。

3.5.3 蠐螬提取物對視網(wǎng)膜組織VEGF表達的影響

圖8 2W時視網(wǎng)膜組織中VEGF的表達

圖9 4W時視網(wǎng)膜組織中VEGF的表達

如圖8,9：2W時，正常組、口服組和滴眼組視網(wǎng)膜各層細胞漿中VEGF陽性物質(zhì)表達較少，呈棕褐色，視網(wǎng)膜各層組織細胞結構清晰，排列整齊。模型組內(nèi)界膜、神經(jīng)纖維層、內(nèi)外叢狀層、內(nèi)顆粒層以及光感受器內(nèi)節(jié)細胞漿細胞核中均有VEGF陽性物質(zhì)高表達，呈強陽性。4W時，正常組、口服組和滴眼組視網(wǎng)膜各層細胞漿中VEGF陽性物質(zhì)表達基本同2W時，呈棕褐色，視網(wǎng)膜各層組織細胞結構清晰，排列整齊。模型組內(nèi)界膜、神經(jīng)纖維層、內(nèi)外叢狀層、內(nèi)顆粒層以及光感受器內(nèi)節(jié)細胞漿細胞核中均有VEGF陽性物質(zhì)表達呈強陽性，呈棕褐色，與2W時相比，仍維持高表達。

3.5.4 視網(wǎng)膜各細胞層Ang1、HTRA1、VEGF的光密度值檢測結果

2W時，視網(wǎng)膜組織中Ang1、HTRA1、VEGF表達均增強，經(jīng)蠐螬提取物口服和滴眼后，高表達有所減弱（如下表2）；4W時Ang1表達回歸正常水平、HTRA1、VEGF仍維持高表達，經(jīng)蠐螬提取物口服和滴眼后，Ang1表達無影響，HTRA1、VEGF高表達有所減弱（如下表3）

表2 2W時視網(wǎng)膜各細胞層Ang1、HTRA1、VEGF的光密度值比較(±s)

表2 2W時視網(wǎng)膜各細胞層Ang1、HTRA1、VEGF的光密度值比較(±s)

注：＊表示與空白組比較：＊表示P＞0.05,＊＊表示P＜0.05,＊＊＊表示P＜0.01；△表示與模型組比較：△表示P＞0.05,△△表示P＜0.05,△△△表示P＜0.01；▲表示與口服組比較：▲表示P＞0.05,▲▲表示P＜0.05,▲▲▲表示P＜0.01；

表3 4W時視網(wǎng)膜各細胞層Ang1、HTRA1、VEGF的光密度值比較(±s)

表3 4W時視網(wǎng)膜各細胞層Ang1、HTRA1、VEGF的光密度值比較(±s)

注：＊表示與空白組比較：＊表示P＞0.05,＊＊表示P＜0.05,＊＊＊表示P＜0.01；△表示與模型組比較：△表示P＞0.05,△△表示P＜0.05,△△△表示P＜0.01；▲表示與口服組比較：▲表示P＞0.05,▲▲表示P＜0.05,▲▲▲表示P＜0.01；

具體如下不同時間各組間Ang1、HTRA1、VEGF光密度值檢測的示意圖所示：（圖10）

4 討論

本課題組前期研究證實：蠐螬提取物對大鼠視網(wǎng)膜的光損傷具有保護作用，蠐螬可以促進HSP79的高表達對視網(wǎng)膜視神經(jīng)細胞得到有效保護，可減輕組織損傷[3,4]，能夠增強視網(wǎng)膜組織中bFGF的表達、抑制GFAP的表達，促進光凝后的視網(wǎng)膜修復[5]，能促進實驗性有色兔脈絡膜新生血管(CNV)中血管生成素1(An?gl)的高表達，減少色素上皮衍生因子(PEDF)的表達，也可以抑制有色家兔脈絡膜新生血管(CNV)中的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)表達，從而可以抑制實驗性脈絡膜新生血管(CNV)的形成[6,7]。

4.1 蠐螬提取物對激光損傷誘導CNV活體模型眼底情況及新生血管生成的影響

圖10 組間Ang1、HTRA1、VEGF光密度值檢測的箱圖

本實驗成功應用激光誘導造成濕性AMD的CNV模型，并用蠐螬提取液對其進行干預治療，通過本實驗發(fā)現(xiàn)：蠐螬提取液能有效減輕眼底視網(wǎng)膜血管熒光滲漏，促進瘢痕形成，穩(wěn)定視網(wǎng)膜各層正常的結構及功能，減少激光對視網(wǎng)膜外屏障的損傷，減少新生血管形成，促進眼底視網(wǎng)膜血管在激光損傷后建立有效的側支循環(huán)，進而改善視網(wǎng)膜血液供應及正常的功能。通過對新生血管形成率的統(tǒng)計分析亦證實，蠐螬提取液能有效減少新生血管的生成及病變的嚴重程度（P＜0.05）。

4.2 蠐螬提取物對激光損傷誘導CNV活體模型Ang1、HTRA1、VEGF表達的影響

促血管生成素1及其受體Tie2是近年來發(fā)現(xiàn)的一種除血管內(nèi)皮生長因子之外的一條新的血管生成信號轉(zhuǎn)導通路，這條新的信號通路在人類生理性血管形成中發(fā)揮重要作用，Ang1/Tie2信號通路在腫瘤、創(chuàng)傷、炎癥等多種病變中也起一定作用。Angl和受體結合后活化Tie2,Tie2活化的內(nèi)皮細胞可吸引血管平滑肌細胞、周細胞等包圍、支持內(nèi)皮細胞形成完整的血管壁，從而促進血管生成[8]。雷潤佳[9]通過激光誘導小鼠CNV模型，CNV在光凝后14d達到高峰。存在Ang1與HIF-1共表達區(qū)域，提示在CNV生成中可能起重要作用；在此基礎上，體外實驗結果提示缺氧條件下人RPE細胞表達Ang1上調(diào)，與HIF-1α存在時相關系，Ang2無明顯變化；抑制HIF-1α后，Ang1表達隨之降低。

血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是內(nèi)皮細胞異性促有絲分裂原，通過特異性受體介導作用于血管內(nèi)皮細胞，對血管內(nèi)皮細胞發(fā)揮促分化和趨化作用，并促進內(nèi)皮細胞增殖和遷移，同時增加血管通透性，以利于新生血管和基質(zhì)細胞生長。血管內(nèi)皮生長因子在促進血管新生、維持血管形態(tài)及完整性具有重要意義。正常情況下，視網(wǎng)膜的周細胞、視網(wǎng)膜色素上皮細胞和內(nèi)皮細胞均可產(chǎn)生較低水平VEGF。眾多研究表明VEGF的高表達與脈絡膜新生血管形成有密切關聯(lián)，是導致脈絡膜新生血管形成的主要因素之一?？筕EGF藥物可減輕VEGF升高導致的血管通透性增加，減輕組織水腫，同時也可減輕炎性反應，減少新生血管的生成。因此VEGF被認為是治療脈絡膜與視網(wǎng)膜新生血管最重要的靶點。目前，已有多種抗新生血管藥物應用于臨床，如貝伐單抗、雷珠單抗、康柏西普、呱加他尼鈉及VEGF誘餌受體等，并已取得可觀的臨床效果[10]。

HTRAl是第一個被發(fā)現(xiàn)的人HtrA絲氨酸蛋白酶家族成員，是一種分泌蛋白，與細胞外基質(zhì)的降解作用有關。HTRA1基因啟動因子區(qū)域的多態(tài)性與濕性年齡相關性黃斑病變（AMD)具有顯著的關聯(lián)性[11,12]。純合型LOC387715/HTRA1基因多態(tài)性使AMD的發(fā)病風險增加7.6倍[13]。在AMD患者的眼球切片免疫組織化學研究中發(fā)現(xiàn)，HTRA1在Bruch膜和內(nèi)界膜中均有表達，而在其他層次未見明顯表達，提示該蛋白可能參與了破壞Bruch膜完整性的反應過程。隨著HTRA1的過高表達，它可能在Bruch膜的結構重構以及進一步的脈絡膜新生血管形成或視網(wǎng)膜色素上皮細胞萎縮過程中發(fā)揮作用，并且rsl 1200638與AMD的兩種類型(地圖狀萎縮和脈絡膜新生血管性AMD)具有幾乎一致的顯著相關性。HTRA1基因與CNV密切相關，高水平的HTRAl蛋白表達影響了Bruch膜的完整性，利于CNV的生長[14]。Richardson AJ等[15]研究發(fā)現(xiàn)表明在HTRA1基因中tagSNP、rs3793917和SN Prs11200638之間的基因間區(qū)域是解釋與AMD顯著關聯(lián)的最可能位點。蔣晶晶[16]用攜帶人HTRAl基因的慢病毒感染體外培養(yǎng)的人RPE細胞，結果發(fā)現(xiàn)過表達HTRAI基因能抑制人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的增殖及遷移，推測THRAl基因可能通過影響RPE細胞功能參與AMD的進程。

本實驗結果表明：2W時，激光誘導濕性AMD模型眼視網(wǎng)膜組織中Ang1、VEGF高表達，而HTRA1則未見明顯高表達；4W時，激光誘導濕性AMD模型眼視網(wǎng)膜組織中HTRA1出現(xiàn)高表達、VEGF維持了高表達，而Ang1表達趨于正常。蠐螬提取物對激光誘導濕性AMD模型眼視網(wǎng)膜組織中不同時期Ang1、HTRA1、VEGF的高表達具有明顯抑制作用。進而表明蠐螬提取物對激光誘導的濕性AMD模型眼CNV形成的早期及晚期均有抑制作用。

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2 楊秀梅,王雨生,徐建峰,等.激光誘導有色大鼠脈絡膜新生血管的形態(tài)學觀察.眼科新進展,2006,27(3):161-166.

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