針灸對(duì)CIA大鼠的脾臟單個(gè)核細(xì)胞IL-17、IL-12表達(dá)的影響＊

黃 艷，馮 輝，劉世敏，丁邦友，竇傳字，程 玲

（1.上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所 上海 200030；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬光華醫(yī)院 上海 200052；3.上海中醫(yī)藥大學(xué) 上海 201203；4.同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院 上海 200120）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種慢性的關(guān)節(jié)炎癥性病變，屬全身性的自身免疫性疾病，位居自身免疫性結(jié)締組織病首位[1]，晚期可見(jiàn)關(guān)節(jié)活動(dòng)功能障礙，持續(xù)發(fā)展則出現(xiàn)關(guān)節(jié)僵硬和變形，甚至喪失勞動(dòng)力，繼而導(dǎo)致殘廢。我國(guó)患病率為0.32-0.36%，歐美約0.5-1%，女性患者發(fā)病的幾率是男性的3倍，醫(yī)療成本增加[1,2]。生物制劑、NSAIDs和DMARDs等藥物是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療RA的傳統(tǒng)治療方法，對(duì)于炎癥抑制有確切的療效，延緩骨破壞，但需要長(zhǎng)期使用，且價(jià)格昂貴。在應(yīng)用免疫抑制劑治療后，常發(fā)生正常免疫功能低下的情況，并可誘發(fā)感染[3,4]、腫瘤[5]、血液系統(tǒng)和肝功能損害[6,7]等不良反應(yīng)。祖國(guó)中醫(yī)藥在治療RA方面具有確切的優(yōu)勢(shì)，針灸治療疾病具有整體調(diào)節(jié)的特點(diǎn)，有些研究報(bào)道了針灸在免疫調(diào)節(jié)方面發(fā)揮的作用[8-11]，余曙光等在研究中發(fā)現(xiàn)電針能夠增加類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠外周血T淋巴細(xì)胞的凋亡率[12]。電針足三里對(duì)CIA大鼠可改善大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)，并發(fā)現(xiàn)電針可有效抑制CIA大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足跖腫脹度以及血清和炎癥局部組織中前列腺素E2（PGE2）含量，控制病情的進(jìn)一步發(fā)展[13]。針灸腧穴具有抗炎免疫作用[14]，其機(jī)理與灸療抑制TNF、IL-1等炎癥因子的釋放相關(guān)，可增強(qiáng)與改善機(jī)體的免疫功能[11,15]。艾灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠的效應(yīng)觀察及穴位應(yīng)用研究提示艾灸具有鎮(zhèn)痛作用[16,17]，還能明顯改善RA大鼠局部滑膜細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，對(duì)免疫器官如脾臟、胸腺等具有保護(hù)作用[18]。目前針灸改善CIA大鼠關(guān)節(jié)炎癥的機(jī)制尚未完全明確，脾臟是機(jī)體免疫-神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)中心的一個(gè)重要組成部分[19]，儲(chǔ)備了大量起免疫作用的單核細(xì)胞[20]，本研究將從脾臟單個(gè)核細(xì)胞的角度觀察針灸調(diào)節(jié)免疫炎癥因子的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

本實(shí)驗(yàn)選取雌性清潔級(jí)Wistar大鼠32只，體重200±20 g，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（滬）2012-0002，動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK（滬）2008-0050。本實(shí)驗(yàn)在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部SPF級(jí)動(dòng)物中心完成。飼養(yǎng)環(huán)境為12 h晝夜節(jié)律交替，室溫25±1℃，相對(duì)濕度50-70%，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 主要試劑及儀器：

牛Ⅱ型膠原蛋白（美國(guó)Chondrex公司）；完全弗式佐劑（CFA，美國(guó)sigma公司）；不完全弗式佐劑（IFA，美國(guó)sigma公司）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國(guó)Promega公司）；Trizol RNA提取試劑（美國(guó)Invitrogen公司）；特制細(xì)艾條（南陽(yáng)漢醫(yī)艾絨有限責(zé)任公司）；戊巴比妥鈉（上?；瘜W(xué)試劑廠）；高速低溫離心機(jī)（HITACHI公司）；實(shí)時(shí)定量PCR儀（美國(guó)PERKIN·EIMER公司）；-80℃超低溫冰箱（美國(guó)REVCO公司）。

1.3.1 適應(yīng)癥 ①治療：曲霉菌、念珠菌（包括氟康唑耐藥株）等引起的侵襲性真菌病以及宿主因素和GM/G試驗(yàn)陽(yáng)性驅(qū)動(dòng)的診斷治療[3-5]；②預(yù)防：造血干細(xì)胞移植患者、粒缺持續(xù)>10d或化療的血液惡性腫瘤患者、使用免疫抑制劑的器官移植患者、高危HIV感染患者以及腹膜炎患者預(yù)防真菌感染[3-5，8，9]。

1.3 CIA大鼠模型的建立：

采用免疫學(xué)方法制備膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎模型大鼠。配制濃度為4 mg·ml-1膠原溶液，存放于4℃冰箱中并避光攪拌過(guò)夜。將4 mg·ml-1膠原溶液與CFA等體積乳化，初次免疫使用濃度為2 mg·ml-1的膠原，注射0.12 ml膠原乳劑（含膠原240 μg）于每只大鼠尾根部皮下；將4 mg·ml-1膠原溶液與IFA等體積乳化，使膠原濃度達(dá)到2 mg·ml-1，于初次免疫后第7天進(jìn)行激發(fā)免疫，在大鼠臀背部?jī)蓚?cè)各皮下注射0.03 ml膠原乳劑（共含膠原120 μg）[21]。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組和治療：

治療4周后對(duì)CIA大鼠進(jìn)行關(guān)節(jié)炎癥評(píng)分，組間兩兩比較顯示，艾灸組和針刺組大鼠關(guān)節(jié)炎癥評(píng)分明顯低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P艾灸組=0.000，P針刺組=0.001）。艾灸組CIA大鼠關(guān)節(jié)炎癥評(píng)分（5.63±1.99）與針刺組（6.25±2.18）兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.156）（見(jiàn)表2）。

根據(jù)熱傳導(dǎo)傅立葉定律，單位時(shí)間內(nèi)通過(guò)定截面的熱量，正比例于垂直于該截面方向上的溫度變化率和截面面積，而熱量傳遞的方向則與溫度升高的方向相反。較厚部位對(duì)電弧加熱部位的冷卻作用最強(qiáng)，接頭溫度下降速度最快，其次是薄壁部位，而細(xì)桿的散熱速度最慢。

采用Trizol法提取總RNA，各取出1 μl總RNA用于測(cè)濃度和純度，每個(gè)樣本取2 μg總RNA用于逆轉(zhuǎn)錄cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)公式2-ΔΔCT計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量，用2-ΔΔCT將單個(gè)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化成線性形式來(lái)說(shuō)明重復(fù)樣本之間的變化和差異。

1.5 MTT比色法：

脾細(xì)胞懸液制備：無(wú)菌取脾分成2半，將一半脾臟放置200目不銹鋼網(wǎng)上，置于盛有適量無(wú)菌Hanks液的小平皿中，用注射器針芯輕輕研壓撕碎的脾臟，制成單細(xì)胞懸液稀釋后在細(xì)胞計(jì)數(shù)板上進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并用臺(tái)盼蘭染色（0.1 ml 0.6%臺(tái)盼蘭+0.1 ml1.7%Nacl液+0.2 ml細(xì)胞懸液，混勻），計(jì)算細(xì)胞存活率，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105/ml。淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)：將5×105/ml脾細(xì)胞懸液加入到96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)48-72 h，在培養(yǎng)結(jié)束前4-6 h，于培養(yǎng)板各孔內(nèi)加入5 mg·ml-1MTT液，10 μl/孔。37℃培養(yǎng)4-6 h。1 000 rpm離心10分鐘后棄上清，各孔內(nèi)加入150 μl DMSO，溶解10 min，30 min內(nèi)用酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)OD值，測(cè)定波長(zhǎng)570 nm。取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組三個(gè)復(fù)孔的OD平均值并計(jì)算。

1.6 實(shí)時(shí)定量PCR：

治療方法：艾灸組：于初次免疫后第12天，選取雙側(cè)陽(yáng)陵泉、昆侖穴（穴位定位參照林文注《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)確定），采用特制專用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)細(xì)艾條，點(diǎn)燃后在穴位上方約2 cm處進(jìn)行治療（以大鼠出現(xiàn)躁動(dòng)或前爪臉動(dòng)作來(lái)調(diào)整高度），每次每穴溫和灸20 min，每天1次，共28天。針刺組：自初次免疫后第12天，采用漢醫(yī)牌一次性針灸針（規(guī)格0.30×40 mm）針刺雙側(cè)陽(yáng)陵泉、昆侖穴，留針20 min/次，每天1次，共28天。模型組和正常組均只做與各干預(yù)組相同的抓取與固定。以上固定及干預(yù)均在上午9-11點(diǎn)期間完成。昆侖穴（BL60）定位：大鼠后肢外踝與跟腱之間的凹陷中；陽(yáng)陵泉穴（GB34）定位：大鼠后肢腓骨頭下方凹陷中，后三里穴上外側(cè)5 mm。

經(jīng)過(guò)實(shí)地走訪發(fā)現(xiàn)，農(nóng)村的商業(yè)銀行在小額信貸的發(fā)放方面，并未達(dá)到預(yù)期的目標(biāo)，主要由于年利率高出了農(nóng)戶的預(yù)期值。同時(shí)，受產(chǎn)業(yè)投資回報(bào)率的限制,農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)的平均回報(bào)率不高，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)收益也有很大不確定性，銀行對(duì)農(nóng)戶及農(nóng)業(yè)制定的貸款利率普遍偏高，這種高利率提高了農(nóng)戶的生產(chǎn)融資成本，加劇了農(nóng)戶融資難的現(xiàn)狀[3]，影響了農(nóng)民的貸款積極性，不利于鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略的實(shí)施。

1.7 脾臟單個(gè)核細(xì)胞提?。?/h3>

再次就是加強(qiáng)社團(tuán)干部服務(wù)意識(shí)的培養(yǎng)。在社團(tuán)干部的培養(yǎng)過(guò)程中，要淡化他們的功力心，讓他們意識(shí)到，社團(tuán)干部是為社團(tuán)成員服務(wù)的，是為團(tuán)內(nèi)的同學(xué)服務(wù)的，培養(yǎng)他們的服務(wù)意識(shí)，大局意識(shí)。對(duì)于部分有虛榮心的社團(tuán)干部，要及時(shí)提醒警告他們，修正自己的錯(cuò)誤思想，及時(shí)敲響警鐘。另外，還可以分散社團(tuán)干部之間的權(quán)力，讓社團(tuán)干部之間互相監(jiān)督制約，使社團(tuán)的發(fā)展真正走向科學(xué)化、合理化。與此同時(shí)，要定期對(duì)于學(xué)生社團(tuán)干部的行為進(jìn)行監(jiān)督，形成一套監(jiān)督體系，引導(dǎo)大家在社團(tuán)發(fā)展中團(tuán)結(jié)合作，共同促進(jìn)社團(tuán)的發(fā)展。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：

采用SPSS17.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，按照均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，以中位數(shù)表示。符合正態(tài)分布者組間差異采用單因素方差分析（One-way ANOVA），配對(duì)檢驗(yàn)方差齊者采用LSD法，方差不齊者采用Dunnett's T3法。以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)基因及引物序列

2 結(jié)果

2.1 針灸對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)炎癥評(píng)分的影響

將32只CIA大鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、艾灸組、針刺組，每組8只。

表2 各組大鼠治療前后炎癥評(píng)分比較（s）

表2 各組大鼠治療前后炎癥評(píng)分比較（s）

注：與模型組比較，△P＜0.001

治療后10.28±1.80 6.25±2.18△5.63±1.99△分組模型組針刺組艾灸組n 8 8 8治療前6.14±2.12 5.75±1.04 5.38±1.76

2.2 針灸對(duì)CIA大鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響

由圖5結(jié)果可見(jiàn)，與正常組比較，模型組TNF-α mRNA的表達(dá)增加（P＜0.01）；與模型組比較，針刺組與艾灸組TNF-α mRNA的表達(dá)均顯著降低（P＜0.01），艾灸組與針刺組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

由圖2結(jié)果可見(jiàn)，與正常組比較，模型組IL-17 mRNA的表達(dá)增加（P＜0.01）；與模型組大鼠比較，艾灸組和針刺組脾臟IL-17 mRNA的表達(dá)均顯著降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；針刺組與艾灸組組間比較對(duì)大鼠脾臟IL-17 mRNA的表達(dá)影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖1 各組大鼠淋巴細(xì)胞增殖能力變化

2.3 針灸對(duì)CIA大鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞IL-17、IL-12、IL-6、TNF-α、IFN-γ mRNA表達(dá)的影響

3)當(dāng)錨固段長(zhǎng)度較小時(shí)，處于彈性變形階段錨固劑-圍巖界面剪應(yīng)力可近似認(rèn)為是均布的。隨著錨固長(zhǎng)度的增加，錨固始端最大剪應(yīng)力值逐漸降低，界面剪應(yīng)力分布不均勻程度增加。

圖2 各組大鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞IL-17 mRNA的表達(dá)變化

圖3 各組大鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞IL-12 mRNA的表達(dá)變化

IL-12的表達(dá)受針刺和艾灸作用的效應(yīng)結(jié)果見(jiàn)圖3，與正常組比較，模型組IL-12 mRNA的表達(dá)增加（P＜0.01）；與模型組大鼠比較，艾灸組與針刺組脾臟IL-12 mRNA的表達(dá)均顯著降低（P＜0.01）；針刺組與艾灸組組間IL-12 mRNA的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

由圖4結(jié)果可見(jiàn)，與正常組比較，模型組IL-6 mRNA的表達(dá)增加（P＜0.01）；與模型組比較，針刺組與艾灸組IL-6 mRNA的表達(dá)均顯著降低（P＜0.01），艾灸組與針刺組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

將無(wú)菌條件下取的另一半脾臟剪成小塊，研磨后以無(wú)菌1′PBS液沖洗，沖洗液置于無(wú)菌離心管，加入淋巴細(xì)胞分離液5 ml，以1 500 rpm轉(zhuǎn)速離心20 min。用滴管取出中間白色云霧狀單個(gè)核細(xì)胞層，加入無(wú)菌1′PBS液，以1 500 rpm轉(zhuǎn)速離心8 min，去除液體，以上步驟重復(fù)2次，洗凈殘余的淋巴細(xì)胞分離液。

圖4 各組大鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞IL-6 mRNA的表達(dá)變化

使用MTT方法檢測(cè)CIA大鼠淋巴細(xì)胞增殖能力變化，由圖1可見(jiàn)，與正常組比較，模型組淋巴細(xì)胞的增殖能力增高（P＜0.01）；與模型組比較，艾灸組淋巴細(xì)胞的增殖能力下降（P＜0.01），針刺組則顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示艾灸能顯著降低脾淋巴細(xì)胞異常的增殖能力。

圖5 各組大鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞TNF-α mRNA的表達(dá)變化

由圖6結(jié)果可見(jiàn)，與正常組比較，模型組IFN-γ mRNA的表達(dá)增加（P＜0.01）；與模型組大鼠比較，艾灸組和針刺組脾臟IFN-γ mRNA的表達(dá)均顯著降低（P＜0.01）；針刺組在下調(diào)大鼠脾臟IFN-γ mRNA的表達(dá)上優(yōu)于艾灸組（P＜0.05）。

①應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)貧夂?、地形、地質(zhì)等自然條件和社會(huì)經(jīng)濟(jì)特點(diǎn)，合理規(guī)劃布局集流節(jié)灌工程。集流工程、蓄水工程、輸水工程和節(jié)灌工程要統(tǒng)一布置，相互銜接配套。

圖6 各組大鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞IFN-γ mRNA的表達(dá)變化

3 討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種手足對(duì)稱小關(guān)節(jié)的慢性炎癥病變，有反復(fù)發(fā)作、致殘率高的特點(diǎn)，是難治性疾病之一。RA屬于中醫(yī)“痹癥”范疇，病因病機(jī)為正虛邪侵，虛實(shí)夾雜，正氣虛損，腠理不固，致使風(fēng)寒濕熱之邪乘虛而入，壅塞經(jīng)絡(luò)，久而為痹。針灸能有效治療RA，緩解局部疼痛，改善關(guān)節(jié)活動(dòng)，可疏通經(jīng)絡(luò)、活血逐痹[11,22,23]。本實(shí)驗(yàn)取陽(yáng)陵泉、昆侖穴。陽(yáng)陵泉穴，為膽經(jīng)之合穴、膽之下合穴?！夺樉拇蟪伞费裕骸瓣?yáng)陵泉穴……主膝伸不得屈，髀樞膝骨冷痹，腳氣，膝股內(nèi)外廉不仁”?！躲~人腧穴針灸圖經(jīng)》中記載陽(yáng)陵泉穴具有“治膝伸不得屈，冷痹腳不仁”的作用。昆侖穴為足太陽(yáng)膀胱經(jīng)的經(jīng)穴，針灸昆侖穴可通利經(jīng)脈氣血，可奏通則不痛之效，發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛的作用[22]。

現(xiàn)代研究已證實(shí)針灸對(duì)人體各系統(tǒng)有廣泛的雙向良性調(diào)節(jié)作用，可通過(guò)調(diào)整內(nèi)分泌功能，改善機(jī)體的特異性和非特異性免疫功能[11,23]。臨床上應(yīng)用針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎也比較普遍，有肯定的療效[24-28]，同時(shí)也有較肯定的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證據(jù)，在CIA大鼠發(fā)病前施灸，大鼠的平均關(guān)節(jié)炎指數(shù)和組織病理學(xué)損害指數(shù)均顯著降低[10-12,28,29]。電針能減少CIA大鼠血清TNF-α、IL-1β和ICAM-1的含量[30]。針刺療法治療RA多配合灸法，灸療能減輕關(guān)節(jié)炎大鼠模型關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞的充血水腫，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜細(xì)胞增生，組織增生等滲出性病變，從而達(dá)到抗炎和增強(qiáng)免疫作用的主要機(jī)制[31]。在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)艾灸能減少CIA大鼠關(guān)節(jié)炎癥評(píng)分，艾灸具有通痹止痛、溫經(jīng)散寒的作用，利用艾絨或艾條點(diǎn)燃后熱力溫和而持久，易于滲透肌膚，利用艾火的熱力和艾條的藥物作用，在局部取穴，通過(guò)經(jīng)絡(luò)的傳導(dǎo)，疏風(fēng)通絡(luò)，運(yùn)行氣血，扶正祛寒，以達(dá)濡潤(rùn)溫煦筋肉的作用。

RA的發(fā)病與炎癥因子的作用密切相關(guān)。IL-17是一種Th17細(xì)胞分泌的重要的前炎癥細(xì)胞因子，IL-12是介導(dǎo)Th1細(xì)胞免疫應(yīng)答中關(guān)鍵的細(xì)胞因子，其在RA患者體內(nèi)均高表達(dá)[32,33]。研究發(fā)現(xiàn)伴隨RA患者IL-17高表達(dá)的還有IL-12、IFN-γ和IL-6的濃度，均顯著高于正常組，且中、重度活動(dòng)組血清IL-6、IL-17水平顯著高于低疾病活動(dòng)組，參與RA的發(fā)病并影響RA患者疾病活動(dòng)[33-35]，降低炎癥因子的水平有助于治療RA。針灸對(duì)機(jī)體的影響是通過(guò)調(diào)控神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)共同介導(dǎo)物質(zhì)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。針灸干預(yù)RA的研究多關(guān)注RA外周血炎癥因子的濃度，對(duì)脾臟單核細(xì)胞炎癥因子的研究尚不明確。在本研究中發(fā)現(xiàn)艾灸或針刺CIA大鼠的陽(yáng)陵泉和昆侖穴后，各治療組脾臟單個(gè)核細(xì)胞IL-17、IL-12、IL-6、TNF-α和IFN-γ炎癥因子的mRNA表達(dá)均下降，顯示出針刺或艾灸能有效抑制CIA大鼠的炎癥因子表達(dá)，從而起到調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的作用。近期研究中發(fā)現(xiàn)針灸電針佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠“足三里”和“昆侖”穴可降低脾臟細(xì)胞IL-6活性[36]，隔物溫和灸能夠降低TNF-α含量[37]，逆灸對(duì)隨后佐劑性關(guān)節(jié)炎早期和繼發(fā)期關(guān)節(jié)組織的保護(hù)作用可能與其降低異常升高的炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α有關(guān)[38]。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的免疫反應(yīng)和組織損害過(guò)程中，炎癥因子IL-1β和TNF-α發(fā)揮了協(xié)同致病作用[39]，IL-6可由T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、急性期反應(yīng)、促進(jìn)骨髓造血等方面均有重要作用。RA患者滑液中IL-6的水平顯著升高，與RA疾病活動(dòng)指數(shù)相關(guān)[40]。因此，針灸能通過(guò)抑制脾臟單個(gè)核細(xì)胞IL-17、IL-12、IL-6、TNF-α和IFN-γ炎癥因子的產(chǎn)生，是治療RA的重要有效方法，具有免疫調(diào)節(jié)作用。

脾在免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用，對(duì)機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要的調(diào)節(jié)作用。以脾臟為切入點(diǎn)，從免疫炎癥因子的表達(dá)研究針刺和艾灸干預(yù)CIA大鼠的效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)針灸能調(diào)節(jié)脾臟單個(gè)核細(xì)胞多種炎癥因子的表達(dá)，緩解關(guān)節(jié)炎模型大鼠體內(nèi)的免疫炎癥反應(yīng)，為我們進(jìn)一步了解機(jī)體免疫功能提供了思路和線索。

1 Pugner K M,Scott D I,Holmes J W,et al.The costs of rheumatoid arthritis:an international long-term view.Semin Arthritis Rheu.2000,29(5):305-320.

2 Lai N S,Tsai T Y,Li C Y,et al.Increased frequency and costs of ambulatory medical care utilization prior to the diagnosis of rheumatoid arthritis:a national population-based study.Arthrit Care Res.2014,66(3):371-378.

3 Keane J,Gershon S,Wise R P,et al.Tuberculosis Associated with Infliximab,a Tumor Necrosis Factor α-Neutralizing Agent.New Engl J Med.2001,345(15):1098.

4 Yoo D H,Prodanovic N,Jaworski J,et al.Efficacy and safety of CT-P13(biosimilar infliximab)in patients with rheumatoid arthritis:comparison between switching from reference infliximab to CT-P13 and continuing CT-P13 in the PLANETRA extension study.Ann Rheum Dis.2017,76(2):355.

5 Bongartz T,Sutton A J,Sweeting M J,et al.Anti-TNF antibody therapy in rheumatoid arthritisand the risk of serious infections and malignancies:systematic review and meta-analysis of rare harmful effects in randomized controlled trials.JAMA.2006,295(21):2275-2285.

6 Boelsterli U A.Mechanisms of NSAID-induced hepatotoxicity:focus on nimesulide.Drug Safety 2002,25(9):633-648.

7 高旭.免疫抑制劑聯(lián)合治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的毒副作用觀察.廣西醫(yī)科大學(xué),2010.

8 Peng C Y,Lei L,Ling H,et al.Study on the Effect of Moxibustion in Treating Rhreumatoid Arthritis Rats and Its Mechanism.針灸推拿醫(yī)學(xué)(英文版).2012,10(6):336-341.

9 羅磊,胡玲,宋小鴿,等.艾灸對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠跖關(guān)節(jié)中細(xì)胞因子的影響.環(huán)球中醫(yī)藥.2011,04(6):416-419.

10 高潔,歐陽(yáng)八四,葉曉群,等.電針對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠外周血與關(guān)節(jié)液中TNF-α、VEGF的影響.上海針灸雜志.2011,30(4):272-274.

11 王銀平,杜小正,張宗權(quán).針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎免疫調(diào)節(jié)機(jī)制研究進(jìn)展.上海針灸雜志2017,36(1):108-112.

12 余曙光,劉旭光,唐勇,等.IL-2在電針介導(dǎo)RA大鼠T細(xì)胞凋亡中的作用.中華中醫(yī)藥學(xué)刊2003,21(7):1055-1056.

13 方劍喬,馬桂芝,梁宜.電針足三里、三陰交穴治療大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎及其部分血液流變學(xué)機(jī)制.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào).2008,32(5):652-655.

14 吳煥淦,翁志軍,劉慧榮,等.基于免疫相關(guān)性疾病的艾灸鎮(zhèn)痛與抗炎免疫研究.世界中醫(yī)藥.2016,11(12):2505-2514.

15 方劍喬,邵曉梅,梁宜,等.電針治療CIA大鼠慢性炎癥及對(duì)COX-2的選擇性抑制作用[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào).2006,30(2):169-173.

16 鄭保主,胡玲,宋小鴿,等.艾灸對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠下丘腦POMCmRNA和PDYNmRNA表達(dá)的影響.中國(guó)針灸.2013,33(5):433-437.

17 張闊,徐媛,丁沙沙,洪壽海,趙雪,郭義.基于文獻(xiàn)研究針刺治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎選穴規(guī)律.中國(guó)針灸.2017,37(2):221-224.

18 羅磊,胡玲,何璐,等.艾灸對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響.針刺研究.2011,36(2):105-109.

19 張澍,李宗芳.脾臟研究的問(wèn)題與思考.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志.2015,32(2):230-231.

20 Swirski F K,Nahrendorf M,Etzrodt M,et al.Identification of Splenic Reservoir Monocytes and Their Deployment to Inflammatory Sites.Science.2009,325(5940):612-616.

21 徐艷明,榮曉鳳,譚洪發(fā),等.痹祺膠囊對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎CIA大鼠JAK-STAT信號(hào)通路的影響.免疫學(xué)雜志.2015,31(12):1072-1076.

22 祝驥,梁宜,許穎齡,等.電針足三里和昆侖對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的治療作用.中國(guó)醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜,2012,29(5):3694-3696,3701.23.

23 俞紅五,朱艷,潘喻珍,等.艾灸輔助治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者臨床療效觀察及機(jī)制探討.中國(guó)針灸.2016,36(1):17-20.

24 孫凡,李建武,石敏,等.隔物溫和灸對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血小板的影響.上海針灸雜志2013,32(2):123-125.

25 劉永鑫,劉詠梅,劉斌,等.改良溫和懸灸療法治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎60例.陜西中醫(yī)2012,(10):1398-1399.

26 倪文杰,段淑琴,王興.針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床應(yīng)用.針灸臨床雜志2009,25(4):45-47.

27 劉維,劉濱,王熠,等.針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎120例療效觀察.中國(guó)針灸,2003,23(10):577-578.

28 劉金洪,方劍喬,陳海英,等.直接灸對(duì)大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎的影響.中國(guó)中醫(yī)藥科技2001,8(3):137-138.

29 馮輝.針灸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展.上海針灸雜志.2017,36(4):504-512.

30 張瑞,郭麗紅,殷媛,等.電針對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中炎性細(xì)胞因子含量的影響.針刺研究,2016,41(1):51-54.

31 唐照亮,宋小鴿,王寧新,等.艾灸對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞凋亡及病理組織的觀察.中華中醫(yī)藥學(xué)刊.2004,22(2):226-227.

32 王秋燚,張小玲,寧喬怡,等.白細(xì)胞介素-17在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用進(jìn)展.風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎.2017,6(5):68-72.

33 袁琳,王曦,崔天盆,等.IL-12及Th1/Th2型細(xì)胞因子在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的作用.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué).2003,18(1):18-20.

34 劉娜.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎系統(tǒng)損害及疾病活動(dòng)與IL-6、IL-17、JAK3、STAT3、MMP-3、MMP-13等相關(guān)性臨床研究.安徽醫(yī)科大學(xué),2017.

35 謝有娣,金蕾,余奇文.RA患者滑膜液及血清中IFN-γ、IL-10、IL-12與TRAIL的病理學(xué)意義.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志.2007,23(6):536-537.

36 王瑞輝.電針對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠IL-1和IL-6活性的影響.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)2001,24(4):43-45.

37 李建武,劉建民.隔物溫和灸聯(lián)合甲氨蝶呤對(duì)RA模型大鼠關(guān)節(jié)腫脹及IL-1β、TNF-α的影響.上海針灸雜志.2008,27(11):32-34.

38 李曉泓,張露芬,郭順根,等.逆灸對(duì)隨后佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠早期及繼發(fā)期炎性細(xì)胞因子和局部足腫脹的影響.中國(guó)組織工程研究.2005,9(15):123-125.

39 Barrera P,Joosten L A B,Broeder A A D,et al.Effects of treatment with a fully human anti-tumour necrosis factor α monoclonal antibody on the local and systemic homeostasis of interleukin 1 and TNFα in patients with rheumatoid arthritis.Ann Rheum Dis.2001,60(7):660.

40吳曉惠,唐流剛,王標(biāo),等.滑液尿酸及白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α與膝骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)性研究.華西醫(yī)學(xué).2015,30(10):1862-1865.